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No Relevance of NF-${\kappa}B$ in the Transcriptional Regulation of Human Nanog Gene in Embryonic Carcinoma Cells

  • Seok, Hyun-Jeong;Kim, Young-Eun;Park, Jeong-A;Lee, Young-Hee
    • 한국발생생물학회지:발생과생식
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    • 제15권1호
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    • pp.25-30
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    • 2011
  • Embryonic stem (ES) cells can self-renew maintaining the undifferentiated state. Self renewal requires many factors such as Oct4, Sox2, FoxD3, and Nanog. NF-${\kappa}B$ is a transcription factor involved in many biological activities. Expression and activity of NF-${\kappa}B$ increase upon differentiation of ES cells. Reportedly, Nanog protein directly binds to NF-${\kappa}B$ protein and inhibits its activity in ES cells. Here, we found a potential binding site of NF-${\kappa}B$ in the human Nanog promoter and postulated that NF-${\kappa}B$ protein may regulate expression of the Nanog gene. We used human embryonic carcinoma (EC) cells as a model system of ES cells and confirmed decrease of Nanog and increase of NF-${\kappa}B$ upon differentiation induced by retinoic acid. Although deletion analysis on the DNA fragment including NF-${\kappa}B$ binding site suggested involvement of NF-${\kappa}B$ in the negative regulation of the promoter, site-directed mutation of NF-${\kappa}B$ binding site had no effect on the Nanog promoter activity. Furthermore, no direct association of NF-${\kappa}B$ with the Nanog promoter was detected during differentiation. Therefore, we conclude that NF-${\kappa}B$ protein may not be involved in transcriptional regulation of Nanog gene expression in EC cells and possibly in ES cells.

Anatomy of the diaphyseal nutrient foramen in the long bones of the pectoral limb of German Shepherds

  • Sim, Jeoung-Ha;Ahn, Dongchoon
    • 대한수의학회지
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    • 제54권3호
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    • pp.179-184
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    • 2014
  • This study investigated the anatomy of the nutrient foramen (NF) in German Shepherds by recording the number, site, position, and direction of penetration of the nutrient canal (NC) in the humerus, radius, and ulna of 50 individuals. The site index of the nutrient foramen (SI) was calculated as the ratio of the length to the NF site from the proximal end to the greatest length of the bone. The NF diameter was measured using different sized needles. Most humeri had only one NF on the caudal surface, particularly on the lateral supracondylar crest, or distal cranial surface. All radii had one NF, usually on the caudal surface, while most ulnae had one NF located on either the cranial or lateral surfaces. The SI and NF diameters were 58.0~59.5% and 0.73~0.78 mm in the humerus, 30.4~30.9% and 0.74~0.76 mm in the radius, and 29.3~29.8% and 0.67~0.68 mm in the ulna, respectively. With the exception of the relatively proximal NF of the radius, the direction of penetration followed Berard's rule. This study provides novel information on the location and diameter of the NF and direction of the NC in the long bones of the pectoral limb of German Shepherds.

잔류가스분석기 및 발광 분광 분석법을 통한 중간압력의 NF3 플라즈마 실리콘 식각 공정 (Silicon Etching Process of NF3 Plasma with Residual Gas Analyzer and Optical Emission Spectroscopy in Intermediate Pressure)

  • 권희태;김우재;신기원;이환희;이태현;권기청
    • 반도체디스플레이기술학회지
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    • 제17권4호
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    • pp.97-100
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    • 2018
  • $NF_3$ Plasma etching of silicon was conducted by injecting only $NF_3$ gas into reactive ion etching. $NF_3$ Plasma etching was done in intermediate pressure. Silicon etching by $NF_3$ plasma in reactive ion etching was diagnosed through residual gas analyzer and optical emission spectroscopy. In plasma etching, optical emission spectroscopy is generally used to know what kinds of species in plasma. Also, residual gas analyzer is mainly to know the byproducts of etching process. Through experiments, the results of optical emission spectroscopy during silicon etching by $NF_3$ plasma was analyzed with connecting the results of etch rate of silicon and residual gas analyzer. It was confirmed that $NF_3$ plasma etching of silicon in reactive ion etching accords with the characteristic of reactive ion etching.

