한국 진해만에서 분리한 마비성패독 원인종의 하나인 Alexandrium catenella (AlCt-01) 최적 성장특성을 규명하기 위해 온도, 염분, 광도의 다양한 조건에서 A. catenella 성장을 조사하였다. $50\sim150{\mu}E\;m^{-2}s^{-1}$까지는 광도가 증가함에 따라 A. catenella 성장도 증가하였으나 $50\sim150{\mu}E\;m^{-2}s^{-1}$ 이상의 광도에서는 A. catenella 성장이 일정하게 유지하였다. 온도는 $15\sim25^{\circ}C$에서 성장하였고 $20^{\circ}C$에서 가장 잘 성장하였다. A. catenella는 25 PSU까지는 염분이 증가함에 따라 성장률도 증가하였으나 그 이상의 염분 농도에서는 성장이 일정하거나 감소하였다. 본 연구를 통한 A. catenella 최적 성장조건은 $50\sim150{\mu}E\;m^{-2}s^{-1}$, 30 PSU, $20^{\circ}C$에서 가장 높은 성장률 $k=0.45\;d^{-1}$을 나타내었다. 최적 성장조건에서 셀레니움과 철의 다양한 농도에 따라 A. catenella 성장특성을 조사하였는데 철농도는 $11.7{\mu}M$에서 최대값을 나타내었고 $(k=0.48\;d^{-1})$, $11.7{\mu}M$ 보다 낮은 농도에서는 철농도가 감소할수록 A. catenella 성장률도 감소하였다. A. catenella는 $10^{-3}\sim0.1{\mu}M$ 셀레니움 농도에서 A. catenella 세포밀도가 증가하고 대수성 장기 후반(the end of exponential phase)이 길어짐을 관찰 하였다.
본 연구에서는 실내에서 다양한 수온과 염분 조건에서 유독와편모조류 Alexandrium catenella(Group I)의 생장과 함께 마비성패독의 함량을 조사하였다. A. catenella의 수온과 염분 최적생장은 각각 20~30℃과 20~30 psu였으며, 광온성과 광염성종으로 나타났다. A. catenella는 낮은 수온 구간(10℃와 15℃)에서 독함량과 독성이 높게 나타났으며, 염분에 따라서는 차이가 크지 않았다. 따라서 15℃이하의 수온에서 본 종주와 같은 생리적인 특성을 가진 유독와편모조류가 우점한다면, 이매패류는 빠르게 독화될 가능성이 있다. 향후 A. catenella의 출현에 따른 마비성패독 예찰·예보를 위해 다양한 환경변화에 따른 A. catenella의 다른 종주와 상업적인 이매패류 독화에 대한 연구가 더 필요한 것으로 판단된다.
실내실험과 현장관측을 통해서 용존태무기질소(dissolved inorganic nitrogen; DIN) 제한 하에서 유독와편모조류 Alexandrium tamarense와 A. catenella의 생존과 우점화 전략을 살펴보았다. 현장관측결과 마산만에서 Alexandrium 속이 출현하는 기간동안 DIN이 식물플랑크톤의 성장 제한영양염으로 나타났다. 성장동력학 실험으로부터 도출된 질산염의 Ks값은 현장에서 우점하는 규조류보다 A. tamarense와 A. catenella가 높아, 영양염 경쟁에 있어 불리한 위치에 있는 것으로 나타났다. 하지만 A. tamarense와 A. catenella는 DIN 제한하에서 요소나 아미노산과 같은 용존유기질소 (dissolved organic nitrogen; DON) 화합물을 성장에 이용하였다. 따라서 마산만과 같이 Alexandrium 속이 출현하는 봄~여름까지 DIN이 제한영양염으로 작용하는 환경에서 DON의 흡수능력은 이들 종이 성장을 유지하는데 큰 역할을 할 뿐만 아니라 종의 우점과정 및 종간 경쟁에서도 중요한 영향을 줄 것으로 보인다.
