To evaluate the human risk of long-term intake of genetically modified (GM) rice, we carried out RT-PCR of housekeeping genes. Housekeeping genes, which show highly uniform expression in living organisms during various stages of development and under different environmental conditions, were normalized by RT-PCR. We assessed the expression of 10 common housekeeping genes (18s rRNA, 25S rRNA, UBC, UBQ5, UBQ10, ACT11, GAPDH, eEF-$1{\alpha}$, ${\beta}$-TUB, GAPDH, ${\beta}$-actin, B2m, G6pd2, Gyk, Gus, Hprt, Cyclophlin A, Tfrc, ${\alpha}$-tubulin and RPL13A) in the liver, stomach, small intestine, large intestine, kidney and spleen of mice fed GM or non-GM rice. We found no significant differences in the expression of housekeeping genes between the two groups of mice.
그람 음성이며 황색인 긴 막대 모양의 세균 Spirosoma montaniterrae $DY10^T$는 전라북도 덕유산에서 분리가 되었다. 이 세균의 세포는 감마선에 대해 12 KGy의 $D_{10}$값을 보이며 극단적인 감마선 저항성을 보였다. $DY10^T$ 균주의 완전한 게놈서열은 5,116개의 유전자, 39개의 tRNA 유전자를 포함하는 원형 염색체(5,797,678 bp)로 구성되었다. 유전체 특징은 감마선 및 UVC에 대응하는 주요 효소를 포함하였다.
2003년 5월과 2003년 10월동안에 제주도내 5개소의 넙치 종묘배양장에서 초기 먹이로 공급 되어지는 동물성 플랑크톤인 rotifer와 20-30일령 넙치 자어에서 장관백탁증 원인균으로 알려진 V. ichthyoenteri를 분리하기 위해 실험한 결과 총 71개의 Vibrio sp. 분리가 되었고, 생화학적 동정결과 2개의 그룹에서 24개의 V ichthyoenteri가 동정 되었다. V. ichthyoenteri의 신속한 검출을 위한 종특이적 primer를 V. ichthyoenteri(KCCM 40870)ISR의 특이적인 서열을 이용하여 제작하였다. V. ichthyoenteri를 포함한 20종의 Vibrio속 균주의 genomic DNA와 18group 분리균주 genomic DNA를 PCR한 결과 V. ichthyoenteri 만의 특이적인 band가 생성됨을 알 수가 있다. 따라서 V. ichthyoenteri(KCCM 40870) ISR의 서열로 제작한 primer가 넙치 자치어에 발병하는 장관백탁증 원인균인 Vibrio ichthyoenteri의 신속한 검출과 정확한 동정을 할 수 있는 molecular marker로 이용할 수 있음을 확인하였다.
Ziganshina, Elvira E.;Belostotskiy, Dmitry E.;Shushlyaev, Roman V.;Miluykov, Vasili A.;Vankov, Petr Y.;Ziganshin, Ayrat M.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제24권11호
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pp.1464-1472
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2014
The microbial community structures of two continuous stirred tank reactors digesting turkey manure with pine wood shavings as well as chicken and swine manure were investigated. The reactor fed with chicken/swine wastes displayed the highest organic acids concentration (up to 15.2 g/l) and ammonia concentration (up to 3.7 g/l ammonium nitrogen) and generated a higher biogas yield (up to $366ml/g_{VS}$) compared with the reactor supplied with turkey wastes (1.5-1.8 g/l of organic acids and 1.6-1.7 g/l of ammonium levels; biogas yield was up to $195ml/g_{VS}$). The microbial community diversity was assessed using both sequencing and profiling terminal restriction fragment length polymorphisms of 16S rRNA genes. Additionally, methanogens were analyzed using methyl coenzyme M reductase alpha subunit (mcrA) genes. The bacterial community was dominated by members of unclassified Clostridiales with the prevalence of specific clostridial phylotypes in each reactor, indicating the effect of the substrate type on the community structure. Of the methanogenic archaea, methanogens of the genus Methanosarcina were found in high proportions in both reactors with specific methanosarcinas in each reactor, whereas the strict hydrogenotrophic methanogens of Methanoculleus sp. were found at significant levels only in the reactor fed with chicken/swine manure (based on the analyses of 16S rRNA gene). This suggests that among methanogenic archaea, Methanosarcina species which have different metabolic capabilities, including aceticlastic and hydrogenotrophic methanogenesis, were mainly involved in anaerobic digestion of turkey wastes.
