Effects of gibberellin on alpha and beta-amylase activities of Aspergillus orygae var. microsporus have been studied. Results obtained are as follows: 1. The growth of mycelium and dry weight of surface ped was accelerated by 0, 0001% gibberellin solution, spores of Aspergillus oryzae var. microsporus. were preveously soaked for three days. 2. Adding to culture media with 0, 0015% gibberellin, alpha-amylase was increased 50% much as beta-Amylase was as much as 50%.
For the production of ${\alpha}$-amylase cloned from Bacillus licheniformis expressed in E. coli, cultivating factors including the concentrations of glucose, maltose and acetic acid were investigated. The results were as follows: 1) Maximum ${\alpha}$-amylase yield and maximum specific production rate obtained from glucose source were better than those achieved from maltose source. 2) The optimum production yield of ${\alpha}$-amylase was obtained at 1.0ml/$\ell$ or less of initial acetic acid concentration.
쌀과 히솝을 이용하여 히솝쌀음료를 가공하고자 제조특성을 조사하였다. 히솝쌀음료의 제조조건은 amylase 함량($X_1$, 1~5 mL), 당화시간($X_2$, 10~18 hr) 및 히솝 함량($X_3$, 1.0~3.0 g)으로 당화 후 당도, 황색도, 관능적 특성을 반응표면분석을 통하여 모니터링 하였다. 당화 중 당 함량이 가장 많이 생성되는 조건은 amylase 함량 4.96 mL, 당화시간 14.93 hr 및 히솝 함량 2 g에서 $9.62^{\circ}Brix$로 나타났다. 황색도인 Hunter's color b가 가장 높게 나타나는 조건은 amylase 함량 1.90 mL, 당화시간 16.64 hr 및 히솝 함량 2.51 g에서 $14.86^{\circ}Brix$로 나타났다. 색상에 대한 최대의 관능평점은 amylase 함량 4.60 mL, 당화시간 15.66 hr 및 히솝 함량 1.57 g에서 4.09로 나타났다. 향미에 대한 최대의 관능평점은 amylase 함량 3.46 mL, 당화시간 10.79 hr 및 히솝 함량 1.45 g에서 3.99로 나타났다. 맛에 대한 최대의 관능평점은 amylase 함량 3.67 mL, 당화시간 17.64 hr 및 히솝 함량 1.76 g에서 3.17로 나타났다. 소비자의 종합적인 선호도를 나타내는 전반적인 기호도는 amylase 함량 3.73 mL, 당화시간 13.66 hr 및 히솝 함량 1.85 g에서 3.61로 가장 높게 나타나 최적조건을 설정할 수 있었다.
${\alpha}$-Amylase와 glucoamylase를 동시에 안정하게 분비하여 전분을 일단계로 직접 에탄올로 발효시킬수 있는 효모 균주를 개발하기 위하여 glucoamylase를 분비하는 Saccharomyces diastaticus hybrid 균주에 쥐의 침샘 유래의 ${\alpha}$-amylase cDNA 유전자를 plasmid vector를 이용하여 도입하였다. 이 균주로부터 효소생산에 필요한 유전자를 잃어버림이 없이 안정하게 분비할 수 있도록 하기 위하여 $\alpha$-amylase 유전자를 효모의 염색체에 삽입시키기 위한 integrating plasmid vector인 YIpMS$\Delta$R(LEU2)를 제작하였다. 이 vector의 효모형질전환에 있어 원형(circular)상태와 제한 효소 XbaI으로 처리된 직선화된(linearized) 상태의 두가지 형태를 비교한 결과 형질전환 효율에서나 형질전환체내의 $\alpha$-amylase 유전자 보유정도가 모두 직선화된 형태의 경우가 원형상태의 경우보다 높았다. Linearized vecotr를 가진 효모 형질전환체에서의 유전자 발현 안정도는 세포분열을 거듭할수록 episomal vecotr에 의한 효모 형질전환체에서의 발현 안정도보다 우수하게 나타났다. 또한 이 linearized vector를 가진 형질전환체는 $\alpha$-amylase와 glucoamylase를 동시에 분비하여 glucoamylase만 분비하는 원균주보다 2배 이상의 전분분해력을 보였다.