Sequences of the large subunit ribosomal (LSD) rDNA D1-D2 region of Alexandrium catenella(=A. sp. cf. catenella) and A. tamarense isolates, which were collected along the Korea coasts, were analyzed to understand their phylogenetic relationships and geographical distributions. All A. catenella and A. tamarense isolates belonged to the A. tamarense/catenella/fundyense complex and were grouped with the North American and temperate Asian ribotypes, respectively, regardless of the presence or absence of a ventral pore in the first apical plate. A consistent and peculiar characteristic that differentiated the Alexandrium isolates was amplification of a second PCR product with a lower molecular weight in addition to the predicted one; ten A. catenella isolates belonging to the temperate Asian ribotype yielded this additional PCR product. Sequence alignment revealed that the shorter PCR product resulted from an unusual large deletion of 87 bp in the LSD rDNA D1 domain. The North American and temperate Asian ribotypes were prevalent along the Korean coasts without geographical separation. Given the high genetic homogeneity among widely distributed Alexandrium populations, each ribotype appeared to be pandemic rather than to constitute a distinct regional population.
The marine toxic dinoflagellate Alexandrium catenella has been implicated in numerous paralytic shellfish poisoning (PSP) events in many countries. Due to difficulties in rapidly identifying A. catenella, field-based study of this species has been problematic. The present study developed a TaqMan format A. catenella-specific probe for real-time PCR assay (specific to Korean genotype) based on LSU rDNA sequence information for studying geographic and temporal distribution of the species in surface sediments and water columns of Jinhae Bay, Korea. The field survey from 2007 to 2008 revealed that A. catenella occurred in most seasons at low densities, mostly below 1 cell $mL^{-1}$, and was more abundant in spring (maximum cell density of 2 cells $mL^{-1}$) when shellfish exceed the quarantine toxin level for PSP toxins in Jinhae Bay.
Kim, Keun-Yong;Matoko Yoshida;Yasuwo Fukuyo;Kim, Chang-Hoon
ALGAE
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제17권1호
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pp.11-19
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2002
Twenty-nine culture strains belonging to the genus Alexandrium Halim (Dinophyceae) were established from water column or sediments in Korea. Seventeen isolates were identified as A. tamarense (Lebour) Balech, eight isolates as A. sp. cf. catenella and one as A. catenella (Whedon et Kofoid) Balech according to the presence or absence of a ventral pore, the shape of the posterior sulcal plate and the sulcal width. Three isolates were unable to be identified due to considerable distortion of thecal plates and lack of enough materials, but typical of A. tamarense and/or A. catenella. The overall cell shape of A. tamarense was usually longer than wide. The posterior sulcal plate was definitely longer than wide dorsoventrally, and sulcus extended posteriorly without apparent widening. They were distributed in three major coasts of Korea. In contrast, the cell shape of A. sp.cf. catenella was generally anterior-posteriorly flattened. The transversal axis of the posterior sulcal plate was always longer than the longitudinal, or both axes were nearly equal in length. Its sulcus was broader than that of A. tamarense and widened in the direction of antapex about 1.5 times. This morphotype existed in nearshore and offshore waters of the southern Korea sea. One of A. catenella isolates from Jinhae Bay showed no conspicuous differences with A. sp. cf. catenella except for the consistent absence of a ventral pore.
The marine dinoflagellate genus Alexandrium, which produces PSP toxins, has a global distribution. As human-assisted dispersal of the species has been suggested, it is important to develop molecular tools to trace the dispersal pathway. To screen population-specific DNA sequences that differentiate Korean and Japanese A. catenella, we targeted the area downstream of the chloroplast psbA gene using PCR with population-specific DNA primers followed by RFLP (restriction fragment length polymorphism) analysis and sequencing. The RFLP patterns of the PCR products divided Korean and Japanese A. catenella regional isolates into three types: Korean, Japanese, and type CMC3, isolated from Korea. We sequenced the PCR products, but found no similar gene in a homology search. The molecular phylogeny inferred from the sequences separated the Korean and Japanese A. catenella strains, as did the RFLP patterns. However, the Japanese isolates included two slightly different sequences (types J and K), while the Korean sequence was the same as the Japanese K type. In addition, a unique sequence was found in the Korean strains CMC2 and CMC3. Population-specific PCR amplification with Japanese A. catenella type-specific PCR primers designed from the type J sequence yielded PCR products for Japanese strains only, showing that the unknown gene can be used for a population analysis of Korean and Japanese A. catenella.