We investigated effects of recombinant human erythropoietin (rHuEPO) on profiles of mRNA transcripts in 6 male cynomolgus (M. fascicularis) monkey's spleen for 4 weeks. Six monkeys, composed of control and treatment group (Control : M1, M2, M3: Treatment : M4, M5, M6) were intravenously administered 3 times per week without or with a dose of rHuEPO 2730 IU/0.1 ml/kg. After 4 weeks rHuEPO treatment, spleen was removed for RNA isolation. Splenic gene expression was assessed using Affymetrix U133A 2.0 arrays containing 18,400 transcripts and variants, including 14,500 well-characterized human genes. Gene expression pattern was very different between individuals even in same treatment. In rHuEPO treated groups showed number of genes were up- or down-regulated (M4: 79: M5: 48; M6: 73 genes). Six genes (epidermal growth factor receptor, calgranulin A, estrogen receptor binding site associated antigen, matrix metalloproteinase 19, zinc finger and BTB domain containing 16, progestin and adipoQ receptor) were commonly expressed in rHuEPO treated group. The different individual response could be major considering factor in monkey experiment. Further study is needed to clarify the different individual response to rHuEPO in molecular level. This study will be valuable in the fundamental understanding and validation of molecular toxicology for bio-generic drugs including rHuEPO in cynomolgus monkey.
Costa, Ana S.M.B.;Thomas, D. John I.;Eastwood, Daniel;Cutler, Simon B.;Bailey, Andy M.;Foster, Gary D.;Mills, Peter R.;Challen, Michael P.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제19권3호
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pp.271-276
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2009
Functional gene studies in the cultivated white button mushroom Agaricus bisporus have been constrained by the absence of effective gene-silencing tools. Using two endogenous genes from A. bisporus, we have tested the utility of dsRNA hairpin constructs to mediate downregulation of specific genes. Hairpin constructs for genes encoding orotidine 5'-monophosphate decarboxylase (URA3) and carboxin resistance (CBX) were introduced into A. bisporus using Agrobacteriummediated transfection. Although predicted changes in phenotype were not observed in vitro, quantitative-PCR analyses indicated unambiguously that transcripts in several transformants were substantially reduced compared with the non-transformed controls. Interestingly, some hairpin transformants exhibited increased transcription of target genes. Our observations show that hairpin transgenic sequences can mediate downregulation of A. bisporus endogenous genes and that the technology has the potential to expedite functional genomics of the mushroom.
In this study, we evaluated the mechanism of long non-coding RNA MIR22 host gene (LncRNA MIR22HG) in osteosarcoma cells. Forty-eight paired osteosarcoma and adjacent tissues samples were collected and the bioinformatic analyses were performed. Target genes and potential binding sites of MIR22HG, microRNA (miR)-629-5p and tet methylcytosine dioxygenase 3 (TET3) were predicted by Starbase and TargetScan V7.2 and confirmed by dual-luciferase reporter assay. Cell Counting Kit-8, colony formation and flow cytometry assays were utilized to determine the viability, proliferation and apoptosis of transfected osteosarcoma cells. Pearson's analysis was introduced for the correlation analysis between MIR22HG and miR-629-5p in osteosarcoma tissue. Relative expressions of MIR22HG, miR-629-5p and TET3 were measured by quantitative real-time polymerase chain reaction or Western blot. MiR-629-5p could competitively bind with and was negatively correlated with MIR22HG, the latter of which was evidenced by the high expression of miR-629-5p and low expression of MIR22HG in osteosarcoma tissues. Overexpressed MIR22HG repressed the viability and proliferation but enhanced apoptosis of osteosarcoma cells, which was reversed by miR-629-5p upregulation. TET3 was the target gene of miR-629-5p, and the promotive effects of upregulated miR-629-5p on the viability and proliferation as well as its repressive effect on apoptosis were abrogated via overexpressed TET3. To sum up, overexpressed MIR22HG inhibits the viability and proliferation of osteosarcoma cells, which was achieved via regulation of the miR-629-5p/TET3 axis.
