• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제35권1호
• /
• pp.55-62
• /
• 1997

톡소포자충(ToxopLasmn gondii)은 다양한 항원을 가지고 있으며, 이들 항원의 분석은 세 포매개성 면역반응 및 톡소포자충증의 면역학적 진단방법의 연구에 매우 중요하다 본 연구는 톡소포자충의 여러 단백질중 대부분의 충주(strain)에 존재하는 분자량 30 kDa의 단백질을 단클론 항체를 이용하여 분리한 후. 30 kDa 항원의 면역학적 특성을 초음파 추출 조항원과 비교 평가하였다. 톡소포자충의 세포막 항원으로 면역한 마우스 비장세포와 마우스 Sp2/0-Agl4 골수종세포를 융합하여 8개의 단클론 항체를 Western blot으로 확인하였다 이들 단클론 항체는 높은 특이성을 보였으며, $IgG_{2b}가{\;}5개,{\;}IgG^{1}이{\;}2개,{\;}IgG_{2a}$가 1개였다. 간접형광항체법으로 충체내 위치를 관찰한 결과. 30 kDa 항원은 tachyzoite의 표면 세포막에 주로 분포하였다. 단클론 항체와 CNBr-activated Sepharose 4B를 coupling하여 만든 immunoafrnity chromatography를 이용 하여 30 kDa 항원을 분리하였다. 분리한 30 kDa 항원으로 자극시킨 마우스 복강대식세포의 $NO_2^{-}$ 생산량은 초음파 추출 조항원 사용군에 비해 유의하게 증가하였으나 대식세포의 탐식능은 유의한 차이가 없었다. 또한 ELISA로 톡소포자충증을 진단시, 톡소포자충 30 kDa 항원 사용군은 조항원 사용군에 비해 민감도의 변화는 없었으나 특이성은 증가하였다 이상으로 보아 톡소포자충 30 kDa 항원은 감염 방어 면역 효과가 있었으며 진단에 이용시 특이성을 더 높일 수 있었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제36권1호
• /
• pp.37-46
• /
• 1998

인체 간흡충증의 현증감염 시기에 생산된 특이 IgG 항체와 반응하는 간촘충 특이항원을 규명하였다. 간흡충 성충의 조항원 및 서로 다른 조건에서 회수한 4가지 분비배설항원 (CsE)의 항원성을 면역이적법 소견으로 비교하였다 CsE2의 30. 7 kDa 항원이 간흡충 환자혈청과 강한 면역반응을 보였다. 이 항원들은 프라지콴텔 완치 후 6개월 혈청과는 반응하지 않았으나 투약 후 간흡충 충란이 검출된 환자의 치료 후 혈청과는 반응하여 현증감염의 면역반응과 관련된다고 판단하였다. 그러나. 30 Ka항원은 폐흡충 요코가와흉충 감염혈청과 교차반응하였고. 7 kDa 항원은 반응하지 않았다. 또. 30 kDa 항원은 일부 간흡충 과거 감염자 혈청과 반응하였으나 7 kDa 항원은 반응하지 않아 7 님)a 항원의 특이도가 높았다 간흡충 유행지역에서 7 kDa 항원의 민감도를 파악한 바 간흡충 현증감염자 25명 중 23명 (92%) 간홉충 요코가와흡충 중복감염자 11명 중 10명 (91%)과 반응하였다. 반면 간흡충 과거감염자 15명 중 6명 (40%), 요코가와흡충 감염자 7명 중 3명 (43%)과 반응하였다. 따라서. CsE2의 7 kDa 항원은 인체 간흡충 현증감염의 표식자가 되는 간흡충 특이 항원으로 판단된다.

• IMMUNE NETWORK
• /
• 제7권1호
• /
• pp.26-30
• /
• 2007

Background: Mycobacterial antigens released as PIM, LM, LAM, lipoproteins and other cellular factors may contribute to macrophage and dendritic cell activation through pattern recognition receptors such as TLRs. In this study, we assessed cytokine production and ERK activation with stimulation of several major mycobacterial antigens. Methods: Purified mycobacterial antigens (10, 22, 30, 38kDa) and recombinant antigens (6, 16, 19, 38kDa, Ag85A antigen) were studied. The production of cytokines (TNF-${\alpha}$, IL-12, IL-6) was measured by ELISA. The ERK activation was detected by western blotting. The expression of TLR2 or TLR4 was measured by flow cytometry. Results: Among purified antigens only 30kDa antigen induced production of IL-6 or TNF-${\alpha}$ in THP-1 macrophage cells. When THP-1 macrophage cells were treated with 30kDa antigen, phosphorylation of ERK was detected. ERK activation also occurred in TLR2 transfectant HEK293 cells with 30kDa antigen stimulation. Conclusion: 30kDa antigen is one of the major mycobacterial antigens inducing cytokine production and MAP kinases phosphorylation in macrophages.

