To improve the efficiency of nuclear transplantation in the rabbit, this study were evaluated the influence of celly cycle of donor nuclei on the in vitro developmental potential in the nuclear transplant embryos. The embryos of 16-cell stage were collected from the mated does at 48h post-hCG injection and they were synchronized to G1 phase of 32-cell stage. Synchronization of the cell cylce of blastomeres were induced, first, using an microtubules polymerization inhibitor, 0.5$\mu\textrm{g}$/ml colcemid for 10h to arrest blastomeres in metaphase, and secondly, using a DNA synthesis inhibitor, 0.1$\mu\textrm{g}$/ml aphidicolin for 1.5 to 2h to cleave to 32-cell stage and arrest them in G1 phase. The separated G1 phase blastomeres of 32-cell stage were injectied into enucleated recipient cytoplasms by micromanipulation. After culture until 20h post-hCG injection, the nuclear transplant oocytes were electrofused and activated by electrical stimulation. The nuclear transplant embryos were co-cultured for 120h. In vitro cultured embryos were monitored every 24h to assess for development rate. After in vitro cultue for 120h, the nuclear transplant embryos developed to blastocyst stage were stained with Hoechst 33342 dye for counting the number of blastomeres under a fluorescence microscopy. The cleavage rate of blastomeres from 16-cell stage stage rabbit embryos treated with colcemid for 10h or aphidicolin for 6h following colcemid for 10h were not significantly different. The electrofusion rate was similar by high in S and G1 phase donor nuclei as 80.6 and 79.1%, respectively. However, the nuclear transplant embryos using G1 phase donor nuclei were developed to blastocyst at high rate(60.3%) than those using S phase donor nuclei(26.0%). Moreover, the mean blastocyst stage were increased significantly(P<0.05) with the G1 phase donor nuclei(176.6 cells and 1.50 cycles), as compared with the S phase donor nuclei(136.6 cells and 1.42 cycles). These results show that the blastomeres of G1 phase were more successful as donor nuclei in the nuclear transplant procedure, compared with S phase.
Plasminogen activators (PAs) are serine proteases that convert plasminogen to plasmin. Two type of PAs are urokinase-type PA (uPA) and tissue-type PA (tPA). Plasminogen is present in most extracellular fluids. PAs play in various reproductive processes including implantation, ovulation and fertilization. In the spermatozoa, PAs and PAIs play a role in sperm motility and fertilization. PAs in the sertoli cell are stimulated spermatozoa maturation and sperm activation through the phospholipase A2. The oocyte maturation is the process for fertilization and implantation. PAs in cumulus-oocyte complexes (COCs) are related to oocyte maturation by protein kinase A and C. In the ovulatory process, PAs activity are changed and it are related to reducing the tensile strength of ovarian follicle wall. The uterine environment is important for reproduction and the uterus undergo tissue remodeling. In the uterus and oviduct of mammals, expression and activity of PAs are changed during estrous cycle. Thus, expression and activity of PAs are concerned to many reproductive functions. Therefore, PAs seem to important factor of regulator in reproductive events.
This research investigated the reproduction cycle, litter size, and the effects of factors of red-tongue viper snake inhabiting in Jeju Island, to delve into their life strategy. Field survey was conducted in Jeju Island from May 2006 to November 2008. Reproduction cycle was analyzed through measurements of testis and follicle sizes in laboratory from March 2009 to December 2010. According to the research results, the sizes of red-tongue viper snake's testis and follicle clearly changed seasonally. The number of eggs within the oviduct were greater on the right side ($2.6{\pm}1.0$ eggs, n=16) than on the left side ($1.8{\pm}0.5$ eggs, n=16) (t=-2,721, p<0.05). Average (${\pm}SD$) of survival litter size (SLS) was $4.4{\pm}1.7$ (1~9, range), while total litter size (TLS) was $4.7{\pm}1.5$ (3~9, range), which were not statistically significant. However, their litter sizes were similar to the number of eggs within the oviduct (t=0.039, P>0.05). Relative litter mass (RCM) was $0.42{\pm}0.13$ (0.18~0.79, n=33), and tended to increase, as maternal condition of pre-parturition (MCPPI) was getting better. The sexual ratio of delivered litters showed no significant difference between male and female red-tongue viper snakes (♂:♀ = 1.15:1, n=73 ; ${\chi}^2$=0.342, P>0.5). Average neonate mass showed a weak correlation with maternal mass of pre-parturition (MMPP1) (r=0.387, P<0.05, n=33). Average neonate Snout-vent length (SVL) also demonstrated a weak correlations with maternal SVL (r=0.399, P<0.05, n=33) and MMPP1 (r=0.344, P<0.05, n=33). Average neonate mass and maternal SVL approached significant probability (r=0.323, P=0.067, n=33). This indicates that mother snakes can bear bigger litter due to its larger size. In some cases, litter's weight decreases as mother snakes are bearing more litter; however, the red-tongued viper snake did not show such exchange relationship. From this, it can be conjectured that a red-tongued viper snake has peculiarity of its own species. The research results are predicted to be used as the basis to find a life history of red-tongued viper snake.