결핵균을 탐석한 말초혈액단핵구 배양상층액에 의해 유도되는 폐상피세포주에서의 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 분비기전 (NF-${\kappa}B$ Dependent IL-8 Secretion from Lung Epithelial Cells Induced by Peripheral Blood Monocytes Phagocytosing Mycobacterium Tuberculosis)

  • 박재석;지영구;최은경;김건열;이계영
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제51권4호
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    • pp.315-324
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    • 2001
  • 연구배경 : IL-8은 강력한 화학주성인자로서 결핵감염 부위로 염증세포들을 동원함으로서 결핵균에 대한 숙주의 방어기전에 있어서 중요한 역할을 한다. IL-8의 유전자의 발현에 있어서 NF-${\kappa}B$가 중요한 역할을 한다. 저자들은 결핵 감염시 폐상피세포가 NF-${\kappa}B$ 의존성으로 IL-8을 분비하는지 알아보고자 하였다. 방 법 : 말초혈액단핵구에 결핵균을 감염시키고 24시간 배양 후 배양상층액(CoMTB)을 얻었다. 결핵균, CoMTB로 자극한 A549 세포주의 IL-8 분비 정도를 ELISA 방법으로 측정하였다. CoMTB로 자극한 A549 세포주의 IL-8 mRNA 의 발현 정도를 RT-PCR로, $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해를 western blot 분석으로, NF-${\kappa}B$의 핵이동과 DNA 결합은 electrophoretic mobility shift assay(EMSA)를 이용하여, 그리고 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자의 전사활성은 luciferase reporter gene assay를 이용하여 측정하였다. 결 과 : A549 세포주를 CoMTB로 24시간 자극하여 얻은 배양액의 IL-8 농도는 $46.8{\pm}4.8\;ng/ml$로 분비하여 결핵균으로 직접 자극하였을 때의 $6.8{\pm}2.9\;ng/ml$보다 높았다. CoMTB로 A549 세포주를 자극하였을 때 IL-8 mRNA의 발현이 증가하였고, $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해가 일어났으며, NF-${\kappa}B$의 핵이동과 DNA 결합이 일어났으며, NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자의 전사활성이 증가하였다. 결 론 : 결핵병변에서 폐상피세포는 결핵균을 탐식한 단핵식 세포와의 상호작용에 의해 NF-${\kappa}B$ 의존성으로 IL-8을 분비한다.

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나노여과에 의한 중금속 함유 산성 폐에칭액의 재생(I): 상용 나노여과 막의 산 안정성 평가 (Recycling of Acidic Etching Waste Solution Containing Heavy Metals by Nanofiltration (I): Evaluation of Acid Stability of Commercial Nanofiltration Membranes)

  • 염경호;신화섭;진천덕
    • 멤브레인
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    • 제19권4호
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    • pp.317-323
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    • 2009
  • 본 연구는 전자 및 반도체 산업의 각종 에칭공정에서 발생되는 중금속 함유 산성 폐에칭액을 NF 막분리법을 이용하여 에칭액 회수와 중금속 처리를 효율적으로 수행하기 위한 NF 막공정의 운전조건을 설정하기 위한 기본 자료를 확보하는데 있다. 이를 위해 3가지 종류의 상용 NF 막(General Electric Co. Duraslick NF-4040 막, Dow Co. Filmtec LP-4040 막 및 Koch Co. SelRO MPS-34 4040 막)을 대상으로 $Pb^{+2}$ 중금속을 함유한 모의 질산 폐에칭액의 회분식(dead-end) 막여과 실험을 수행하여 폐에칭액의 투과 플럭스와 $Pb^{+2}$ 중금속 이온의 총괄 배제도를 측정하여 폐에칭액 처리에 우수한 NF 막을 선정하였다. 실험결과 질산용액에의 막 보관기간이 길수록, 질산용액의 pH가 낮을수록 산에 의한 막의 손상이 심해졌으며, 질산에 의한 막의 손상은 SelRO MPS-34 4040 < Duraslick NF-4040 < Filmtec LP-4040 막의 순서로 심하게 일어났다. 또한 질산용액에의 막 보관기간이 길수록, 질산용액의 pH가 낮을수록 $Pb^{+2}$ 이온의 배제도가 낮아졌으며, 배제도 값은 Duraslick NF-4040 막의 경우에는 95% 수준의 초기 배제도 값에서 질산용액에의 4달 보관 후에는 20% 수준으로, SelRO MPS-34 4040 막의 경우에는 초기 85% 수준에서 4달 후 65% 수준으로, Filmtec LP-4040 막의 경우에는 초기 90% 수준에서 4달 후 10% 이하 수준으로까지 감소하였다. 3종류의 상용 NF 막 중 내산성 용도로 개발된 SelRO MPS-34 4040 막이 중금속 함유 산성 폐에칭액의 재생에 가장 적합하였다.

