• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제21권9호
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• pp.903-913
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• 2011

Vibrio parahaemolyticus, which causes gastroenteritis, wound infection, and septicemia, has two sets of type III secretion systems (TTSS), TTSS1 and TTSS2. A TTSS1-deficient vcrD1 mutant of V. parahaemolyticus showed an attenuated cytotoxicity against HEp-2 cells, and a significant reduction in mouse lethality, which were both restored by complementation with the intact vcrD1 gene. V. parahaemolyticus also triggered phosphorylation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) including p38 and ERK1/2 in HEp-2 cells. The ability to activate p38 and ERK1/2 was significantly affected in a TTSS1-deficient vcrD1 mutant. Experiments using MAPK inhibitors showed that p38 and ERK1/2 MAPKs are involved in V. parahaemolyticus-induced death of HEp-2 cells. In addition, caspase-3 and caspase-9 were processed into active forms in V. parahaemolyticus-exposed HEp-2 cells, but activation of caspases was not essential for V. parahaemolyticus-induced death of HEp-2 cells, as shown by both annexin V staining and lactate dehydrogenase release assays. We conclude that secreted protein(s) of TTSS1 play an important role in activation of p38 and ERK1/2 in HEp-2 cells that eventually leads to cell death via a caspase-independent mechanism.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제38권6호
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• pp.449-456
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• 2023

본 논문은 적은 농도로 존재하는 Vibrio parahaemolyticus를 6시간이내에 10⁶ CFU/mL까지 신속하게 배양가능한 배지인 Rapid Enrichment Broth for V. parahaemolyticus(REB-V)를 개발하여 V. parahaemolyticus를 신속하게 검출할 수 있도록 하였다. Modified Gompertz model과 RSM를 활용하여 V. parahaemolyticus를 신속하게 증균할 수 있도록 첨가 성분을 최적화하였다. 그 결과 2%(w/v) NaCl BPW에 D-(+)-mannose 0.3 g/L, L-valine 0.2 g/L, magnesium sulfate 0.2 g/L를 첨가하였을 때 V. parahaemolyticus의 증균량이 최대였다. REB-V의 배양조건을 pH 7.84와 37℃으로 최적화하였으며, 2%(w/v) NaCl BPW와 비교하여 REB-V의 증균 효율을 확인하기 위해 7시간 증균을 통해 증균량을 평가하였다. 또한 매시간마다 배양액에서 DNA를 추출하였고, 추출한 DNA로 real-time PCR을 수행하여 REB-V의 분자진단법 적용가능성을 확인하였다. 그 결과 7시간 동안 2%(w/v) NaCl BPW에서 V. parahaemolyticus는 5.452±0.151 Log CFU/mL까지 증균되었고, REB-V에서는 7.831±0.323 Log CFU/mL의 V. parahaemolyticus가 증균되었다. 최종적으로 REB-V에서 6시간 이내에 10⁶ CFU/mL 이상으로 증균된 것을 확인하였고, REB-V의 증균속도가 2%(w/v) NaCl BPW보다 빠르고 같은 시간 내의 증균량이 2%(w/v) NaCl BPW보다 많았음을 통해 REB-V의 증균효율이 우수한 것으로 확인되었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제31권1호
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• pp.21-27
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• 2016

본 연구에서는 V. parahaemolyticus를 신속정확하게 고감도로 검출하기 위해 단클론성 항체를 개발하고 이를 이용하여 일반적인 효소면역분석법(ELISA)과 효소면역분석법의 낮은 민감도를 보완할 수 있는 면역선택여과법(ISF)을 개발하여 민감도 및 효율성을 비교분석 하였다. 먼저 heat killed V. parahaemolyticus (HKVP)를 준비하여 7주령 BALB/c mouse에 면역한 후 세포융합 및 클로닝을 통해 HKVP 4H9-9번 및 16번 2종의 hybridoma cell을 확보하였다. Western blot을 통해 보다 특이성이 높은 것으로 확인된 HKVP 4H9-9번 항체를 대량 생산정제하여 분석법을 확립한 결과 검출한계가 ID-ELISA법은 $10^6cell/mL$, ISF 법은 $5{\times}10^1cell/mL$로 나타나 ISF법의 민감도가 매우 높은 것으로 확인되었다. 분석효율성은 ID-ELISA법의 경우 분석을 위해 9단계의 과정을 거쳐 총 16시간의 분석시간이 소요된 반면, ISF법의 경우 3단계의 과정을 거쳐 1시간 이내에 분석을 완료할 수 있는 것으로 확인되었다. 교차반응성의 경우 두 분석법 모두 일부 Vibrio spp. (IDELISA법: V. alginolyticus, ISF법: V. vulnificus)과 S. aureus에 반응성이 있는 것으로 확인되었지만 V. parahaemolyticus에 보다 강한 반응성을 나타내었기 때문에 V. parahaemolyticus에 특이적인 분석법인 것으로 확인되었다. 특히 ISF법은 ELISA법 보다 민감도가 높고 분석에 소요되는 시간도 짧아 V. parahaemolyticus를 신속하게 분석하는데 활용이 가능할 것으로 판단된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권1호
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• pp.118-124
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• 2013

