This study was designed to investigate the changes of quantity and quality of proteins in medium and cytoplasm during in vitro maturation of bovine oocytes. The total quantity of proteins in medium decreased from 0 to 4.5 hr, but increased from 13.5 to 18 hr after the onset of in vitro maturation. The total quantity of protein in cytoplasm increased from 0 to 4.5 hr, decreased from 4.5 to 9 hr, and increased after 18 hr after the onset of in vitro maturation. A total of 298 protein spots was detected on a gel of 2D SDS-PAGE form maturation medium. Among 28 protein spots expressed significant differences in their quantity, 8 proteins were identified by peptide mass fingerprinting (aldose reductase, alpha enolase, apolipoprotein A-1 precursor, 43kDa collectin precursor, heat shock 27kDa protein, plasminogen activator inhibitor-1 precursor, thrombospondin 1, transitional endoplasmic reticulum ATPase). Among total of 35 protein spots detected on gel of 2D SDS-PACE from oorytes cytoplasm, $\beta$-tubulin was identified by peptide mass fingerprinting.
Bioassay-directed isolation has yielded some cytotoxic substances against L1210 cell from the Korean traditional medicine. These include 5,2'-dihydroxy-6,7,8,6'-teramethoxyflavone $(IV,\;scutellaria\;root,\;ED_{50}\;=\;1.7\;{mu}g/ml)$, 7-geranyloxycoumarin $(XXXII,\;poncirus\;fruit,\;10.2\;{mu}g/ml) $and panaxydol $(I,\;white\;ginseng,\;0.03\;{mu}g/ml)$. IV, XXXII and their derivatives were synthesized in the purpose of in vivo tests and for observation of structure-activity relations. Among the flavone derivatives, 5,2',6'-trihydroxy-6,7,8-trimethoxy flavone (XVIII), 5-hydroxy-6,7,8-trimethoxy-6'-benzyloxyflavone (XVII) and 5,8-dihydroxy-6,7-dimethoxyflavone (X) showed the cytotoxicity which has no correlation to the flavone structures. Of the coumarins synthesized, 7,8-dihydroxycoumarin (XXVI), 6-7-dihydroxycoumarin (XXIX) and 6-hydroxy-5,7-dimethoxycoumarin (XXXI) showed considerable activities. Acetylated XXXI has moderate activity $(ED_{50}=17.2\;{mu}g/ml)$. Monobydroxycoumarins or their methyl and allyl ether were inactive. IV inhibits the growth of the solid form of S-180 by 70% at 40 mg/kg and shows T/C of 166% on the ascitic S-180 at 40 mg/kg. It strongly inhibits the activity of the membrane bounded ATPase from L1210 cell. The most cytotoxic fraction of the antitumor materials studied is the one from the trichosanthes root showing $ED_{50}=0. 0003\;{mu}g/ml$ against L1210 cell. This fraction, obtained from ethyl acetate extract, showed T/C of 130 and 135%, on ICR mice bearing S-180 and $BDF_1$ mice bearing L1210 at 10 mg/kg and 7.5 mg/kg, respectively.
The etiology of periodontal disease is multifactorial. Exogenous stimuli such as bacterial pathogens can interact with toll-like receptors to activate intracellular calcium signaling in gingival epithelium and other tissues. The triggering of calcium signaling induces the secretion of pro-inflammatory cytokines such as interleukin-8 as part of the inflammatory response; however, the exact mechanism of calcium signaling induced by bacterial toxins when gingival epithelial cells are exposed to pathogens is unclear. Here, we investigate calcium signaling induced by bacteria and expression of inflammatory cytokines in human gingival epithelial cells. We found that peptidoglycan, a constituent of grampositive bacteria and an agonist of toll-like receptor 2, increases intracellular calcium in a concentration-dependent manner. Peptidoglycan-induced calcium signaling was abolished by treatment with blockers of phospholipase C (U73122), inositol 1,4,5-trisphosphate receptors, indicating the release of calcium from intracellular calcium stores. Peptidoglycan-mediated interleukin-8 expression was blocked by U73122 and 1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid tetrakis (acetoxymethyl ester). Moreover, interleukin-8 expression was induced by thapsigargin, a selective inhibitor of the sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase, when thapsigargin was treated alone or co-treated with peptidoglycan. These results suggest that the gram-positive bacterial toxin peptidoglycan induces calcium signaling via the phospholipase C/inositol 1,4,5-trisphosphate pathway, and that increased interleukin-8 expression is mediated by intracellular calcium levels in human gingival epithelial cells.