Carvalho, Bruno P.;Cunha, Andrielle T.M.;Silva, Bianca D.M.;Sousa, Regivaldo V.;Leme, Ligiane O.;Dode, Margot A.N.;Melo, Eduardo O.
Journal of Animal Science and Technology
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v.61
no.2
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pp.61-68
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2019
The hG-CSF (human Granulocyte Colony-Stimulating Factor) is a growth and stimulation factor capable of inducing the proliferation of bone marrow cells, several types of leukocytes, among other hematopoietic tissue cells. hG-CSF is used in used to treat anomalies that reder a small number of circulating white blood cells, which may compromise the immune defenses of the affected person. For these reasons, the production of hG-CSF in a bioreactor system using the mammary gland of genetic modified animals is a possibility of adding value to the bovine genetic material and reducing the costs of hG-CSF production in pharmaceutical industry. In this study, we aimed the production of transgenic hG-CSF bovine through the lipofection of bovine primary fibroblasts with an hG-CSF expression cassette and cloning these fibroblasts by the somatic cell nuclear transfer (SCNT) technique. The bovine fibroblasts transfected with the hG-CSF cassette presented a stable insertion of this construct into their genome and were efficiently synchronized to G0/G1 cell cycle stage. The transgenic fibroblasts were cloned by SCNT and produced 103 transferred embryos and 2 pregnancies, one of which reached 7 months of gestation.
This study was conducted to investigate the cytogenetic properties, in vitro development, and their relationship in the bovine reconstituted embryos following cell cycle-controlled nuclear transfer. Sixteen-cell stage embryos were treated by nocodazole, and after release from nocodazole treatment, their blastomeres were separated and allowed to subsequent cleavage. Blastomeres within 1.5 h post cleavage(hpc) and at 3hpc were transferred to enucleated oocytes at MII-phase or S-phase. Donor nuclei transferred into M II-phase recipients underwent various nuclear remodeling, such as extrusion of a polar body(PB)-like structure, premature chromosome condensation(PCC) and chromatin modifications. These nuclear remodeling patterns varied by the time post cleavage of donor blastomeres. Developmental rate to the blastocyst stage differed with time post cleavage of donor blastomeres and existence of a PB-like structure. Whereas do-nor nuclei transferred into S-phase oocytes did not undergo PCC and other major modifications, and their developmental potentials less depended on the nuclei types. This result confirms that the nuclear remodeling type differs with donor and recipient cell cycle stage, which affect the development of reconstituted bovine embryos.
Current growth in the deer industry is 20% per annum as the demand increases for venison in Europe, including the increased use in Asia of antlers as a natural medicine by humans. The deer industry in Australia has developed rapidly, but farm profitability has fluctuated markedly. The knowledge on deer farming has largely been adopted from New Zealand (NZ) and the United Kingdom (UK) although the environmental conditions in these deer growing countries differ markedly from Australia. The practice used for weaning is one of the key factors influencing the profitability of the industry. However, a wide range in weaning dates are practised by farmers leading to the question of whether deer should be weaned after mating to reduce the stress during weaning or should they be weaned in the pre-rut period to allow does to recover their body condition for the next reproduction cycle. This review examines the effect of weaning time on the performance of does and hinds and the subsequent growth rate of the fawns and calves. Gaps in knowledge of weaning procedures and nutritional management for early weaned deer are identified.
Embryo transfer (ET) in the animal is an important procedure to generate genetically engineered animals and conserve genetic resources. For ET experiments in mice, pseudopregnant recipients are usually prepared with proestrus stage of females and vasectomized males. However, this conventional method is inefficient because the size of female colonies should be large to select only the proestrus stage in the estrous cycle and the surgical procedures are required to generate vasectomized males. In this study, we established a simple and efficient protocol to prepare ET recipients using the estrous synchronization with hormone injection and the mating with wild male mice. The delivery rate of ET recipients tended to be increased with estrous synchronization using hormone injection (100%) compared to the conventional method (71%). Further, natural pregnancy of the recipients, induced by mating with a wild male, significantly enhanced the birth rate of ET offspring than the conventional method (33% vs. 13%). Based on the results, we concluded that our new protocol using hormone injection to ET recipients and mating with wild males could be more efficient and simpler compared to the conventional method.
