본 연구에서는 이미 항산화 효과로 알려져 있는 대두와 약성이 탁월한 약콩에서 AChE 활성 억제효과와 Free radical scavenger 효과를 노화로 인한 질병 예방효과에 대한 기초자료를 제공하고자 수행하였다. 1. 대두 열탕 추출물의 경우 저농도인 1, 0.1 mg/$m\ell$에서는AChE의 활성 억제 효과가 메탄을 추출물보다 높았다. (P<0.001) 2. 대두, 약콩 메탄올 추출물에서는 고농도인 5 mg/$m\ell$에서 각 시료의 효과가 62.0$\pm$2.43%, 65.0$\pm$3.29%로 비슷했으나 저농도인 0.1 mg/$m\ell$에서는 약콩의 경우 25.5$\pm$0.94%로 약콩이 대두에 비해 유의적인 AChE 억제효과를 나타냈다. (p<0.001) 3. 시간에 따른 Free radical scavenger효과는 비타민 C의 경우 시간에 따라 비슷한 효과를 보였으나 대두와 약콩은 incubating 시간에 따라 free radical 억제효과가 증가해 높은 항산화 효과를 볼 수 있었다. 4. 대두, 약콩 메탄올 추출물에서는 약콩이 고농도인 5mg/$m\ell$에서 약4배 정도의 효과를 보였으며 Free radical scavenger의 50%효과를 나타내는 $IC_{50}$/에서는 약 10배 정도로 높은 Free radical scavenger 효과를 나타내 약콩이 대두에 비해 유의적으로 높은 효과를 나타내었다. 결론적으로, 대두와 약콩의 추출물은 AChE 활성억제효과에 있어서 좋은 효과를 나타내며 또한 노화의 원인과 질병의 원인이 되는 free radical을 억제하는 효과를 가지고 있어 노인성 치매를 비롯하여 파킨슨씨병, 뇌허혈 및 뇌졸중과 같은 각종 노인성 질환예방에 도움이 될 것으로 보인다.
유기인계나 카바메이트 살충제는 신경전달계 효소인 Acetylcholinesterase(AchE)를 저해하므로 농산물중에서 농약의 잔류여부 확인이 가능하다. 이러한 바이오센서는 환경 관리를 위한 민감한 센서로 사용될 수 있으며, 최근에는 AchE를 이용한 잔류농약을 측정할 수 있는 바이오센서 기술이 주목을 받고 있다. 우리는 최근에 감광성고분자물질인 고정화물질을 이용하여 광기교화반응에 의해 AchE를 막에 고정화시켜 잔류농약을 측정할 수 있는 바이오센서를 개발하였다. 고정화시킨 효소는 $4^{\circ}C$에서 6개월 동안 안정하였으며, 유기인계와 카바메이트계의 농약에 대한 반응에서도 기존의 용액형태의 효소보다 민감한 반응을 보였다. 또한 본 연구개발로 제작된 바이오센서에 의한 잔류농약 측정법은 용액형태의 효소에 의한 잔류농약 측정법보다 신속 간편하여 5분 안에 잔류농약에 대한 효소의 억제율을 측정할 수 있었으며, chlorpyrifos, cabaryl, carbofuran methidathion에 대해 농약의 검출 능력이 정밀분석법에 의한 검출한계에 근접한 것으로 나타났다
파라치온에 노출된 붕어의 뇌, 안구, 근육 및 혈청의 AChE 활성 변화를 조사한 결과 파라치온 $63{\mu}g/L$ 농도 이상에서 유의하게 감소하는 경향을 보였다. 실험종료 시 AChE 활성은 뇌에서 79.1~92.4%, 안구에서 76.0~91.5%, 근육에서 89.7~97.6% 및 혈청에서 68.9~78.0% 감소하였다. 실험기간동안 유의한 생존율 변화는 관찰되지 않았으나, 유영이상 및 경련을 보였다. 또한 파라치온에 노출된 붕어의 형태변화는 척추측만(scoliosis)이 관찰되었는데 이러한 변화는 파라치온 $190{\mu}g/L$ 농도는 15%, $380{\mu}g/L$에서는 75%로 관찰되었다. 따라서 붕어의 AChE 활성과 그 밖의 행동 및 형태적 특성은 자연수계에서 파라치온 오염을 추정할 수 있는 생물학적 모니터닝 도구로 활용할 수 있다.