폐암세포주에서 NFκ 활성 억제를 통한 Proteasome 억제제 MG132의 TRAIL-유도성 Apoptosis 감작 효과 (The Proteasome Inhibitor MG132 Sensitizes Lung Cancer Cells to TRAIL-induced Apoptosis by Inhibiting NF-κ Activation)

  • 서필원;이계영
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제65권6호
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    • pp.476-486
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    • 2008
  • 연구배경: 정상세포는 보호되고 종양세포에 독성을 보인다고 알려진 TNF유전자족으로 새로이 확인된 TRAIL이 폐암세포에서 보이는 아포프토시스 효과를 확인하고, 아포프토시스로부터 세포를 보호하는 전사인자 $NF-{\kappa}B$가 TRAIL에 의하여 활성화 되는 정도를 평가하여 MG132의 $NF-{\kappa}B$활성억제가 TRAIL 유도성 아포프토시스를 감작시키는지를 확인하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방법: A549(wt p53) 및 NCI-H1299(null p53) 폐암세포주를 사용하였다. 세포독성 검사는 MTT assay를 이용하였고 아포프토시스는 Annexin V assay와 FACS 분석을 이용하였다. $NF-{\kappa}B$ 전사활성은 luciferase reporter gene assay를 이용하였고 $I{\kappa}B{\alpha}$ 분해는 western blot을 이용하였으며, TRAIL에 의해 활성화된 $NF-{\kappa}B$와 DNA 결합은 electromobility shift assay와 anti-p65 antibody를 이용한 supershift assay로 확인하였다. 결과: 1) TRAIL 100 ng/ml 농도에서 wild-type p53인 A549 폐암세포는 34.4%, p53 null인 NCI-H1299 폐암세포는 26.4%의 세포사를 관찰하였다. 2) Luciferase reporter gene assay로서 TRAIL에 의한 $NF-{\kappa}B$의 활성이 A549 $IgG{\kappa}B-luc$세포에서 2.45배 증가하고 NCI-H1299 $IgG{\kappa}B-luc$세포에서는 1.47배 증가함을 관찰하여 TRAIL에 의하여 $NF-{\kappa}B$가 활성화됨을 확인하였다. 3) MG132의 전처치로 TRAIL에 의한 $NF-{\kappa}B$의 활성이 A549 세포와 NCI-H1299 세포에서 각각 기저수준의 0.24, 0.21배로 강력히 억제되었다. 4) TRAIL단독으로 30% 전후의 세포독성이 MG132 전처치 후 TRAIL을 투여하면 두 세포주 모두에서 80% 이상의 세포독성이 관찰되어 MG132가 TRAIL유도성 아포프토시스에 감작효과가 있음을 확인하였다. 결론: 이상의 결과로 TRAIL에 상대적인 내성을 보이는 폐암세포주에서 MG132가 $NF-{\kappa}B$ 활성억제로서 TRAIL유도성 아포프토시스를 강화시키는 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구는 향후 폐암치료에 있어서 TRAIL유도성 아포프토시스가 이용될 수 있는 가능성을 확인한 기초자료가 된다고 생각된다.

