The embryonic zebrafish (Danio rerio) is rapidly becoming an important model organism for studies of early events in vertebrate development. Neural crest-derived pigment cell precursors of the embryonic zebrafish give rise to melanophores, xanthophores, and/or iridophores. Cell-signaling mechanisms related to the development of pigmentation and pigment pattern formation remain obscure. In this study, zebrafish embryos were treated with various signaling-related molecules - LiCl (an inositol-phosphatase inhibitor), forskolin (a protein kinase-A activator), a combination of LiCl/forskolin, and LiCl/heparin (an IP3 inhibitor) in order to identify the mechanisms involved in pigmentation. LiCl treatment resulted in ultrastructural and morphological alterations of melanophores. To identify the possible proteins responsible for this ultrastructural and morphological change, phosphorylation patterns in vitro and in vivo were analyzed. LiCl and LiCl/forskolin treatment elicited dramatic increases in the phosphorylation of a 55-kDa protein which was inhibited by heparin treatment. LiCl treatment also induced phosphorylation of a 55-kDa protein in melanophores purified from adult zebrafish. Collectively these results suggest that a LiCl-induced 55-kDa phosphoprotein plays a role in melanophore morphology and ultrastructure and ultimately effects gross pigmentation.
Kim, Sung-Dae;Lee, Whi-Min;Endale, Mehari;Cho, Jae-Youl;Park, Hwa-Jin;Oh, Jae-Wook;Rhee, Man-Hee
Journal of Life Science
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v.19
no.11
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pp.1506-1513
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2009
RGS proteins have been identified as negative regulators of G protein signalling pathways and attenuate the activity of GPCR receptors. However, information on the regulatory effects of RGS proteins in the activity of cannabinoid receptors is limited. In this study, the role of RGS proteins on the signal transduction of the CB2 cannabinoid receptor was investigated in HEK293 cells co-transfected with CB2-receptors and plasmids encoding RGS2, RGS3, RGS4 and RGS5. Treatment of cells with WIN55, 212-2, a CB2 receptor agonist, inhibited forskolin-induced cAMP response element (CRE) activity in CB2-transfected HEK293 (CB2-HEK293) cells. This inhibitory effect of WIN 55, 212-2 on CRE activity was reversed by co-transfection of CB2-HEK293 cells with RGS3, but not with RGS2, RGS4 and RGS5. However, endogenous RGS3 protein knocked down by a small interfering siRNA targeting RGS3 gene enhanced inhibition of forskolin induced CRE activity via agonist induced CB2 receptor signal transduction. These results indicate the functional role of endogenous RGS protein in cannabinoid signaling pathways and define receptor-selective roles of endogenous RGS3 in modulating CRE transcriptional responses to agonist induced CB2 receptor activity.
Surgically collected cystic fluid of Taenia solium metacestodes from patients of intracranial cystic lesion were compared in their protein composition with those from naturally infected pigs in Cheju Do, Korea and Ecuador. In non-denaturing discontinuous-polyacryla aide gel electrophoresis (disc-PAGE) , no discernible differences were recognized in banding patterns between the cystic fluids from Cheju Do and Ecuador, and between the cystic quids from pigs and human lesions except wider bands that corresponded to human albumin and T-globulin (in 4 of 9 patients). In reducing SDS-PAGE, bands in the cystic Ruid from Ecuador showed the same banding pattern with that from Cheju Do but two bands of 21 and 17 kDa were stained darker. Cystic quids (rom patients revealed the same protein compositions of the major protein bands of 94, 64, 15, 10 and 7 kDa as in the cystic fluid of pig origin, but human albumin (66 kDa), heavy and light chains of gamma globulin (55 and 22.5 kDa) were contaminated in 4 of 9 cystic fluids. Human CSF proteins seem to have been contaminated during cystic ftuid collection. In any cystic quid from patients, the majcr Protein component was 150 kDa which was subdivided into 15, 10 and 7 kDa in reducing SDS-PAGE.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.46
no.4
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pp.473-480
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2017
The aim of this study was to investigate the effects of gluten and moisture contents on the physical properties of extruded soy protein isolate. Extrusion conditions included various moisture (45, 50, and 55%) and gluten contents (20, 40, and 60%) at a fixed screw speed and die temperature of 250 rpm and $140^{\circ}C$, respectively. Specific mechanical energy input decreased as gluten content increased from 20 to 60%. Hydration ratio was highest ($293.23{\pm}13.68%$) at gluten and moisture contents of 20 and 55%, respectively. Lightness and yellowness increased as gluten content increased from 20 to 60% while redness decreased as gluten content increased. Color difference was the highest at low gluten and moisture contents. Integrity index was the highest ($71.15{\pm}0.93%$) at gluten and moisture contents of 60 and 45%, respectively. Nitrogen solubility index was not significantly affected by moisture content and was lowest ($22.46{\pm}1.11%$) at gluten and moisture contents of 60 and 55%, respectively. In conclusion, higher gluten and lower moisture contents were effective for texturization of soy protein isolate.
