Claudia Simoes;Alessandra S. Santos;Norma Albarello;Solange Faria Lua Figueiredo
Journal of Plant Biotechnology
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v.6
no.3
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pp.199-204
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2004
The medicinal value of the genus Cleome justifies bio-technological studies of Cleome rosea, a Brazilian annual species from sandy coastal ecosystems (restinga), which have been submitted to an intense process of antropogenic degradation. In the present work, was analyzed the influence of cytokinins, 6-benzyladenine (BA) and 6-furfurylaminopurine (kinetin) added to the Murashige and Skoog medium (MS), on the proliferation capacity of explants from the stem axis (hypocotyl, node and internode) for a period of five monthly subcultures (150 days). Regardless of the explant sources, plantlet regeneration by direct and indirect organogenesis was observed. The largest number of shoots proliferated through direct organogenesis was obtained on medium with 4.4 $\mu{M}$ BA. Also, the highest proliferation capacity through indirect organogenesis was found on medium with 4.4 $\mu{M}$ BA + 4.6 $\mu{M}$ kinetin. The presence of kinetin alone was not effective for multiplication of the species. Elongation and rooting were obtained when shoots were transferred onto growth regulator-free medium, and acclimatization rates from 70% to 81% were achieved depending on explant sources used. Plants were then successfully established in soil and showed normal phenotypes.
Mature zygotic embryos dissected from ginseng(Panax ginseng C. A. Meyer) seeds were cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium containing various concentrations of 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid(2, 4-D) and kinetin. Somatic embryos were induced directly from cotyledonary tissue or from intervening callus. The induction frequency of somatic embryos was up to 55%. Upon transfer to half-strength MS medium supplemented with 1 mg/1 6-benzyladenine(BA) and 1 mg/1 GA3, most somatic embryos developed into plantlets. Over 50% of the plantlets flowered after 4 weeks of culture and then a few bore immature fruits in vitro. Therefore, it is suggested that the juvenility of the ginseng tissue which give rise to somatic embryos does not interfere with in vitro flowering of their regenerated plantlets.
Ginseng zygotic embryos, seedlings, and exised cotyledonary nodes were cultured on Murashinge and Skoog's(MS) medium, supplemented with 6-benzyladenine(BA) and gibberellic acid(GA3) to induce flower buds. As the concenteration of nitrogen compounds in MS medium was reduced to half of its strength, the flowering frequency of zygotic embryos increased up to 90%. The optimum concentration of sucrose in the medium for flowering of seedlings was 30-60 g/1. In all cases flower buds were formed on elongated axillary branches from the cotyledonary nodes, while the apices remained vegetative. When zygotic embryos and excised cotyledonary nodes were cultured on the medium, supplemented with all possible combinations of BA, GA3, and abscisic acid(ABA) of 5 $\mu$M indole-3-acetic acid(IAA) in the above combinations did not affect flowering. These results suggest that cytokinins, gibberellins, and inhibitors play primary, permissive, and preventive roles, respectively, in the induction of flowering of ginseng.
The effect of NAA and Benzyladenine(BA) for determination times on the formation of adventitious shoots, roots trichmoes and calli in MS basal medium was investigated in leaf segments from ecotype 'Nosses' of Arabidopsis thalliana. Adventitious shoots, roots, trichomes and calli were formed fromed from leaf segments in a wede range of NAA and BA. The optimal combination of hormones for adventitious shoots formation, 20mg/L NAA for trichome formation, 100mg/L for callus formation. Inductive times for formation of adventitious shoots, roots, trichomes and calli were determined at 14, 4, 6 and 18 days respectively by periodical transfer of leaf segments from hormines containing media to hormone free medium.
Zingiber officinale buds from the rhizomes were used to produce in vitro shoots. These explants produced the largest number of multiple shoots, 9.8 shoots per explant, when were cultured on MS (Murashige and Skoog 1962) medium supplemented with 2.0 mg/L benzyladenine (BA) and 2.0 mg/L indole butyric acid (IBA). This medium was also found to be suitable for in vitro propagation of other Zingiberaceae species: Alpinia conchigera, Alpinia galanga, Curcuma domestica, C. zedoaria and Kaempferia galanga. Both C. domestica and C. zedoaria produced more multiple shoots when were cultured in the liquid proliferation medium, MS medium containing 2.0 mg/L BA and 2.0 mg/L IBA. To maintain the in vitro plantlets of Zingiberaceae species, they were required to subculture every four weeks. After executing proper acclimatization protocol, in vitro plantlets of Alpinia galanga, A. conchigera, Curcuma domestica, C. zedoaria, Kaempferia galanga and Zingiber officinale could be successfully planted in the field with high percentage of survival.
