Tetrahydrobiopterin (BH4) is a multifunctional cofactor of aromatic amino acid hydroxylases and nitric oxide synthase (NOS) as well as an intracellular antioxidant in animals. Through regulation of NOS activity BH4 plays a pivotal role not only in a variety of normal cellular functions but also in the pathogenesis of cardiovascular and neurodegenerative diseases, which develop under oxidative stress conditions. It appears that a balanced interplay between BH4 and NOS is crucial for cellular fate. If cellular BH4 homeostasis maintained by BH4 synthesis and regeneration fails to cope with increased oxidative stress, NOS is uncoupled to generate superoxide rather than NO and, in turn, exacerbates impaired BH4 homeostasis, thereby leading to cell death. The fundamental biochemical events involved in the BH4-NOS interplay are essentially the same, as revealed in mammalian endothelial, cardiac, and neuronal cells. This review summarizes information on the cellular BH4 homeostasis in mammals, focusing on its regulation under normal and oxidative stress conditions.
Anil K. Singh, Mrunalini M. Kapil, Department of Chemistry, Indian Institute of Technology Bombay - 400076, INDIA Purple membrane (PM, $\lambda$$_{max}$ 570 nm) of H. halobium on treatment with sulphuric acid changes its colour to blue ($\lambda$$_{max}$ 608 nm). The purple chromophore can be regenerated from the blue chromophore by exogeneous addition of anions such as CI$^-$ and HPO$_4^{2-}$. Chloride ion is found to be more effective than the dibasic phosphate ion in regenerating the purple chromophore. Nevertheless, one thing common to the anion regeneration is that both CI$^-$ and HPO$_4^{2-}$ show marked pH effect. At pH 1.0 the efficiency of regeneration of the purple chromophore is greater than at pH 2.0, for the same anion concentration. Fluorescence and circular dichroic studies indicate that the proteins do not undergo drastic changes at the secondary' or tertiary structure level and the native structure is preserved during this transition. However, chromophoric-site interactions between retinal and the apoprotein are affected during this colour transition. A molecular mechanism is advanced for this transition.
Shoot induction system was developed in the recalcitrant plant species, Brassica rapa ssp. rapifera by using optimum selection of profit organ, phytohormone combination, seedling age and kind of culture container. Out of in vitro cultured leaf segment, petiole, hypocotyl, and cotyledon with petiole, only cotyledon with petiole derived from 4 day-old seedlings induced multiple shoot. The optimum combination of auxin and cytokinin for the multiple shoot induction was MS medium containing 5mg/L BA and 0.5mg/L NAA. The major factors for multiple shoot propagation were part of plant organ, age of seedling, and ratio of auxin and cytokinin. In addition, shoot regeneration was promoted in the 100ml Erlenmeyer flask compared with the $90mm{\times}20mm$ Petri-dish. The induced shoots formed roots easy on MS medium containing 0.1mg/L IBA and the whole plants were successfully cultivated in soil.
Rugosa rose (Rosa rugosa) is cultivated as a garden flower and an important genetic resource for the breeding of roses (R. hybrida). This study describes culture conditions for high frequency plant regeneration from zygotic embryo explants via somatic embryogenesis in rugosa rose. Mature zygotic embryo, cotyledon, and radicle explants formed embryogenic calluses at frequencies of 38, 6.7, and 8.8% when cultured on half-strength Murashige and Skoog medium (${\frac{1}{2}}MS$) supplemented with 2.26, 9.05, and $9.05{\mu}M$ 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, respectively. Embryogenic calluses produced numerous somatic embryos, which then developed into plantlets on ${\frac{1}{2}}MS$ without growth regulators. Regenerated plantlets were grown to whole plants in a growth chamber.