Objectives: The purpose of this study was to confirm the effects of Liriope platyphylla extract on relieving Gastroesophageal reflux disease (GERD) through regulation of acid secretion. Methods: 8-week-old ICR mice were divided into untreated control group (Ctrl), GERD elecitation group (GERDE), Omeprazole administrate group before GERD elicitation (OMA), and Liriope platyphylla extract administrate group before GERD elicitation (LPA). After inducing GERD, gross observation and histological examination were performed and ATP6V1B1 (ATPase H+ Transporting V1 Subunit B1), GRPR (Gastrin-releasing peptide receptor), COX-1 (Cyclooxygenase 1), 8-OHdG (8-hydroxy-2'-deoxyguanosine), Cathelicidin, p-JNK (phospho c-Jun N-terminal kinase) were observed to confirm the damage defense effect of the esophageal mucosa, acid secretion regulation, antioxidant, anti-inflammatory, mucosal protection, and apoptosis regulation Results: OMA and LPA showed lower levels of damage compared to GERDE in gross observation and histological examination. ATP6V1B1, GRPR, and 8-OHdG showed lower positive reactions in OMA and LPA than in GERDE. COX-1 were less positive in GERDE and OMA than in Ctrl, but showed higher secretion in LPA than in Ctrl. Cathelicidin showed a decreased positive reaction in GERDE, OMA and LPA compared to Ctrl, but the decrease in positive reaction was smaller in OMA and LPA compared to GERDE. p-JNK showed increased positive reaction in GERDE, OMA and LPA than in Ctrl, but the increase in the positive reaction was smaller in the OMA and LPA compared to GERDE. Conclusions: The effects of Liriope platyphylla extract on esophageal mucosal damage protection, acid secretion regulation, antioxidant, anti-inflammatory, mucosal protection and apoptosis regulation were confirmed.
Ko, Sun Young;Kang, Saem;Chang, Yun Sil;Park, Eun Ae;Park, Won Soon
Clinical and Experimental Pediatrics
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v.49
no.3
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pp.317-325
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2006
Purpose : This study was carried out to elucidate the effects of nitric oxide synthase(NOS) inhibitor, NG-monomethyl-L-arginine(L-NMMA) and nitric oxide precursor, L-arginine(L-Arg) on cerebral hemodynamics and energy metabolism during reoxygenation-reperfusion(RR) after hypoxia-ischemia(HI) in newborn piglets. Methods : Twenty-eight newborn piglets were divided into 4 groups; Sham normal control(NC), experimental control(EC), L-NMMA(HI & RR with L-NMMA), and L-Arg(HI & RR with L-Arg) groups. HI was induced by occlusion of bilateral common carotid arteries and simultaneously breathing with 8 percent oxygen for 30 mins, and followed RR by release of carotid occlusion and normoxic ventilation for one hour. All groups were monitored with cerebral hemodynamics and cytochrome $aa_3$ (Cyt $aa_3$) using near infrared spectroscopy(NIRS). $Na^+$, $K^+$-ATPase activity, lipid peroxidation products, and tissue high energy phosphate levels were determined biochemically in the cerebral cortex. Results : In experimental groups, mean arterial blood pressure, $PaO_2$, and pH decreased, and base excess and blood lactate level increased after HI compared to NC group(P<0.05). These variables subsequently returned to baseline after RR except pH. There were no differences among the experimental groups. In NIRS, oxidized hemoglobin($HbO_2$) decreased and hemoglobin(Hb) increased during HI(P<0.05) but returned to base line immediately after RR; 40 min after RR, the $HbO_2$ had decreased significantly compared to NC group(P<0.05). Changes of Cyt $aa_3$ decreased significantly compared to NC after HI and recovered at the end of the experiment. Significantly reduced cerebral cortical cell membrane $Na^+$, $K^+$-ATPase activity and increased lipid peroxidation products(P<0.05) were not improved with L-NMMA or L-Arg. Conclusion : These findings suggest that NO is not involved in the mechanism of HI and RR brain damage during the early acute phase of RR.
Myofibrillar proteins were prepared from cold(pollack, salmon) and warm current fish(shark), and their thermostabilities were compared. Thermodynamic data for inactivation of myofibrillar proteins, such as D-value, Kd-value, revealed that thermostability of myofibrillar proteins from warm current fish was higher than that from cold current fish.