Shoot induction system was developed in the recalcitrant plant species, Brassica rapa ssp. rapifera by using optimum selection of profit organ, phytohormone combination, seedling age and kind of culture container. Out of in vitro cultured leaf segment, petiole, hypocotyl, and cotyledon with petiole, only cotyledon with petiole derived from 4 day-old seedlings induced multiple shoot. The optimum combination of auxin and cytokinin for the multiple shoot induction was MS medium containing 5mg/L BA and 0.5mg/L NAA. The major factors for multiple shoot propagation were part of plant organ, age of seedling, and ratio of auxin and cytokinin. In addition, shoot regeneration was promoted in the 100ml Erlenmeyer flask compared with the $90mm{\times}20mm$ Petri-dish. The induced shoots formed roots easy on MS medium containing 0.1mg/L IBA and the whole plants were successfully cultivated in soil.
In Japan, propagation of cyclamen is mainly from seedlings. However, seeds are expensive and germination is slow and non..uniform. Therefore, to achieve genetically uniform propagation, multiplication must be vegetative. The rooted tuberous stems without shoots as sources of explants were cultured on the media containing BA and sucrose. After 30 days cultivation, tuberous roots were produced from the root ends attached to a tuberous stem and its capability was dependent on the type of media. The highest percentage of tuberous root formation was observed in Culture on the medium of 1/3 MS containing 0.05mgL$^{-1}$ NAA, 0.5mg L$^{-1}$ BA and 5% sucrose. Growth rates of the tuberous roots were greatly influenced by the cutting positions of a root in explants. The highest growth of was observed if small amount of root end was cut at initiation of tissue culture.
Protoplasts were enzymatically isolated from suspension culture of sweet potato. High yields of single protoplasts were produced from nonembryogenic cell aggregates. However, most protoplasts obtained from embryogenic cell clumps were spontaneously fused during enzyme treatment; a small portion of them remained single. Upon transfer to Murashige and Skoog's(MS) liquid medium supplemented with 0.1 mg/1 6-benzyladenine(BA) and 1 mg/12,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D), protoplasts from nonembryogenic cell aggregates sustained cell divisions to form cellus. Upon subculture onto MS media with 0.2 mg/12,4-D or without growth regulators, the callus did not give rise to any organs. On the other hand, first cell division of single protoplasts from embryogenic cell clumps was sporadically observed.
Mature embryos of five oat genotypes were cultured to develop an efficient method of callus induction and plant regeneration. Murashige and Skoog(MS) and N6 media supplemented with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and kinetin were used for callus induction. Percentage of callus induction showed significant among the combinations of plant growth regulators. Callus induction showed high efficiency in medium containing 3 mg/$\ell$ of 2,4-D. The high frequency of callus induction was obtained in Gwiri37. For plant regeneration, calli induced from mature embryos were transferred onto MS and N6 media supplemented with combinations of 6-benzyladenine (BA) and naphthaleneacetic acid (NAA) for 5 weeks. Percentage of plant regeneration showed high in MS medium containing 0.2 mg/$\ell$ of NAA and 1 mg/$\ell$ of BA. The callus initiation medium affected the subsequent plant regeneration. Treatment with 3 mg/$\ell$ of 2,4-D, and 3 mg/$\ell$ of 2,4-D and 3 mg/$\ell$ of kinetin in callus induction media showed high frequency for plant regeneration. Plant regeneration frequency among the genotypes showed significant. Especially, Gwiri37 showed high regeneration frequency. Regenerated shoots were treated with 200, 350 and 500 mg/$\ell$ of indole-3-butyric acid (IBA) transferred onto half-strength MS medium without plant growth regulators. Treatment of shoots with IBA induced root formation rapidly.
This study describes culture conditions for a plant regeneration system via a combined pathway of somatic embryogenesis and organogenesis in root explant cultures of the commercial rose cultivar 'Charming'. Root explants formed white calluses at a frequency of 30% after 6 weeks of culture on Schenk and Hildebrandt (SH) medium supplemented with $11mg\;1^{-1}$ 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. After 6 weeks of transfer to SH medium without growth regulators, initial white calluses gave rise to globular somatic embryos at a frequency of 2.8%, which were subsequently dedifferentiated to embryonic tissues. Somatic embryos or embryonic tissues initially derived from root explants did not undergo development beyond cotyledonary stage. To produce adventitious shoots, embryonic tissues were sliced and cultured on SH medium with $0.5mg\;1^{-1}$ 6-benzyladenine. After 4 weeks of culture, 28% of embryonic tissue explants formed adventitious shoots. Regenerated shoots were rooted on half strength SH medium with $0.1mg\;1^{-1}$${\alpha}-naphthalaneacetic$ acid and subsequently grown to maturity. Root-derived embryonic tissues were proliferated by subculture, while retaining the capacity for shoot production for a few years.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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