Acanthoparyphium shinanense n. sp. (Digenea: Echinostomatidae) is described from chicks experimentally infected with the metacercariae encysted in 2 brackish water clam species, Ruditapes philippinarum and Coecella chinensis, in the Republic of Korea. The metacercariae were round to oval, armed with 23 collar spines, and 0.216 (0.203-0.226) mm in diameter. From 5 chicks experimentally infected each with 200 metacercariae, 34 juvenile (5-day-old worms) and 104 adult flukes (7-day-old worms) were harvested from their small intestines, with the average worm recovery rate of 13.8%. The adult flukes were 3.18 (2.89-3.55) mm long and 0.68 (0.61-0.85) mm wide, with an elongated, posteriorly tapering body, and a prominent head collar armed with 23 collar spines arranged in a single uninterrupted row. The posterior testis of A. shinanense was longitudinally elongated, which is similar to Acanthoparyphium spinulosum Johnston, 1917 but unique from the other closely related species, including Acanthoparyphium tyosenense Yamaguti, 1939, Acanthoparyphium kurogamo Yamaguti, 1939, and Acanthoparyphium marilae Yamaguti, 1934. The eggs of A. shinanense were larger than those of A. spinulosum, and the anterior extent of 2 lateral groups of vitellaria was slightly more limited in A. shinanense than in A. spinulosum. Molecular analysis of nuclear and mitochondrial genes revealed low homology with A. spinulosum from USA (96.1% in 5.8S rRNA) and Ukraine (97.9% in 28S rRNA), Acanthoparyphium n. sp. from USA (98.0% in 28S rRNA), and Acanthoparyphium sp. from Australia, Kuwait, and New Zealand. Biological characteristics, including its first intermediate host and natural definitive hosts, as well as its zoonotic capability, should be elucidated.
China has a long history of sheep (Ovis aries [O. aries]) breeding and an abundance of sheep genetic resources. Knowledge of the complete O. aries mitogenome should facilitate the study of the evolutionary history of the species. Therefore, the complete mitogenome of O. aries was sequenced and annotated. In order to characterize the mitogenomes of 3 Chinese sheep breeds (Altay sheep [AL], Shandong large-tailed sheep [SD], and small-tailed Hulun Buir sheep [sHL]), 19 sets of primers were employed to amplify contiguous, overlapping segments of the complete mitochondrial DNA (mtDNA) sequence of each breed. The sizes of the complete mitochondrial genomes of the sHL, AL, and SD breeds were 16,617 bp, 16,613 bp, and 16,613 bp, respectively. The mitochondrial genomes were deposited in the GenBank database with accession numbers KP702285 (AL sheep), KP981378 (SD sheep), and KP981380 (sHL sheep) respectively. The organization of the 3 analyzed sheep mitochondrial genomes was similar, with each consisting of 22 tRNA genes, 2 rRNA genes (12S rRNA and 16S rRNA), 13 protein-coding genes, and 1 control region (D-loop). The NADH dehydrogenase subunit 6 (ND6) and 8 tRNA genes were encoded on the light strand, whereas the rest of the mitochondrial genes were encoded on the heavy strand. The nucleotide skewness of the coding strands of the 3 analyzed mitogenomes was biased toward A and T. We constructed a phylogenetic tree using the complete mitogenomes of each type of sheep to allow us to understand the genetic relationships between Chinese breeds of O. aries and those developed and utilized in other countries. Our findings provide important information regarding the O. aries mitogenome and the evolutionary history of O. aries inside and outside China. In addition, our results provide a foundation for further exploration of the taxonomic status of O. aries.
Objective: As one of the most important metabolic organs, the liver plays vital roles in modulating the lipid metabolism. This study was to compare miRNA expression profiles of the Large White liver between two different developmental periods and to identify candidate miRNAs for lipid metabolism. Methods: Eight liver samples were collected from White Large of 70-day fetus (P70) and of 70-day piglets (D70) (with 4 biological repeats at each development period) to construct sRNA libraries. Then the eight prepared sRNA libraries were sequenced using Illumina next-generation sequencing technology on HiSeq 2500 platform. Results: As a result, we obtained 346 known and 187 novel miRNAs. Compared with the D70, 55 down- and 61 up-regulated miRNAs were shown to be significantly differentially expressed (DE). Gene ontology and Kyoto encyclopedia of genes and genomes enrichment analysis indicated that these DE miRNAs were mainly involved in growth, development and diverse metabolic processes. They were predicted to regulate lipid metabolism through adipocytokine signaling pathway, mitogen-activated protein kinase, AMP-activated protein kinase, cyclic adenosine monophosphate, phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B, and Notch signaling pathway. The four most abundantly expressed miRNAs were miR-122, miR-26a and miR-30a-5p (miR-122 only in P70), which play important roles in lipid metabolism. Integration analysis (details of mRNAs sequencing data were shown in another unpublished paper) revealed that many target genes of the DE miRNAs (miR-181b, miR-145-5p, miR-199a-5p, and miR-98) might be critical regulators in lipid metabolic process, including acyl-CoA synthetase long chain family member 4, ATP-binding casette A4, and stearyl-CoA desaturase. Thus, these miRNAs were the promising candidates for lipid metabolism. Conclusion: Our study provides the main differences in the Large White at miRNA level between two different developmental stages. It supplies a valuable database for the further function and mechanism elucidation of miRNAs in porcine liver development and lipid metabolism.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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