Glycated hemoglobin ($HbA_{1c}$) has been commonly used to screen and diagnose for patients with diabetes mellitus. Here the accelerated procedure of microwave-assisted sample treatment from acid hydrolysis to enzyme digestion followed by isotope dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry (ID-LC-MS/MS) was optimized and applied to measure $HbA_{1c}$ in an effort to speed up analysis time. First, two signature peptides of $HbA_{1c}$ and hemoglobin $A_0$ were certified with amino acid analysis by setting optimized acid hydrolysis conditions to $150^{\circ}C$, 1.5 h and $10{\mu}M$ sample concentration in 8 M hydrochloric acid. Consequently, the accurate certified peptides above were used as calibration standards to implement the proteolytic procedure with endoproteinase Glu-C at $37^{\circ}C$, 700 W for 6 h. Compared to the traditional method, the microwave heating not only shortened dramatically sample preparation time, but also afforded comparable recovery yields. The optimized protocol and analytical conditions in this study are suitable for a primary reference method of $HbA_{1c}$ quantification with full SI-traceability and other similar proteins in complex biological samples.
Hyper-thermal (HT) acid hydrolysis of red seaweed Gelidium amansii was performed using 12% (w/v) slurry and an acid mix concentration of 180 mM at 150℃ for 10 min. Enzymatic saccharification when using a combination of Celluclast 1.5 L and CTec2 at a dose of 16 U/ml led to the production of 12.0 g/l of reducing sugar with an efficiency of enzymatic saccharification of 13.2%. After the enzymatic saccharification, 2,3-butanediol (2,3-BD) fermentation was carried out using an engineered S. cerevisiae strain. The use of HT acid-hydrolyzed medium with 1.9 g/l of 5-hydroxymethylfurfural showed a reduction in the lag time from 48 to 24 h. The 2,3-BD concentration and yield coefficient at 72 h were 14.8 g/l and 0.30, respectively. Therefore, HT acid hydrolysis and the use of the engineered S. cerevisiae strain can enhance the overall 2,3-BD yields from G. amansii seaweed.
The dilute-acid pretreatment/hydrolysis of hemicellulose in oak wood using a percolation reactor was investigated. The experimental conditions ranged 160∼180$^{\circ}C$ and 0.05∼0.2 wt.% sulfuric acid. XMG(xylan+mannan+galactan) recovery was higher when sulfuric acid was used as leaching solvent than water. Also it was important for high XMG recovery to keep leaching temperature higher after reaction. XMG recovery was decreased as the size of wood chips was increased. At an optimum condition (reaction condition= 170$^{\circ}C$, 0.1% sulfuric acid, 1ml/min, 10min, leaching condition=0.1% sulfuric acid, 2mL/min, 20 min), the product yield and the sugar concentration were about 92% and 2.7%, respectively.
A new synthetic method for tiaprofenic acid, which is a potent anti-inflammatory agent, was described. Friedel-Crafts reaction of thiophene with ethyl ${\alpha}-chloro-{\alpha}-(methylthio)$ acetate (1) gave ethyl ${\alpha}-methylthio-2-thiopheneacetate$ (3). Ethyl ${\alpha}-methyl-2-thiopheneacetate$ (5) was prepared by treatment of (3) with NaH and MeI, followed by desulfurization with zinc dust-acetic acid of the resultant ethyl ${\alpha}-methyl-{\alpha}-methylthio-2-thiopheneacetate$ (4). Tiaprofenic acid (7) could be easily synthesized by benzoylation of (5) and hydrolysis of the resultant ethyl $5-benzoyl-{\alpha}-methyl-2-thiopheneacetate$ (6).
The chemical reduction of Pseudomonas syringae subsp. phaseolicola alginates produces neutral polymers of D-mannose and L-gulose in source specific ratios. L-Gulose was highly sensitive to degradation by 1N HCl at $100^{\circ}C$. As hydrolysis time increased, gulose recovery decreased to 22% after 4 hr, whereas 98% of the D-mannose was recovered under the same conditions. Thin layer chromatography showed the formation of a second product upon L-gulose acid hydrolysis. This new product had a rate of flow (Rf) value of 0.58, identical to that of 1,6 anhydro-${\beta}$-D-mannopyranose and very close to that of 1,6 anhydro-${\beta}$-D-glucopyranose (Rf=0.60). Because of the difference in acid sensitivity between L-gulose and D-mannose, normal acid hydrolytic techniques applied to reduced alginates produces erroneous mannuronic acid (M): guluronic acid (G) ratio's unless one accounts for the differential rates of destruction of each sugar.