열무 재배를 위한 시설하우스 폐양액의 비료 효과 (Fertilizer Effect of Waste Nutrient Solution in Greenhouses for Young Radish Cultivation)

  • 홍영신;문종필;박민정;손진관;윤성욱
    • 생물환경조절학회지
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    • 제31권4호
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    • pp.460-467
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    • 2022
  • 본 연구에서는 양액재배 시 발생되는 폐양액의 적절한 농업적 이용방안을 강구하기 위해 폐양액의 비료 효과시험, 토양컬럼 시험, 그리고 작물 재배시험을 수행하였다. 폐양액의 비료 효과시험은 무기질소를 기준으로 질소비료와 폐양액의 토양 처리에 따른 열무의 생육특성과 토양의 화학적 특성을 조사하였다. 폐양액 비료 효과시험과 작물 재배시험을 위한 토양에 대한 폐양액의 처리는 무처리; A, 질소비료 100%; B, 질소비료 70%+폐양액 30%; C, 질소비료 50%+폐양액 50%; D, 질소비료 30%+폐양액 70%; E 총 5개 처리구로 하였다. 토양컬럼 시험을 위한 토양에 대한 폐양액의 처리는 무처리, 질소비료 100%, 폐양액 50%+질소비료 50% 3개 처리구로 하였다. 폐양액의 화학성은 pH 6.0, EC 2.4dS·m-1, 총인(T-P) 28mg·L-1, 암모늄태 질소(NH4-N) 5.0mg·L-1, 질산태 질소(NO3-N) 301mg·L-1로 나타났다. 토양의 화학성은 pH 5.51, EC 0.31dS·m-1, 유기물 2.08g·kg-1, 질산태 질소 9.64mg·kg-1, 암모늄태 질소 3.20mg·kg-1으로 나타났다. 질소비료 50% 이하와 폐양액 50% 이상의 비율이 열무 생육에 효과가 높은 것으로 나타났다. 폐양액을 질소비료와 함께 혼합하여 적용한 C-E 처리구에서 토양의 이화학성은 질소비료만을 적용한 B 처리구와 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 토양컬럼 시험 결과 질소비료 100%와 폐양액 50%+질산비료 50% 처리구의 NO3와 NH4의 농도는 큰차이가 없는 것으로 나타났다. 폐양액을 화학비료의 표준시비량을 기준으로 이용하여 토양에 처리하면 토양 내 질소 성분의 이동과 주변의 영향은 일반 화학비료와 유사하게 나타나는 것으로 판단된다. 열무 토경재배에 폐양액과 질소비료를 혼합하여 사용하면 폐양액의 재이용으로 환경적 부담도 줄일 수 있고, 질소비료의 사용량도 줄일 수 있어 농가에 경제적 부담 감소와 열무 생산량 증대 효과도 기대할 수 있다.

RBL-2H3 비만세포의 알레르기 염증 반응에 미치는 생료사물탕(生料四物湯)의 영향 (Suppressive Effect of SaengRyoSaMulTang on Activated RBL-2H3 Mast Cells)

  • 손미주;한재경;김윤희
    • 대한한방소아과학회지
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    • 제25권1호
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    • pp.28-39
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    • 2011
  • Objectives: SaengRyoSaMulTang is a herbal formula in Oriental Medicine, known anti-allergens. However, its mechanism and cellular targets have not been found yet. Thus the study has developed to investigate the suppressive effect of SaengRyoSaMulTang. Methods: In the study, cellular viability, IL-4, IL-13 mRNA expression, IL-4, IL-13 production, manifestations of GATA-1, GATA-2, NF-AT1, NF-AT2, AP-1 and NF-${\kappa}$B p65 transcription factors were examined by Real-Time PCR, ELISA analysis and western blotting. Results: As a result of treating with SaengRyoSaMulTang extract(SRSMT), the study has shown that the amount of Th2 cytokines, which include PI induced IL-4 and IL-13, plays a significant role in suppressing effect. RBL-2H3 mast cells significantly suppressed the PI-induced Th2 cytokine production including IL-4 and IL-13 in a dose dependent manner. PI-induced IL-4 and IL-13 production was significantly suppressed by SRSMT intervention. Western blot analysis of transcription factors involving IL-4 and IL-13 expression also revealed a prominent decreases of mast cell's specific transcription factors including GATA-1, GATA-2, NF-AT2, c-Jun and c-Fos, but NF-${\kappa}$B p65. Conclusions: The study suggests that the anti-allergenic activities of SRSMT may regulate the transcription factors GATA-1, GATA-2, NF-AT2, c-Jun and c-Fos inhibiting Th2 cytokines IL-4 and IL-13 in mast cells.