We investigated the callus induction and plant regeneration ability of 16 maize genotypes, including the Korean inbred lines, using 9 to 15 day-old immature zygotic embryos from maize grown in pots and from field cultures. Immature zygotic embryos placed on MS medium supplemented with L-proline 0.7 g/L, MES 0.5 g/L, Dicamba 1.5 mg/L, 2,4-D 0.5 mg/L, $AgNO_3$ 4 mg/L, and sucrose 20 g/L, showed the highest frequency of callus induction. The highest number of shoots regenerated when the embryogenic callus were transferred to MS medium supplemented with 5 mg/L zeatin. The root formation was observed when shoots were grown on MS medium supplemented with 0.2 mg/L indole-3-butyric acid (IBA). Additionally, under the same culture conditions, immature zygotic embryos from maize grown in the field also had a high frequency of plant regeneration. Except one genotype, 15 genotypes showed callus induction and shoot regeneration. Among the 16 genotypes tested, H99, B98, HW3, and B73 yielded the best plant regeneration. H99 showed maximum shoot formation from the primary embryogenic callus. The results suggest that genotypes and growth conditions of the maize plant plays very important roles for enhancing the embryogenesis competence of immature zygotic embryos. The successful regeneration from immature zygotic embryos of maize inbred lines provides a basis for molecular breeding of new cultivars by genetic transformation.
In the field of the $CO_2$ absorption process using aqueous ammonia, the effects of regeneration pressure and temperature on $CO_2$ absorption performances of the aqueous ammonia were investigated. The absorbents were prepared by dissolving ammonium carbonate solid in water to grant the resulted solution 0.5 $CO_2$ loading ($mol\;CO_2/mol\;NH_3$) and various ammonia concentration (14, 20, 26 and 32 wt%). As-prepared absorbents were regenerated at high pressure and temperature (over $120^{\circ}C$ and 6 bar) before the absorption test. The absorption test was carried out by injecting the simulated gas that contains 12 vol% of $CO_2$ into a bubbling reactor. The introduction of 26 wt% of the ammonia concentration for $CO_2$ absorption test resulted in the higher absorption capacities than other experimental conditions. In particular, when the absorbents with 26 wt% of the ammonia were regenerated at $150^{\circ}C$ and 14 bar, the highest absorption capacity, $45ml\;CO_2/g$, was obtained. According to the analysis of absorbents using acid-base titration, the ammonia loss during the regeneration of the absorbents with a fixed ammonia concentration decreased as the regeneration pressure increased, while it increased as the regeneration temperature increased. In the condition of fixed regeneration pressure and temperature, as expected, the ammonia loss increased as the ammonia concentration increased. The measured $CO_2$ loadings and ammonia concentrations of absorbents were compared to the values calculated by Electrolyte NRTL model in Aspen Plus.
Callus culture initiation of strawberry (Fragaria${\times}$ananassa Duch.) was investigated at different Murashige and Skoog (MS) medium strengths, types and concentrations of plant growth regulators, and incorporating a cold pretreatment period to determine the optimal nutritional and environmental conditions. No high quality callus was induced on MS media without auxin regardless of medium strength. When 6-benzylaminopurine (BA) was combined with indole acetic acid (IAA), naphthalene acetic acid (NAA), and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), high quality callus were highly induced compared to medium supplemented with auxin alone. When $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ BA was combined with IAA, NAA, and 2,4-D, high quality callus induction was more effective than the medium supplemented with the other BA concentrations. The best combination of auxin and cytokinin for high quality callus induction was $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ NAA and $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ BA. Although the differences in callus induction were not significant, high quality callus induction at half strength MS medium was more effective than at full strength medium. When $30g{\cdot}L^{-1}$ sucrose was added to the half strength MS medium, the rate of high quality callus induction increased. The optimum cold pretreatment temperature and period for high quality callus induction were $4^{\circ}C$ and 72 h, respectively. Regeneration rate of high quality callus increased in MS medium supplemented with thidiazuron.