Using differential hybridization, a cDNA clone was isolated fortuitously from Amaranthus viridis and sequenced. This nucleotide sequence exhibited 55.1% identity with vma6 which encodes the 36-kD subunit of the vacuolar proton transporting ATPase in Saccharmoyces cerevisiae. The predicted open reading frame encodes a protein of 221 amino acid sequence with a calculated molecular weight of 25,452 and reveals high levels of similarity with subunit D polypeptide of vacuolar H -ATP(e.g., 48.5, 52.1 and 49.3% identity to the vacuolar 36-kD chain of yeast, vacuolar 32-kD polypeptide IV of human and vacuolar 28-kD protein of bovine chromaffin granules, respectively). The hydropathy index computation revealed that this predicted protein is a peripheral protein. These results indicated that the predicted protein may play a sturctural role in the vaculor H -ATPase as does gamma subunit in V-type ATPase.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.35
no.4
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pp.470-475
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2006
In order to elucidate the differences of protein profiles among soybean cultivars, the protein composition of three conventional domestic soybean cultivars and two imported ones including glyphosate-tolerant HS2906 was analyzed by total nitrogen measurement, amino acid analysis and PAGE/densitometry. There were no statistically significant differences in the levels of any amino acid, including aromatic amino acids, between glyphosale-tolerant soybean and the conventional soybean WS82. In the extraction of protein, the SDS/buffer system was more efficient than the defatting/water system. The SDS-PAGE/densitometry analysis showed that there was a similar profile of proteins among cultivars, although the amount of total protein ranged from 380.2 mg/g to 423.9 mg/g. In addition, there was no discernable difference of protein profile between glyphosate- tolerant soybean (total protein amount, 380.2 mg/g) and the conventional soybean WS82 (390.2 mg/g), although the amount of ${\beta}$-conglycinin (55 kDa) was lower in glyphosate-tolerant soybean. Meanwhile, the amount of 25 kDa protein was greater in domestic soybean cultivars than imported ones. Thus, normal PAGE/ densitometry method would be useful to analyze the difference in protein profiles of soybean proteins, and furthermore Evaluate the protein profile of proteins between GMO and conventional soybean.
The aim of this study was to identify antigens for a vaccine or drug target to control rabbit coccidiosis. A combination of 2-dimensional electrophoresis, immunoblotting, and mass spectrometric analysis were used to identify novel antigens from the sporozoites of Eimeria stiedae. Protein spots were recognized by the sera of New Zealand rabbits infected artificially with E. stiedae. The proteins were characterized by matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF/TOF-MS) analysis in combination with bioinformatics. Approximately 868 protein spots were detected by silver-staining, and a total of 41 immunoreactive protein spots were recognized by anti-E. stiedae sera. Finally, 23 protein spots were successfully identified. The proteins such as heat shock protein 70 and aspartyl protease may have potential as immunodiagnostic or vaccine antigens. The immunoreactive proteins were found to possess a wide range of biological functions. This study is the first to report the proteins recognized by sera of infected rabbits with E. stiedae, which might be helpful in identifying potential targets for vaccine development to control rabbit coccidiosis.
Changes in the alliinase activity during the hot air drying and vacuum freeze drying of garlic samples treated as the whole, sliced and crushed state were investigated. The specific activity of alliinase in raw garlic was 8.52 units/mg protein. The activity in the whole garlic prepared by the hot air drying for 8 hrs was reduced remarkably to 5.22 units/mg protein with 61% remaining and to 4.25 units/mg protein with 50% remaining for 36 hrs. The activity in the sliced garlic prepared by the hot air drying for 36 hrs was reduced to 3.55 units/mg protein with 42% remaining and the activity in the crushed garlic prepared by the hot air drying for 36 hrs was reduced to 3.12 units/mg protein with 37% remaining. The garlic sample sliced or crushed was higher than the whole state in the efficiency of drying but was lower in the remaining activity of alliinase. The activity in the whole garlic prepared by the vacuum freeze drying for 8 hrs was reduced to 7.21 units/mg protein with 85% remaining and to 5.53 units/mg protein with 65% remaining for 36 hrs. The activity in the sliced garlic prepared by the vacuum freeze drying for 36 hrs was reduced to 4.55 units/mg protein with 53% remaining and the activity in the crushed garlic prepared by the vacuum freeze drying for 36 hrs was reduced to 4.16 units/mg protein with 49% remaining. The remaining activity of alliinase in the garlic samples prepared by the vacuum freeze drying was higher than the remaining activity in the garlic samples prepared by the hot air drying.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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