아세틸콜린에스터라아제(AChE)저해제에 의한 아세틸콜린 분해의 억제는 알츠하이머 질병의 환자들을 위한 치료 방법 중의 하나이다. 새로운 AChE 저해제를 개발하여 항 치매성 대체 의약품생산에 응용하기 위해, 전보에서는 다양한 곡류와 두류로부터 AChE 저해활성이 우수한 시료로 수수를 선발하여 추출 최적조건을 조사하였고 영양성 및 생리기능성 등을 조사하였다. 본 연구에서는 AChE 저해제를 함유한 수수 메탄올 추출물의 물리화학적 성질과 안정성을 조사하였다. 수수 메탄올추출물은 물, 메탄올과 DMSO등에 잘 녹았고, 215nm과 282nm의 최대흡수파장을 갖고 있었다. 또한, 추출물은 20-$100^{\circ}C$와 pH 2.0-10.0에서 1시간동안 안정 하였다. 수수 메탄올추출물을 이용하여 시제품을 제조한 후 $20^{\circ}C$와 $40^{\circ}C$에서 8주간 저장하였을 때 모두 생균수와 pH에 변화가 없이 안정하였고 기호도도 우수하게 유지되었다.
Luo, Heng;Li, Changtian;Kim, Jin Cheol;Liu, Yanpeng;Jung, Jae Sung;Koh, Young Jin;Hur, Jae-Seoun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권2호
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pp.161-166
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2013
At present, acetylcholinesterase (AChE) inhibitors are the first group of drugs to treat mild to moderate Alzheimer's disease (AD). Although beneficial in improving cognitive and behavioral symptoms, the effectiveness of AChE inhibitors has been questioned since they do not delay or prevent neurodegeneration in AD patients. Therefore, in the present study, in order to develop new and effective anti-AD agents from lichen products, both the AChE inhibitory and the neuroprotective effects were evaluated. The AChE inhibitory assay was performed based on Ellman's reaction, and the neuroprotective effect was evaluated by using the MTT method on injured PC12 cells. One AChE inhibitor ($IC_{50}$ = 27.1 ${\mu}g/ml$) was isolated by means of bioactivity-guided isolation from the extract of lichen-forming fungus Cladonia macilenta, which showed the most potent AChE inhibitory activity in previous screening experiment. It was then identified as biruloquinone by MS, and $^1H$- and $^{13}C$-NMR analyses. The inhibitory kinetic assay suggested that biruloquinone is a mixed-II inhibitor on AChE. Meanwhile, biruloquinone improved the viability of the $H_2O_2$- and ${\beta}$-amyloid-injured PC12 cells at 1 to 25 ${\mu}g/ml$. The protective effects are proposed to be related to the potent antioxidant activities of biruloquinone. These results imply that biruloquinone has the potential to be developed as a multifunctional anti- AD agent.