Vibrio parahaemolyticus in uncooked seafood causes acute gastroenteritis. The microorganism has two sets of type III secretion systems and two hemolysins. When it injects its effector proteins into a host cell via type III secretion system 1, one of the type III secretion systems induces secretion of interleukin (IL)-8, a proinflammatory chemokine, through the phosphorylation of ERK 1/2 and p38 MAPK. Although probiotics have beneficial effects on hosts and can help control some infectious diseases, there is little research on the efficacy of probiotics in V. parahaemolyticus infection. Here we pretreated V. parahaemolyticus-infected human intestinal epithelial cells with heat-killed Lactobacillus brevis KB290, a probiotic isolated from fermented vegetables (traditional Japanese pickles) and utilized as an ingredient of beverages and supplementary foods, and demonstrated its efficacy in enhancing IL-8 secretion from V. parahaemolyticus-infected cells. Among the three heat-killed lactic acid bacterial strains we tested, L. brevis KB290 induced the highest level of IL-8 secretions in the infected cells. Relative to control cells (Caco-2 cells pretreated with PBS), V. parahaemolyticus-infected Caco-2 cells pretreated with heat-killed L. brevis KB290 secreted IL-8 earlier, although concentrations were similar 450min after infection. Heat-killed L. brevis KB290 pretreatment also induced earlier ERK 1/2 phosphorylation, greater p38 MAPK phosphorylation, and enhanced IL-8 mRNA expression. Heat-killed L. brevis KB290 accelerated IL-8 secretion, a host cell immune response, in V. parahaemolyticus-infected cells. We consider this to be beneficial because IL-8 plays an important defensive role against infection, and would contribute to the repair of injured epithelial cells.

• 한국식품영양과학회지
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• 제31권6호
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• pp.1163-1166
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• 2002

식중독 미생물 Salmonella typhimurium ATCC 14028, Staphylococcus aureus KCTC 2199, Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802에 대한 은 이온의 항균력을 PAper Disk 방법과 액체 배양법에서 조사하였다. S. typhimurium와 V. parahaemolyticus의 경우 각각 2,10ppm의 은 이온 농도에서 생육저해환이 발견되었으며 농도가 증가함에 따라 생육 저해의 정도가 증가하였다. 그러나 S.aureus는 20 ppm의 은 이온 농도에서도 생육 저해환이 관찰되지 않았다. 액체 배양에서 은 이온의 항균 능력은 S. typhimurium, V.parahaemolyticus, S.aureus에 대해서 각각 03 ppm, 0.5 ppm, 5 ppm 이상에서 관찰되었고, 은 이온의 농도가 증가함에 따라 생육 저해는 크게 나타났다.

• 약학회지
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• 제16권2호
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• pp.90-96
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• 1972

The author tried to isolate the Vibrio parahaemolyticus from Han River water and river fishes, to investigate the route of contamination by way of marine product and to make clear the survival ability in various kinds of food. The results are as follows: 1. Twenty eight strains of V. parahaemolyticus were identified among 312 samples in Han river from March to August. 2. V. parahaemolyticus was detected in the margenic content of Cyprinus and Anguilla. 3. 9 strains of K-3 type, 5 strains of K-11 type, 8 strains of K-8 type, 6 strains of K-32 type and 1 strain of K-52 type were clarified through K-antiserum reaction.

• 한국수산과학회지
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• 제55권6호
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• pp.844-849
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• 2022

The pathogenic Vibrio genus denotes halophilic bacteria that are distributed in aquatic environments, including both sea and freshwater. V. cholerae, V. vulnificus, and V. parahaemolyticus are the main species that can be potent human pathogens and the leading cause of septicemia, wound infections, and seafood borne gastroenteritis. The aim of this study was to investigate the presence of pathogenic Vibrios in seawater. We obtained a total of 80 seawater samples from the Geum River estuary area in the west coast of Korea from April to December 2021. Pathogenic Vibrios was determined using a combination of the most probable number-polymerase chain reaction (MPN-PCR) methods. The detection levels of V. cholerae, V. parahaemolyticus, and V. vulnificus in the seawater samples were 7.5%, 68.8%, and 30.0%, respectively. The quantitative results were as follows: 3.6-3.6 MPN/100 mL in V. cholerae, 3.6-3,400 MPN/100 mL in V. parahaemolyticus, and 3.6-4,300 MPN/100 mL in V. vulnificus. Overall, these results provide novel insight into the necessity for seawater sanitation in the Geum River estuary area, and could help reduce the risk of seafood-borne outbreaks caused by pathogenic Vibrios.