본 연구는 폐기되는 돈혈을 식품소재로 활용하고자 단백질 가수분해효소 5종을 처리하여 품질특성 변화를 조사하였다. 그 결과 KMFP-15(E)로 가수분해할 때 pH 7.3, 총 고형분 함량 $24.3^{\circ}Brix$ 및 유리아미노산 함량 4,944 mg%로 가장 높은 고형분 함량 및 유리아미노산 함량을 나타내었다. KMFP-15(E) 농도에 따른 영향을 조사한 결과 처리농도가 증가함에 따라 총 고형분 함량 및 유리아미노산이 증가하였으며, 유리아미노산은 KMFP-15(E) 0.2% (w/v)첨가구에서 7,224 mg%로 0.3% (w/v)첨가구와 유의적인 차이를 나타내지 않아 0.2% (w/v)로 설정하였다. KMFP-15(E)의 가수분해 시간에 따라 유리아미노산 함량은 4시간에서 7,404 mg%로 가장 높게 나타났으며, 시간이 경과할수록 감소하는 경향을 보여 최적 가수분해시간은 4시간으로 설정하였다. 상기 설정된 가수분해 조건을 통해 제조된 돈혈 분말(PBHP)에는 조단백질 및 아미노산과 철분, 칼륨, 아연 등 다량의 무기질이 함유되어 있는 것으로 나타났으며 특히, 철분의 함량은 1,983 mg%로 높게 나타나 식품소재로 활용 가능한 것으로 나타났다. 이상의 결과 폐기되는 돈혈의 활용방안으로 다양한 가수분해조건중 효소 KMFP-15(E) 0.2% (w/v)를 첨가하여, 4시간에서 가수분해 하였을 때 전반적 품질 특성이 가장 우수하여 향후 돈혈을 이용해 단백질 보충, 아미노산소재 및 철분강화제 등의 식품 및 의약품 소재로의 고부가가치 창출이 가능할 것으로 판단되었다.
분자구조가 서로 다른 7종의 폴리올에스터 오일에 대한 가수분해속도가 측정되었다. 사용된 폴리올에스터는 2가 및 4가의 다가알콜과 서로 다른 탄소수의 직쇄 흑은 분기지방산으로 합성된 다가에스터 화합물이며, 이들의 가수분해반응은 p-톨루엔설폰산을 촉매로 사용하는 온건한 산성조건하에서 수행되었다 폴리올에스터 오일의 가수분해과정에서 생성되 는 부분에스터와 다가알콜 및 지방산 등의 구조가 확인되었고 반응시간의 경과에 따른 가수분해 생성물들의 농도가 측정되었다. 각 반응단계의 속도상수는 속도식과 실험적으로 얻은 각 화합물들의 농도로부터 최소제곱법에 의해 구하였고, 얻어진 가수분해 속도상수가 서로 비교되었다. 폴리올에스터 오일의 가수분해 속도는 지방산의 분자구조에 가장 크게 영향을 받는다. 즉, 직쇄지방산에 의한 폴리올에스터 오일은 분기지방산에 의한 폴리올에스터 오일보다 가수분해속도가 매우 마르며, 분기지방산에 의한 폴리을에스터 오일 중에서는 가지사슬의 모양과 위치가 가수분해속도에 영향을 미치는 것으로 확인되었다. 본연구에서 사용된 7종의 폴리올에스터 오일에 대한 가수분해속도는 물분자가 폴리올에스터 오일의 카르보닐 탄소를 공격할 때 인접한 가지사슬에 의한 입체장애효과를 비교함으로써 효과적으로 설명할 수 있다.