• 대한수의학회지
• /
• 제41권1호
• /
• pp.51-57
• /
• 2001

A procedure for extraction and purification of 8 kDa antigen of Brucella abortus RB51 was developed. Bacteria heat inactivated at $60^{\circ}C$, 30 min was extracted by 1% sarcosine and followed by fluid pressure liquid gel filtration chromatography of 2 series, Superose 12 HR 10/30 and Sephacryl S-100. There was produced $71.46{\mu}g/g$(wet) of 8 kDa antigen, and it resisted 1% trypsin, solved 1% triton X-100 higher than distilled water and inactivated 0.1% proteinase K. These results show that 8 kDa antigen may be a lipoprotein existed cell surface of B. abortus RB51. Also, we developed ELISA using purified 8 kDa surface antigen of Brucella abortus RB51 strain, its specificity and sensitivity was 95.0%, 98.6%, respectively. As compared with dot-blot assay using whole cell and ELISA using 8 kDa antigen, its correlation was 93.5%.

• IMMUNE NETWORK
• /
• 제1권3호
• /
• pp.250-259
• /
• 2001

To determine if initial infection with Mycobacterium tuberculosis changes the balance of cytokines between T cells and macrophages, we evaluated interferon (IFN)-${\gamma}$), interleukin-12 (IL)-12, and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ productions by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 15 untreated active pulmonary tuberculosis (TB) patients and 12 healthy tuberculin reactors (HTR). Freshly isolated PBMC were stimulated with Triton X-100 solubilized protein (TSP), 30-kDa or purified protein derivatives (PPD) antigen for 6, 18 and 96 hours. IL-12 p40 production by antigen-stimulated PBMC from TB patients was significantly decreased compared with that in HTR. In addition, IFN-${\gamma}$ production was significantly depressed in TB patients than that in HTR at a 96-hr stimulation. However, TNF-${\alpha}$ production was significantly higher in antigen-stimulated PBMC from TB than that of HTR. A pronounced increase in IFN-${\gamma}$ protein followed neutralization of IL-10 in early TB patients. However, neutralization of TNF-${\alpha}$ did not significantly alter IFN-${\gamma}$ induction in PBMC from TB patients. There were no significantly differences in the cytokine productions among three proteins, TSP, 30-kDa or PPD antigen. These results indicate that development of TB may be strongly associated with dysregulated productions of IL-12, IFN-${\gamma}$ and TNF-${\alpha}$, during the initial immune responses to M. tuberculosis. Further understanding of operative cytokine networks during human immune cell responses to protein antigens of M. tuberculosis may improve strategies for vaccine development.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제30권4호
• /
• pp.323-328
• /
• 1992

질트리코모나스의 항원 분석을 시행하기 위하여 병원성이 화인된 질트리코모나스(Trichamonas vaginnlis) 6개주(HY-1,2,3,9,10,13)의 항일을 sodium dodecyl sulfate - polyacrlyamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) 한 결과 Coomassie brilliant blue 염색상에서 peptide의 밀도 차이를 제외하고는 주간에 동일한 단백질 분포양상을 보였으며, 12kDa에서 170kDa까지 약 35개 정도의 분획이 관찰되었다. 또한 질트리코모나스 HY월주를 항원으로 하고 질트리코모나스 6개주에 대해 면역된 마우스의 항혈청을 이용하여 enzyme-linked immunoelectrotransfer blot(EITB)을 시행한 결과 각 주마다 서로 다른 반응양상을 보였으며, 51kDa과 96kDa에서 질트리코모나스의 특이한 공통 반응대가 관찰되었고, 각기 다른 6개주의 항원에 대해 HY-1주의 항혈청으로 ETTB한 결과 HY-1 함원(homologous antigen)과의 반응 양상과 타항친(heterologous antigen)과의 반응 양상간의 특이한 차이는 관찰할 수 없었다. 이상의 결과로 보아 질트리코모나스 각 주의 항원은 항인-항체 반응에서 주간에 이종(antigenic heterogeneity)을 형성하고 있는 것으로 보였으며, 41, 47, 55, 74 및 94kDa에서 질트리코모나스애 특이한 공통반응대를 보었으며, 이 부분이 숙주-기생충의 상 호관계에 있어서 중요한 의의를 내포하고 있을 것으로 생각된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제42권4호
• /
• pp.195-200
• /
• 2004

We investigated the induction of resistance to Haemaphysalis longicornis infestation in rabbits that had been immunized with recombinant H. longicornis P27/30 protein. The success of immunological control methods is dependent upon the use of potential key antigens as tick vaccine candidates. Previously, we cloned a gene encoding 27 kDa and 30 kDa proteins (P27/30) of H. longicornis, and identified P27/30 as a troponin I-like protein. In this study, rabbits that were immunized with recombinant P27/30 expressed in Escherichia coli showed the statistically significant longer feeding duration for larval and adult ticks (P<0.05), low engorgement rates in larval ticks (64.4%), and an apparent reduction in egg weights, which suggest that H. longicornis P27/30 protein is a potential candidate antigen for a tick vaccine. These results demonstrated that the recombinant P27/30 protein might be a useful vaccine candidate antigen for biological control of H. longicornis.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제32권4호
• /
• pp.249-258
• /
• 1994