ZAS3 promotes TNFα-induced apoptosis by blocking NFκB-activated expression of the anti-apoptotic genes TRAF1 and TRAF2

  • Shin, Dong-Hyeon;Park, Kye-Won;Wu, Lai-Chu;Hong, Joung-Woo
    • BMB Reports
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    • 제44권4호
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    • pp.267-272
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    • 2011
  • ZAS3 is a large zinc finger transcription repressor that binds the ${\kappa}B$-motif via two signature domains of ZASN and ZASC. A loss-of-function study showed that lack of ZAS3 protein induced accelerated cell proliferation and tumorigenesis. Conversely, gain-of-function studies showed that ZAS3 repressed $NF{\kappa}B$-activated transcription by competing with $NF{\kappa}B$ for the ${\kappa}B$-motif. Based on these observations, we hypothesize that ZAS3 promotes apoptosis by interrupting anti-apoptotic activity of $NF{\kappa}B$. Here, we present evidence that upon $TNF{\alpha}$ stimulation, ZAS3 inhibits $NF{\kappa}B$-mediated cell survival and promotes caspase-mediated apoptosis. The inhibitory effect of ZAS3 on $NF{\kappa}B$ activity is mediated by neither direct association with $NF{\kappa}B$ nor disrupting nuclear localization of $NF{\kappa}B$. Instead, ZAS3 repressed the expression of two key anti-apoptotic genes of $NF{\kappa}B$, TRAF1 and TRAF2, thereby sensitizing cells to $TNF{\alpha}$-induced cell death. Taken together, our data suggest that ZAS3 is a tumor suppressor gene and therefore serves as a novel therapeutic target for developing anti-cancer drugs.

Wnt-C59 inhibits proinflammatory cytokine expression by reducing the interaction between β-catenin and NF-κB in LPS-stimulated epithelial and macrophage cells

  • Jang, Jaewoong;Song, Jaewon;Sim, Inae;Yoon, Yoosik
    • The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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    • 제25권4호
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    • pp.307-319
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    • 2021
  • Dysregulation of the Wnt pathway causes various diseases including cancer, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, schizophrenia, osteoporosis, obesity and chronic kidney diseases. The modulation of dysregulated Wnt pathway is absolutely necessary. In the present study, we evaluated the anti-inflammatory effect and the mechanism of action of Wnt-C59, a Wnt signaling inhibitor, in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated epithelial cells and macrophage cells. Wnt-C59 showed a dose-dependent anti-inflammatory effect by suppressing the expression of proinflammatory cytokines including IL6, CCL2, IL1A, IL1B, and TNF in LPS-stimulated cells. The dysregulation of the Wnt/β-catenin pathway in LPS stimulated cells was suppressed by WntC59 treatment. The level of β-catenin, the executor protein of Wnt/β-catenin pathway, was elevated by LPS and suppressed by Wnt-C59. Overexpression of β-catenin rescued the suppressive effect of Wnt-C59 on proinflammatory cytokine expression and nuclear factor-kappa B (NF-κB) activity. We found that the interaction between β-catenin and NF-κB, measured by co-immunoprecipitation assay, was elevated by LPS and suppressed by Wnt-C59 treatment. Both NF-κB activity for its target DNA binding and the reporter activity of NF-κB-responsive promoter showed identical patterns with the interaction between β-catenin and NF-κB. Altogether, our findings suggest that the anti-inflammatory effect of Wnt-C59 is mediated by the reduction of the cellular level of β-catenin and the interaction between β-catenin and NF-κB, which results in the suppressions of the NF-κB activity and proinflammatory cytokine expression.