Bae, Sung Jun;Kim, Ju Sun;Kim, Jin Hak;Yun, Yeon Jung;lee, Shin Ae
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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v.33
no.1
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pp.69-69
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2006
Heterotopic pregnancy is the coexistency of intrauterine and extrauterine pregnancy. The incidence of heterotopic pregnancy is about 1 to 30,000 pregnancy in a natural cycle. However, the frequency of heterotopic pregnancy has steadily increased because of rising incidence of pelvic inflammatory disease, pelvic surgery and the development of ovulation induction and assisted reproduction. Because heterotopic pregnancy is difficult due to diagnose and it has high morbidity and mortality rate, one should always take this into consideration and should conduct careful and thorough gynecologic evaluation. We have experienced a case of heterotopic pregnancy in a 29-year old woman who presented with acute abdominal pain in a natural cycle and report this case with a brief review of literature.
Vitellogenin (Vg) is the precursor of vitellin (Vn), which is the major yolk protein in nearly all oviparous species, including fish, amphibians, reptiles, and most invertebrates. It is one of the most important factors during reproduction, and numerous studies have shown that Vg genes are markers of the reproductive cycle and effecter genes induced by endocrine-disrupting chemicals (EDCs). Previously, we isolated two distinct cDNAs encoding vitellogenin homologs Pj-Vg1 and Pj-Vg2 from Pandalus shrimp Pandalopsis japonica. In this study, full-length genomic sequences of Pj-Vg1 and Pj-Vg2 were determined using a PCR-based genome walking strategy. Isolated Pj-Vg1 and Pj-Vg2 genes were 11,910 and 11,850 bp long, respectively. Both Pj-Vg genes had 15 exons and 14 introns, and the splicing sites were also the same, suggesting that they arose via gene duplication. The similar structural characteristics of decapod Vg genes suggest that they are all orthologs that evolved from the same ancestral gene. Analysis of Pj-Vg1 and Pj-Vg2 expression revealed that the relative copy numbers of Pj-Vg1 and Pj-Vg2 were similar in the hepatopancreas, whereas Pj-Vg2 transcripts were also detected in the ovary. Expression of both Pj-Vg genes was induced in hepatopancreas of mature individuals, whereas only Pj-Vg2 transcripts were upregulated in the ovaries from mature animals, suggesting that both Pj-Vgs are important for oocyte development. A strong positive correlation was found between Pj-Vg1 and Pj-Vg2 transcripts in the same individual, indicating they are under the same control mechanisms. Additionally, a positive correlation was found between ovarian and hepatopancreatic Pj-Vg2 transcripts, suggesting that its dual expression is regulated by similar physiological conditions. Knowledge of the similarities and differences between the two vitellogenin-like genes, Pj-Vg1 and Pj-Vg2, would help us to understand their roles in reproduction and other physiological effects.
The results from a survery on the reproduction of a, pp.oximately 500 dairy cows raised in four different farming areas including Cheju city, Jochun, Hallim and Sung-up are summarized as follows; 1. At the occurrence of first estrus, the average age of the heifers was 15.1 months (330 Kg/B.W.), and at first conception 18.0 months (354Kg/B.W.). There was no regional differences. 2. The average interval of the estrous cycle was 20.4 days. And the repetition of esturs after unsuccessful insemination occurred on an average of 1.6 times, especially 2.0 times in the herds of the Jochun district. 3. The ages at the first calving were similar to the data recorded for the domestic mainland's herds at 27.1 months. But some regional differences were recognized within the four districts: i.e. 28.6 (Cheju city), 27.4(Jochun), 27.1(Hallim) and 25.3 months (Sung-up). There was no significant differences in sex ratio of newborns at 50.4%(♂) and 49.6%(♀). 4. The intervals of esturs recurrence and the following conception after calving were 80.0 and 95.8 days respectively. In the followsing conception intervals after cavling, 90.6-97.4 days were average for the herds of Cheju city and Jochun districts, 62.4-69.7 days for those of Hallim and Sung-up districts. 5. The average gestation period was 279.8 days, and was almost identical in the four districts. 6. The calving intervals was 377.7 days in average, and it was shorter than the data recorded for the domestic mainland's herds. Also it was reduce gradually according to the calving frequency.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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