톡소포자충(Tomplasmngondii)은 세포내에 기생하는 구포자충(Cuidia)의 일종으로 항원은 여러 가지 단백질로 구성되어 있으며 이들 항원의 분석은 면역학적 생화학적인 면에서 시도 해 볼 필요가 있다. 톡소포자충(RH주) tachyzoite의 용해물 및 분비항원을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)로 단백질 분획을 관찰하고 면역 전기영동이적법 (EITB, enzyme-linked immunelectrohansfer blot)을 시행하여 반응대를 관찰하였다. 토끼 (New Zealand산) 또는 BALB/c마우스를 톡소포자충으로 면역 또는 감염시키고 3주 또는 7주 후에 채혈 하였다. 면역 후 토끼나 마우스 혈청은 간접형광항체법(IFA)으로 항체가 1:1024 또는 1 : 128임을 확인하였다. 톡소포자충 용해물 및 분비항원으로 SDS-PAGE를 시행하였을 때 10 kDa에서 220 kDa까지 광범위한 단백질 분포대를 보였다. 톡소포자충 용해물 항원을 IgG 항혈청과 반응시켰을 때 주요 항원의 분자량은 23에서 35 kDa까지 5개의 반응대를 관찰하였으며 IgG와 IgM의 공동반응 대는 24. 27, 30. 35 kDa에서 관찰되었다. 분비항원을 IgG 항혈청과 반응시켰을 때 감염 마우스 의 복강액을 항원으로 한 경우 33(P30), 45 kDa의 반응대가 주요 항원임을 알 수 있었고 톡소포자 충을 CHL 세포로 in vitro에서 배양시킨 후 배양액의 상청액을 항원으로 EITB를 시행하였을 때 20 kDa. 30 kDa 이하의 분획에서 반응대가 관찰되었다. 이상으로 30 kDa 항원이 톡소포자충 tachyzoite의 용해물 뿐만 아니라 분비물에서도 관찰되는 중요한 항원임을 알 수 있었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제40권2호
• /
• pp.83-88
• /
• 2002

The 8 kDa antigenic protein of Clonorchis sinensis was partially purified by ammonium sulfate precipitation and subsequently by a column chromatographic steps. The purified protein was separated into 7 and 8 kDa protein bands through SDS-tricine gel electrophoresis, while the protein was fecund to migrate to a 8 kDa band in 7.5-15% SDS-PAGE. The molecular weight of the antigen was estimated to be 110 kDa by Superose 6 HR 10/30 gel filtration. The purified antigen strongly reacted with the human sera of clonorchiasis. The hyperimmune sera of BALB/c mice immunized against the 8 kDa protein were reacted with both the crude extract and the excretory-secretory product of adult worms, but not with the metacercarial extract. Immunohistochemical staining demonstrated that the protein was distributed to the tegument and subtegumental cells and also to the seminal receptacle. The present findings suggest that the 8 kDa protein is a partition of the multicomplek protein originating from various organs of adult C. sinenis, and that it is composed of several 7 and 8 kDa proteins.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제32권1호
• /
• pp.35-42
• /
• 1994

간흡충 특이 IgG 항체와 간흡충 분비배설항원간의 면역반응이 간흡충 감염과 치료에 의해 어떻게 변화되고 치료 후 소실되는 것이 있는지 관찰하였다. 간흡충 피낭유충 150, 450개씩 토끼에 감염시키고 감염대조군은 22개월. 프라지콴텔 치료군은 감염 4개월에 투약하였으나 완치되지 않아 이후 $4\frac{1}{2}$개월에 재투약하여 완치시킨 후 13개월까지 관찰하였다. 간흡충 분비배설항원은 SDS-PAGE에서 114, 102, 94, 80, 66, 63, 61, 59, 54, 52, 50, 47, 45, 42, 40, 38, 34, 33, 30, 27, 25, 23, 20, 19, 18, 17, 16, 12.5, 12, 11.5 kDa 단백질 구성이었다. 이중 항 원 단백질은 감염혈청과 치료후 혈청으로 Immunoblot할 경우 66, 63(A군) 54-38(B군) 34. 33(C군), 30-23(D군) 20-14(I군) 12, 12.5, 11.5(K군) kDa 단백질이었다. 특히 33. 27, 13. 12.5 kDa 항원은 감염기간 동안 가장 강한 면역반응을 나타낸 항원이었고 피낭유층 감염강도에 의한 차이는 없었다. 또한 투약은 했으나 완치되지 않은 4개월여 동안 면역반응의 변화는 없었다. 치료후 면역반응은 33 27 kDa 항원의 경우 환치후 13개월까지 지속되었고 치료전과 정도 차이가 없었다. 그러나 13, 12.5 kDa 항원의 면역반응은 완치후 1개월부터 약화되기 시작하여 6 개훨이면 소멸되는 양상이 뚜렷하였다. 12.5 MDa 항원은 SDS-PAGE상 단백질 함량이 많고 간흡충 감염의 강한 항원이면서 치료 후에는 특이항체와의 면역반응이 치료전에 비해 현격히 감소되므로 간흡충 현증 감염만을 혈청학적으로 진단해 줄 수 있는 항원으로 판단하고 간흡충 'K2-항원'이라 명명하였다.