우리나라뿐만 아니라 전 세계적으로 적조 및 마비성 패독을 일으켜 문제시되고 있는 유독성 와편모류인 A. catenella 를 살조시키는 해양미생물 Pseudoalteromonas sp. NH-12를 마산만의 적조발생 해역에서 분리, 동정하고 그 특성과 살조능에 대해 연구함으로써 보다 환경 친화적인 적조 구제 기술개발의 기초 자료를 제공하고자 하였다. 적조발생 해역인 마산만의 해수에서 분리한 38개의 해양미생물 균주 중 4종의 미생물이 A. catenella 에 대해 살조능을 나타내었으며, 이중 살조능이 가장 우수한 NH-12 균주를 선별하였다. 본 균주는 API kits 및 16S rRNA gene 염기서열을 분석하여 계통분류를 행한 결과 Pseudoalteromonas 속으로 분류되었으며, 최적 배양조건은 $25^{\circ}C$, pH 8.0, 3.0% NaCl 농도였다. Pseudoalteromonas sp. NH-12의 성장 단계별 살조능은 대수증식기 후기, 정지기, 대수증식기 중기, 유도기 순으로 높게 나타났다. 살조물질은 대수증식기 중기 이후에 활발히 생산되기 시작하여 대수증식기 후기에 가장 고농도로 축적되는 것으로 판단된다. 2조 배양계를 이용한 살조 유형 조사에서 Pseudoalteromonas sp. NH-12는 격리된 상태에서도 A. catenella 를 살조시켜 '직접 공격형'이 아니라 세포외로 물질을 분비하여 살조시키는 '살조인자 분비형'으로 확인되었다. 또한 NH-12 균주 배양여과액을 5% 첨가하였을 때 36시간 후에 A. catenella 는 100% 살조되었고, 10%를 첨가한 경우 24시간 후에 99% 이상 살조되었다.
The effects of irradiance on the growth of toxic dinoflagellates Alexandrium tamarense (Masan Bay strain) and Alexandrium catenella (Jinhae Bay strain) were investigated in the laboratory. At $15^{\circ}C$ and 30 psu for A. tamarense and $25^{\circ}C$ and 30 psu for A. catenella, the irradiance-growth curve showed the maximum growth rate (${\mu}_{max}$) of 0.31 $day^{-1}$ with half-saturation photon flux density (PFD) ($K_I$) of 44.53 ${\mu}molm^{-2}s^{-1}$, and a compensation PFD ($I_c$) was 20.67 ${\mu}molm^{-2}s^{-1}$ for A. tamarense, and ${\mu}_{max}$ of 0.38 $day^{-1}$ with $K_I$ of 59.53 ${\mu}molm^{-2}s^{-1}$, and $I_c$ was 40.80 ${\mu}molm^{-2}s^{-1}$ for A. catenella. The $I_c$ equated to a depth of 8~9 m from March to June for A. tamarense and 6~7 m from March to June for A. catenella. These responses suggested that irradiance at the depth near the middle layer in Masan Bay would provide favorable conditions for two species.
BACKGROUND: The aim of this study was to isolate and identify algicidal bacterium that tends to kill the toxic dinoflagellate Alexandrium catenella, and to determine the algicidal activity and algicidal range of algicide. METHODS AND RESULTS: Among of algicidal bacteria isolated in this study, NH-3 isolate was the strongest algicidal activity against A. catenella. NH-3 isolate was identified on the basis of biochemical characteristics and analysis of 16S rRNA gene sequences. The NH-3 isolate showed over 99% homology with Arthrobacter oxydans, and was designated as Arthrobacter sp. NH-3. The optimal culture conditions were $25^{\circ}C$, initial pH 7.0, and 2.0% (w/v) NaCl concentration. The algicidal activity of Arthrobacter sp. NH-3 was significantly increased to maximum value in the late of logarithmic phase. Arthrobacter sp. NH-3 showed algicidal activity through indirect attack, which excreted active substance into the culture filtrate. When 10% culture filtrate of NH-3 was applied to A. catenella, 100% of algal cells were destroyed within 30 h. In addition, the algicidal activities were increased in dose and time dependent manners. The pure algicide was isolated from the ethyl acetate extract of the culture filtrate of NH-3 by using silica gel column chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC). We investigated the algicidal activity of this algicide on the growth of harmful algal bloom (HAB) species, including A. catenella. As a result, it showed algicidal activity against several HAB species at a concentration of $100{\mu}g/mL$ and had a relatively wide host range. CONCLUSION: Taken together, our results suggest that Arthrobacter sp. NH-3 and its algicide could be a candidate for controlling of toxic and harmful algal blooms.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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