해양오염의 진단을 위한 생화학적 오염지표 설정의 기초 연구의 일환으로, 오염이 심각한 서해(또는 황해)산 넙치(Paralchthys olvaceus)의 노 및 근육중의 아세틸콜린에스테라아제(AChE) 및 무털릴콜린에스테라아제(butyrylcho-linesterase:BChE)의 활성, 그리고 전산탈수소효소(lactate dehydrogenase:LDH)의 활성을 분석${\cdot}$평가하였다. 서해안의 양식산의 넙치의 뇌 및 근육증의 AChE의 활성은 동해안의 포항의 자연산 넙치의 노 및 근육의 AChE의 활성 대비 각각 40-50% 미 40-55% 정도나 유의적으로 저하되었을 뿐만 아니라 서해안의 자연산 넙치의 뇌 및 근욱중의 AChE의 활성 대비 각각 15-40% 및 25-35% 정도나 유의적으로 저하되었다. 또 서해안의 양식산 넙치의 뇌 및 근육중의 BChE의 활성은 동해안 포항의 자연산 넙치의 뇌 및 근육중의 BChE의 활성 대비 각각 70-75% 및 65-75% 정도나 유의적으로 저하되었ㅇ르 뿐만아니라 서해안의 자연산 넙치의 뇌 및 근육중의 BChE의 활성 대비 각각 50-75% 및 45-50% 정도나 유의적으로 저하되었다. 한편 서해안의 양식산 넙치의 혈약중의 LDH의 활성은 동해안 포항의 자연산 넙치의 혈액중의 LDH의 활성 대비 10-50%정도나 유의적으로 증가하였을 뿐만 아니라 서해안의 자연산 넙치의 혈액중의 LDH의 활성 대비 20-25% 정도나 유의적으로 증가하였다. 따라서 서해안의 양식산 넙치의 오염 뿐만 아니라 자연산 넙치의 오염 가능성도 있다는 사실을 알 수 있다.
유기인계 살충제인 chlorpyrifos에 대한 배추좀나방의 저항성 원인을 구명하기 위하여 저항성 인자로 알려진 두 가지 무독화 효소, esterases와 glutathione- S-trasferase(GST)의 활성과 작용점 효소인 acetylcholinesterase(AChE)의 insensitivity 정도를 측정하였다. 또한 chlorpyrifos와 작용점이 동일한 계통의 살충제에 대한 저항성 발달과의 상관관계를 조사하여 교차저항성 발달 특성을 검정하였다. 감수성 배추좀나방에 chlorpyrifos의 아치사량을 처리하여 160배의 저항성을 나타내도록 선발하여 실험에 사용하였다. 저항성 계통의 GST 활성은 감수성 계통의 GST 활성에 비하여 1.7배 높았으나, 감수성 계통과 저항성 계통간에 esterases 활성 차이는 없었다. 또한 chlorpyrifos의 작용점인 AChE insensitivity 측정결과 저항성 계통이 감수 성계통보다 11.6배 높았다. Chlorpyrifos 저항성 계통은 AChE을 저해하는 것으로 알려진 유기인계 및 카바 메이트계 살충제인 dichlorvos, dimethylvinphos, carbofuran에 대해서도 각각 33.6배, 17.6배, 18.7배의 insensitivity를 나타내었다. 그러나 동일한 작용점을 저해하는 phenthoate-oxon에 대해서는 1.7배의 낮은 insensitivity를 보였다. 또한 이들 약제들에 대한 교차저항성 발달정도를 측정한 결과, chlorpyrifos 저항성 계통은 dichlorvos, dimethylvinphos, carbofuran에 대하여도 각각 82배, 47배, 42배의 높은 교차저항성 발달을 나타내었으나, phenthoate에 대해서는 2.3배로 낮은 교차저항성 발달을 보여 작용점이 동일한 유사계열 약제들이라도 저항성을 유발하는 기작에는 서로 큰 차이가 있을 수 있음을 확인할 수 있었다. 본 실험 결과 AChE insensitivity 와 저항성 발달비 간에는 정의상관관계$(r=0.9951^{**},\;p^{(0.01)}$를 보이는 것으로 나타났는데, 이는 유기인계 및 카바메이트계 살충제의 저항성 발달이 AChE에 대한 insensitivity 정도와 관련 있음을 시사하는 것이다. 본 연구의 결과를 통하여 chlorpyrifos에 대한 배추좀나방의 저항성 발달은 작용점인 AChE에 대한 약제의 insensitivity가 주 요인 중 하나이며, 무독화 효소 중 GST 활성증가가 부가적인 요인이 될 수 있음을 확인할 수 있었다.