• 한국어병학회지
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• 제32권2호
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• pp.97-104
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• 2019

본 연구에서는 2017년 4월부터 12월 사이에 여수수산시장에서 구입한 수산물로부터 분리된 Vibrio parahaemolyticus와 Morganella morganii의 내성특성을 알아보고 장내세균인 Escherichia coli와 어류 병원균인 Edwardsiella tarda와의 내성전이 가능성을 알아보았다. Broth mating 법으로 실시한 conjugation에서 형성된 transconjugants를 분리하기 위하여 ampicillin(AMP) 50 ㎍/ml와 streptomycin (SM) 150 ㎍/ml 또는 oxytetracycline(OT) 30 ㎍/ml이 첨가된 TSA배지를 사용하였다. AMP, amoxicillin (AML), colistin(CT)에 낮은 감수성을 보였던 V. parahaemolyticus와 달리 M. morganii는 AMP, AML, CT, erythromycin, OT, tetracyclin등에 감수성이 낮았다. V. parahaemolyticus와 M. morganii를 E. coli와 conjugation을 실시한 결과 transconjugants인 E. coli는 분리되지 않은 반면 SM내성을 획득한 V. parahaemolyticus와 M. morganii가 분리되었다. 한편 V. parahaemolyticus와 E. tarda의 broth mating에서는 AMP와 AML 내성을 획득한 E. tarda transconjugant가 분리되었다. 그러나 V. parahaemolyticus의 β-lactamase 유전자인 VPA 0477의 전이는 확인되지 않았으며, E. tarda의 내성이 전달된 V. parahaemolyticus나 M. morganii는 검출되지 않았다. 이와 같은 결과는 생물 위해성 세균들 간의 내성전이가 양방향성이며 매우 다양한 패턴으로 진행되고 있음을 시사한다.

• 대한미생물학회지
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• 제21권3호
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• pp.345-353
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• 1986

Authors studies on the isolation of non-sucrose fermentation Vibrio species such as V. parahaemolyticus, V. vulnificus and V. damsela from sea water, shellfishes and various algae at Ulleung island in the east of Korea on summer in 1985. Authors carried out test for isolated strains to biochemical characteristics, halophilism, hemolysis and serological reaction. The results obtained were as follows: 1. Strains isolated from total specimens were 25 strains of V. parahaemolyticus, 2 strains of V. vulnificus and 1 strain of V. damsela, respectively. 2. Isolated frequency of Vibrio species from sea water and marine products was lower than on specimens in the southern sea of Korea from 1980 to 1985. 3. On hemolysis reaction on blood agar media using human and rabbit erythrocytes, 14 strains among 25 strains of V. parahaemolyticus isolated were positive, and V. vulnificus and V. damsela were positive, respectively. 4. The distributions of serotypes of V. parahaemolyticus isolated were from O1 group to O10 group, and from K 10 to K 69. The results of K serotypes were as follows ; serotype K 10 and K 33 were 2 strains, serotype K 59 and K 69 were 1 strain, respectively. And 2 strains of V. vulnificus isolated were not agglutinated by antiserum of V. vulnificus. Therefore, the probability is that 2 strains of V. vulnificus isolated were other serotypes distributed on sea weater and marine products of Ulleung island of Korea.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제38권4호
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• pp.246-254
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• 2023

장염비브리오균은 급성 설사와 같이 수인성·식품매개 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 제주지역 해수, 수족관수, 유통 수산물에서 분리한 장염비브리오균을 real-time PCR을 이용하여 잠재적인 독소 유전자 또는 종특이성 유전자(tdh, trh, tlh, toxR)를 조사하고, 이 균주의 유전적인 특성을 PFGE로 분석하였다. 총 245개 시료 중 해수에서 33주, 수족관수에서 7주, 수산물에서 50주로 90주(36.7%)의 장염비브리오균을 분리하였다. 모든 장염비브리오균에서 tdh 유전자는 검출되지 않았지만, tlh 유전자 또는 toxR 유전자는 검출되었다. 또한, 해수에서 3주와 수산물에서 1주 분리된 균주에서 trh 유전자가 검출되었다. 매달 해수를 정량검사한 결과 장염비브리오균은 수온과 양의 상관관계를 가지고 있었다. 90주의 장염비브리오균은 64.0-97.3% 범위에서 유사한 유전자 상동성을 보였다. 이중에서 13개 유형에서 유전자 상동성이 100%였다. 이러한 결과는 일부 독소 유전자를 가진 장염비브리오균이 분리되었고, 해수, 수족관물, 유통 수산물에서 분리된 장염비브리오균 사이에 유전적 유사성이 있기 때문에 식중독 역학조사에 도움이 되도록 지속적인 모니터링이 필요함을 나타낸다.