Susceptibility to low temperature photoinhibition in photosynthetic apparatus was compared among three cucumber cultivars, Gahachungjang (GH), Banbaekjijeo (BB) and Gaeryangsymji (GR). By chilling in the light for 6 h, a sustained decrease in the potential quantum yield (Fv/Fm) and the oxidizable P700 contents was observed, and the decrease was less in GH than in BB and GR. Although the difference was small, some $\Phi_{PSII}$ remained in GH after light-chilling for 6 h indicating that a few electrons can flow around photosystem II(PSII). As a consequence, the primary electron acceptor of PSII, $Q_{A}$, was reduced slowly and was not fully reduced after light-chilling for 6 h in GH. Although the amplitude was small, the development of NPQ was also faster in GH, indicating a higher capacity for non-photochemical energy dissipation. The relative fraction of a fast relaxing component of NPQ (qf) was higher in GH. After light-chilling for 5 h, the values of qf in BB and GR became much smaller than that in GH, indicating BB and GR suffered more significant uncoupling of ATPase and/or irreversible damages in PSII. When fluorescence induction transients were recorded after chilling, significant differences in quenching coefficients (qQ and qN) were observed among the three cultivars.
Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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1998.11a
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pp.184-184
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1998
Aldose reductase(AR), a rate-limiting enzyme in the polyol pathway, has been demonstrated to cause the intracellular accumulation of sorbitol or galactitol and hence to play key roles not only in the cataract formation in the lens but also in the pathogenesis of diabetic complications such as neuropathy, retinopathy and nephropathy, etc. In a series of investigations to evaluate potential AR inhibitors from medicinal plants, we have shown that some hot water extracts exhibited a significant inhibition of a significant inhibition of bovine lens AR in vitro. Among active plants, the roots of Angelica dahuria (Umbelliferae) were shown to have relatively potent AR inhibitory activity. Systematic fractionation of the ether soluble fraction monitored by bioassay led to isolation of two furanocoumarins, byakangelicin(I) and ter-O-methyl byakangelicin( II), were identified as potential AR inhibitors, their $IC_{50}$ values being 6.2 M and 2.8 M, respectively.
Basolateral and brush border membrane (BLM and BBM) vesicles of renal proximal tubules were prepared from adult male New Zealand White rabbits to evaluate as a potential model for assessment of nephrotoxicity. PAH uptakes using BLMV, glucose and leucine uptakes using BBMV were measured in the rabbits treated cephaloridine. In addition, urinalysis and histopathological studies were performed to investigate the correlationship with membrane vesicle uptakes. The results were as follows: (1) the activite of Na+, K+ -ATPase was enriched 12.3-fold in vasolateral memvrane vesicles (BLMV) and the specific activity of alkaline phosphatase in purified brush border memvrane vesicles (BBMV) was enriched 10.1-fold compared with each of microsomal homogenate. (2) In the uptake experiments, cephaloridine decreased initial and probenecid-sensitive PAH uptakes in BLMV. (3) Cephaloridine tested decreased initial and phlorizin-sensitive glucose uptakes in BBMV. (4) Cephaloridine tested decreased initial and Na+-dependent leucine uptakes in BBMV. (5) Cephaloridine tested significantly increased the urinary excretion of glucose and activity of ${\gamma}$-GTP. (6) Cephaloridine tested caused moderate necrotic changes in renal tubular cells and formation of urinary cast in the lumina of Henle's loop and collecting tubules besides the swelling of renal tubules.
The RAD3 gene of Saccharomyces cerevisiae is required for excision repair and is essential for cell viability. The RAD3 encoded protein possesses a single stranded DNA-dependent ATPase and DNA and DNA-RNA helicase activities. To examine the extent of conservation of structure and function of a S. pombe RAD3 during eukaryotic evolution, the RAD3 homolog gene was isolated by screening of genomic DNA library. The isolated gene was designated as HRD3 (homolog of RAD3 gene). Southern blot analysis confirmed that S. pombe chromosome contains the same DNA as HRD3 gene and this gene exists as a single copy in S. pombe. The transcript of 2.8 kb was detected by Northern blot analysis, The level of transcripts increased by ultraviolet (UV) irradiation, indicating that HRD3 is one of the UV-inducible genes in S. pombe. Furthermore, the predicted partial sequence of HRD3 protein has 60% identity to S. cerevisiae RAD3 gene. This homology was particularly striking in the regions identified as being conserved in a group of DNA helicases. Gene deletion experiments indicate that the HRD3 gene is essential for viability and DNA repair function. These observations suggest evolutionary conservation of other protein components with which HRD3 might interact in mediating its DNA repair and viability functions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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