To investigate the diagnostic accuracy and applicability of barium enema(BE) and rectal suction biopsy with acetyl cholinesterase(AChE) histochemistry in the diagnosis of neonatal Hirschsprung's disease(HD), we retrospectively reviewed the findings of BE and AChE staining in 96 neonates with suspected HD during a 10-year period from January 1991 to December 2000. Sixty-nine cases of HD(58 males and 11 females) and 27 cases of non-HD are included in this study. In regard to BE, HD was based on definite transitional zone, suspicious HD on reversed rectosigmoid index(RSI <1), and non-HD on normal RSI(RSI>1). The histochemical criterion used for the diagnosis of HD was that of Chow et al(1977), i.e., the presence of many coarse discrete cholinergic nerve fibers in the muscularis mucosae and in the immediately subjacent submucosa regardless of infiltration of cholinergic nerve fibers in the lamina propria. Of 66 neonates with HD who underwent BE, transitional zone was identified in 33 cases(50 %) and reversed RSI in 19 cases(21 %), microcolon in 4 cases and normal finding in 10 cases(15 %) while of 27 neonates with non-HD, there was normal finding in 16 cases and reversed RSI in 9 cases(41 %). Thus diagnostic accuracy based on transitional zone was 64 %. The positive predictive value of reversed RSI for the diagnosis of HD was 68 %. Of 42 neonates with HD who underwent AChE histochemistry, there were 41 AChE-positive reactions and one AChE-negative reaction in a neonate with total colonic aganglionosis, while of 27 cases of non-HD, there were one equivocal AChE-positive reaction and 26 AChE-negative reactions. Thus AChE histochemical study showed a 97 % diagnostic accuracy with a 98 % sensitivity and a 96 % specificity. In conclusion, we believe that BE is valuable as a first diagnostic step since about 80 % of neonates with HD show significant radiologic findings such as a transitional zone or reversed RSI. AChE histochemical study was a more reliable diagnos tic tool showing a 97 % diagnostic accuracy, and is part.
There is significant interest in finding new sources of acetylcholinesterase (AChE) inhibitors for use in treating Alzheimer's disease, since only a few AChE inhibitors are available for clinical use, such as galanthamine, physostigmine, and tacrine. The ethanol extract of Chrysanthemum indicum Linne flowers was analyzed and found to markedly decrease AChE activity. Acaciin and $acacetin-7-O-{\beta}-D-galactopyranoside$ were identified as the active compounds responsible for the AChE inhibition by using an activity-guided fractionation strategy. The relationship between structure and activity for five flavonoids (acaciin, $acacetin-7-O-{\beta}-D-galactopyranoside$, luteolin, and two other commercially available flavonoids, i.e., apigenin and acacetin) was also investigated, revealing that the presence of methoxy groups at C-4' in the B ring and a sugar at O-7 in ring A appear to be essential for the inhibition of AChE.
A potentiometric flow injection biosensor for the analysis of anti-cholinesterases (anti-ChEs), based on inhibition of enzyme activity, was developed. The sensor system consists of a reactor with acetylcholinesterase (AChE) immobilized on controlled pore glass and a detector with an $H^{+}-selective$ PVC-based membrane electrode. The principle of the analysis is based on the fact that the degree of inhibition of AChE by an anti-ChE is dependent on the concentration of the anti-ChE in contact with AChE. The sensor system was optimized by changing systematically the operating parameters of the sensor to evaluate the effect of the changes on sensor response to ACh. The optimized biosensor was applied to the analysis of paraoxon, an organophosphorus pesticide. Treatment of the inhibited enzyme with pyridine-2-aldoxime fully restored the enzyme activity allowing repeated use of the sensor.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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