An efficient protocol for in vitro organogenesis was achieved from callus-derived immature and mature leaf explants of Momordica charantia, a very important vegetable and medicinal plant. Calluses were induced from immature leaf explants excised from in vitro (15-day-old seedlings) mature leaf explants of vivo plants (45 days old). The explants were grown on Murashige and Skoog (MS) medium with Gamborg (B5) vitamins containing 30 g $1^{-1}$ sucrose, 2.2 g $1^{-1}$ Gelrite, and 7.7 lM naphthalene acetic acid (NAA) with 2.2 ${\mu}M$ thidiazuron (TDZ). Regeneration of adventitious shoots from callus (30-40 shoots per explant) was achieved on MS medium containing 5.5 ${\mu}M$ TDZ, 2.2 ${\mu}M$ NAA, and 3.3 ${\mu}M$ silver nitrate ($AgNO_3$). The shoots (1.0 cm length) were excised from callus and elongated in MS medium fortified with 3.5 ${\mu}M$ gibberellic acid ($GA_3$). The elongated shoots were rooted in MS medium supplemented with 4.0 ${\mu}M$ indole 3-butyric acid (IBA). Rooted plants were acclimatized in the greenhouse and subsequently established in soil with a survival rate of 90%. This protocol yielded an average of 40 plants per leaf explant with a culture period of 98 days.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Osteoarthritis (OA) is a major public health issue in Japan and other countries, and foods that prevent or treat OA are in strong demand. Proteins and peptides in chicken meat and bones are known for being rich in functional and nutritional ingredients for the improvement of osteoporosis. We speculated that chicken legs, a food consumed in many regions of the world, may also contain such ingredients. In this study, we aim to (i) evaluate the effect of chicken leg extract (CLE) on the promotion of cartilage matrix production and (ii) identify the active ingredient in CLE that contributes to this function. MATERIALS/METHODS: Artificial CLE digest was prepared, and the acid mucopolysaccharide production-promoting activity of the CLE digest was evaluated by alcian blue staining of ATDC5 cells. CLE was orally administered to rabbits with burr holes in the knee joint of the femur, and the degree of regeneration of cartilage matrix was evaluated. Furthermore, we investigated orally administered CLE-derived peptides in human plasma using LC-MS. From measuring the acid mucopolysaccharide production-promotion activity of these peptides, a molecule considered to be an active ingredient in the CLE digest was identified. RESULTS: CLE digest promoted acid mucopolysaccharide production and facilitated regeneration of cartilage matrix in in vitro and in vivo experiments. Four peptides including phenylalanyl-hydroxyproline (Phe-Hyp) were detected as CLE-derived peptides in human plasma. The effect of CLE was inferred to be due to Phe-Hyp, which was confirmed to be present in the CLE digest. CONCLUSIONS: It was shown that CLE stimulated the production of articular cartilage matrix both in vitro and in vivo, and that CLE could be an effective food for preventing or treating OA. Furthermore, only Phe-Hyp was confirmed as the active compound in the CLE digest, suggesting that the activity of CLE was due to Phe-Hyp.
Sarcopenia is an age-related, progressive skeletal muscle disorder involving the loss of muscle mass and strength. Previous studies have shown that γ-aminobutyric acid (GABA) from fermented oysters aids in regulatory T cells (Tregs) cell expansion and function by enhancing autophagy, and concomitantly mediate muscle regeneration by modulating muscle inflammation and satellite cell function. The fermentation process of oysters not only increases the GABA content but also enhances the content of branched amino acids and free amino acids that aid the level of protein absorption and muscle strength, mass, and repair. In this study, the effect of GABA-enriched fermented sarco oyster extract (FSO) on reduced muscle mass and functions via Treg modulation and enhanced autophagy in aged mice was investigated. Results showed that FSO enhanced the expression of autophagy markers (autophagy-related gene 5 [ATG5] and GABA receptor-associated protein [GABARAP]), forkhead box protein 3 (FoxP3) expression, and levels of anti-inflammatory cytokines (interleukin [IL]-10 and transforming growth factor [TGF]-β) secreted by Tregs while reducing pro-inflammatory cytokine levels (IL-17A and interferon [IFN]-γ). Furthermore, FSO increased the expression of IL-33 and its receptor IL-1 receptor-like 1 (ST2); well-known signaling pathways that increase amphiregulin (Areg) secretion and expression of myogenesis markers (myogenic factor 5, myoblast determination protein 1, and myogenin). Muscle mass and function were also enhanced via FSO. Overall, the current study suggests that FSO increased autophagy, which enhanced Treg accumulation and function, decreased muscle inflammation, and increased satellite cell function for muscle regeneration and therefore could decrease the loss of muscle mass and function with aging.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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