물고기 기름을 구성하고 있는 15종류 지방산에 대한 mol수와 가수분해 시간 사이의 함수관계를 대수함수식, $S_i=-{\alpha_i}1n(t)+{\beta_i}$로 나타내었다. 동일 가수분해 시간에서 각 지방산에 대한 대수함수식의 $S_i$ 값과 실측치 사이의 오차가 15 종류 지방산 모두에 대하여 $5\%$ 이내에 분포되었다. 각 지방산의 mol수 $S_i$와 가수분해 시간 사이의 대수함수식으로부터 각 지방산에 대한 가수분해 반응속도를 지방산 mol 수의 지수함수 관계식, $v_i={\gamma_i}exp(\frac{S_i}{\alpha_i})$로 유도하였다. 또한 유도된 $S_i$와 t 사이의 함수관계식으로부터 물고기 기름을 구성하는 15 종류 지방산 각각에 대한 가수분해율을 분석하였다. 가수분해 시간 48시간에서 가수분해율이 $70\%$ 이상인 지방산은 C14:0, C16:0, C18:0, C16:1, C18:1(n-7) 및 Cl8:1(n-9)이였으며, 가수분해율이 $40\%$ 내지 $60\%$ 사이에 분포되어 있는 지방산은 C20:1, C22:1, C18:3, C18:4, C20:4 및 C20:5이였으며, 가수분해율이 $30\%$ 내외인 지방산은 C2l:5와 C22:5이였으며, $20\%$ 이하인 지방산은 C22:6이였다.
The conversion characteristics of the major components of Liriodendron tulipifera were investigated during acid-catalyzed organosolv pretreatment. Glucan in L. tulipifera was slowly hydrolyzed, whereas xylan was rapidly hydrolyzed. Simultaneous hydrolysis and degradation of xylan and lignin occurred; however, after complete hydrolysis of xylan at higher temperatures, lignin remained and was not completely degraded or solubilized. These conversion characteristics influence the structural properties of glucan in L. tulipifera. Critical hydrolysis of the crystalline regions in glucan occurred along with rapid hydrolysis of the amorphous regions in xylan and lignin. Breakdown of internal lignin and xylan bonds, along with solubilization of lignin, causes destruction of the lignin-carbohydrate complex. Over a temperature of 160℃, the lignin that remained was coalesced, migrated, and re-deposited on the surface of pretreated solid residue, resulting in a drastic increase in the number and content of lignin droplets. From the results, the characteristic conversions of each constituent and the changes in the structural properties in L. tulipifera effectively improved enzymatic hydrolysis in the range of 140℃-150℃. Therefore, it can be concluded that significant changes in the biomass recalcitrance of L. tulipifera occurred during organosolv pretreatment.
본 연구에서는 lipase를 이용해서 ricinoleic acid를 대량생산하기 위해 피마자유의 완전가수분해 조건을 찾고자 하였다. 널리 알려진 lipase CR, lipase CC, lipase PP를 대상으로 피마자유의 가수분해의 가능성을 시험하고, 유기용매를 사용함으로써 가수분해도를 향상시킬 수 있음을 확인하였다. 일반적으로 lipase의 활성을 감소시키는 극성용매의 경우 피마자유의 가수분해에 있어서도 효소의 활성을 감소시켰고, 물과 섞이지 않는 hydrophobic solvent가 피마자유의 가수분해도를 크게 증가시키는 것을 확인하였다. 본 연구에서는 isopropyl ether의 효과가 가장 크며, 조건에 따라 가수분해도를 두 배 이상 증가시킨다는 것을 확인하였다. 그리고 유기용매를 사용함으로써 pH의 영향을 바꾸거나 감소시킬 수 있다는 사실도 확인하였다. 용매와 물의 부피비에 의해서 가수분해가 영향을 받는다는 사실과 특히 유기용매보다는 물의 양에 절대적으로 영향받는다는 사실을 발견하였다. 하지만, 물과 유기용매의 부피비와 함께 lipase와 피마자유의 무게비도 매우 중요하다는 것을 확인하였다. 30$^{\circ}C$에서 isopropyl ether를 사용할 경우 무게 비로 2 wt%일 때는 약 82%, 4 wt% 이상의 lipase CC나 lipase CR을 사용하면 피마자유가 완전히 가수분해되는 사실을 발견하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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