Distylium racemosum Sieb. Et Zucc contains some compounds inhibit -amylase activity in experimental conditions. The inhibitory test showed that 50% acetone extracts from the bark and leaves of the plant strongly inhibited salivary -amylase activity. Proanthocyanidin(PA) which has strong inhibitory activity was extracted from the leaves by chromatography on Sephadex LH-20. The inhibitory activities and the inhibition kinetics of the PA were studied against three kinds of enzymes: human salivary ${\alpha}-Amylase$ (SAA), pork pancreatin ${\alpha}-Amylase$ (PAA) and yeast ${\alpha}-Glucosidase$ (AG). Then the activities of PA against SAA, PAA and AG were compared with those of acarbose, a commercial agent. The inhibitory activities of PA were stronger than those of acarbose. Inhibition kinetics of the PA showed competitive inhibition for SAA and PAA, and non competitive inhibition for GA.
시중에서 시판되고 있는 발효비지로부터 총 58종의 균주를 분리하였으며, 그 중 starch 첨가 배지에서 투명환을 형성한 10종을 분리하였다. 이 10종의 균주를 정량적으로 amylase활성 측정을 하여 가장 큰 활성을 가진 2종의 균주를 재분리하여 공시 균주로 선정하였다 공시 균주를 동정한 결과 두 균주 모두 Bacillus sp로 동정되었으며, 각각 을 Bacillus sp. GM7330과 Bacillus sp. GM7312라고 명명하였다. 분리된 2종의 균주는 모두 5% 두부비지 용액에 glucose 3%와 yeast extract 0.15%를 첨가하여 초기 pH를 6.0으로 조정하여 30。C에서 72 hr 배양하였을 때 각각 488 units과 341 units_로 가장 큰 활성의 amylase를 생산하였다.
The effects of culture conditions on the production of amylase expressed by Bacillus subtilis LKS88 with a cloned gene from Streptomyces albus KSM-35 were investigated. The production of amylase was increased significantly by using sodium citrate and rice hull as a carbon source. In addition, the use of a mixture of sodium citrate and rice hull (1:1) resulted in increase of enzyme production by 20-fold when compared to that of soluble starch. The soybean meal as the nitrogen source could be partially replaced with yeast extract without changing the enzyme production yield. The amylase production was also increased by adjusting initial pH to 6.0 or by adding 0.01% SDS. Maximum amylase production was observed in the medium containing 1.5% sodium cirtate, 1.5% rice hull, 0.7% soybean meal, 0.3% yeast extract, 0.66% K2HPO4, 0.05% MgSO4$.$7H2O, 0.008% CaCl2$.$2H2O, 0.01% SDS with initial pH of 6.0. The maximum yield of amylase reached 56.6 U/ml when B. subtilits LKS88 (pASA 240) was cultured at 37$^{\circ}C$ for 36 hr.
Uehara Hiroyuki;Choi Du Bok;Park Enoch Y.;Okabe Mitsuyasu
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제5권1호
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pp.7-12
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2000
The expression of the mouse $\alpha-amylase$ gene in the methylotrophic yeast, P pastoris was investigated. The mouse $\alpha-amylase$ gene was inserted into the multi-cloning site of a Pichi a expression vector, pPIC9, yielding a new expression vector pME624. The plasmid pME624 was digested with SalI or BglII, and was introduced into P. pastoris strain GSl15 by the PEG1000 method. Fifty-three transformants were obtained by the transplacement of pME624 digested with SaiII or BglII into the HIS4locus $(38\;of\;Mut^+\;clone)$ or into the AOX1 locus $(15\;of\;Mut^s\;clone)$. Southern blot was carried out in 11 transformants, which showed that the mouse $\alpha-amylase$ gene was integrated into the Pichia chromosome. When the second screening was performed in shaker culture, transformant G2 showed the highest $\alpha-amylase$ activity, 290 units/ml after 3-day culture, among 53 transformants. When this expression level of the mouse $\alpha-amylase$ gene is compared with that in recombinant Saccharomyces cerevisiae harboring a plasmid encoding the same mouse $\alpha-amylase$ gene, the specific enzyme activity is eight fold higher than that of the recombinant S. cerevisiae.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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