효소가 산업적 의미를 갖게 되는 시작은 1884년 네덜란드의 Christian Hansen이 송아지의 위에서 rennet를 추출하여 사용함에 따라서 시작되었고, 이후, 일본인 Takamine가 1894년 Koji 배양법에 의해서 곰팡이 Amylase를 상업화하면서 미생물을 이용한 효소생산이 성공되어서 대량생산이 가능하게 되었다. 이후, 20세기에 들면서 독일의 Otto Rohm에 의해서 피혁가공 및 세제에의효소이용, 1911년 미국의 Leo Waltersten이 효소를 이용한 Chill-proofing beer의 개발 등으로 효소의 이용용도가 식품에서 환경공업으로 확대되었고 효소의 산업적 수요가 확대됨에 따라서 이에 따른 막대한 연구투자가 이루어져 비로소 효소산업이 태동하게 되었다.
호르몬과 효소와의 관계를 포함하는 사항은 다음과 같이 고려할 수 있다. 즉, 1. 효소생성에 미치는 호르몬의 작용, 2. 효소활성에 미치는 호르몬의 작용, 3. 효소활성에 관여하는 제인자(조효소, activator, inhibitor)에 대한 호르몬의 작용, 4. 효소에 의한 호르몬의 합성, 5. 효소에 의한 호르몬의 분해등이다. 최근 50년간의 이 분야의 발전상은 실로 괄목할 만하며 또 그에 관한 보문도 매거할 수 없을 정도이다. 본고에 주어진 본제에 대하여는 최근에 거론되어 있는 호르몬의 표적세포의 receptor에 대하여, 호르몬의 제2의 messenger로서의 cyclic AMP및 그의 유사체인 DBC-AMP 그리고 호르몬에 의한 효소유도에 대하여 소개하고자 한다.
리그노셀룰로오스 바이오매스를 원료로 하여 발효당을 생산하고자 할 때 최종적인 당수율은 적용하는 전처리 기술의 종류와 전처리 조건에 따라 크게 달라질 수 있다는 사실은 널리 알려져 있다. 또한 전처리물의 효소당화에서 셀룰로오스의 당전환율은 효소의 종류와 사용량에 의존적이므로 부족한 전처리 효과를 일부 보완하기도 한다. 본 연구에서는 바이오매스의 효소당화에 흔히 사용되고 있는 특정효소와 최근 공급되기 시작한 새로운 효소를 시료로 하여 해바라기 줄기의 열수전처리에 이은 효소당화에서 효소의 종류가 최종 당수율, 효소당화 시간 및 전처리효과에 미치는 영향을 측정하였다. 해바라기 줄기 분말을 $180^{\circ}C$에서 30분 동안 열수전처리하였을 때 헤미셀룰로오스의 수율이 최대가 되었으나 이 조건에서는 후속 효소당화에 의한 포도당 수율이 높지 않았다. Celluclast 1.5L 혹은 Celluclast conc BG는 전처리 물의 당화속도가 상대적으로 빠른 편이었고, 이 효소에 의한 당수율은 해바라기 줄기 셀룰로오스 함량의 80% 내외였으며, 바이오매스 1g당 효소첨가량이 3ml까지 증가함에 따라 당수율도 꾸준히 증가하는 경향을 보였다. 반면에 노보자임 스코리아로부터 분양받은 효소로서 NS22074와 NS50010의 혼합물은 Celluclast보다 약 10% 더 높은 당수율을 보여주었으나 당화는 상대적으로 느리게 진행되어 72시간 이상이 소요되었다. Endoxylanase 혹은 hemicellulase 등 다른 효소를 NS22074와 NS50010의 혼합물에 가하여도 당수율의 증대 효과는 미미하거나 거의 없었다. 시험에 사용한 효소제제에는 포도당, 소르비톨 등 여러 가지 당들이 보존제 혹은 안정화제로 함유되어 있는 것으로 나타나서 사용에 주의할 필요가 이었다.
본고에서는 작금의 효소시장에 대하여 나름대로 논하고자하나 실제적으로 정확한 통계자원의 빈곤과 지엽적 또는 피상적인 자료들에 의거해야하는 어려움아래 그 내용의 한계가 있음을 예고해야 겠다. 부실한 점을 조금이나마 메꾸고자 주로 산업용효소에 대하여 서술하고 다른 중요한 분야인 의약용이나 시약용효소에 있어서는 언급을 회피하고자 한다. 곡자형태의 효소및 기타 소량 생산되는 효소들에 대해서도 논술치않기로 하겠다.
생물화학에서 취급되고 있는 대부분의 효소는 metabolic map에 나타난 대사의 각각의 단계를 촉매하는 효소로써 생물학적 혹은 생리학적인 의의가 해명되어 있다. 그러나 현재로서는 metabolic map과는 관계없는 효소로 취급되는 것도, 생물이 생명유지를 위해서는 필수적인 어떤 화학반응을 촉매하고 있는 것으로 생각되고 있다. 생체내에 존재하는 무수한 효소 중에서 개개의 특이적인 효소의 성질을 해명하기 위해서는 촉매성의 기반이 되고 있는 효소단백질의 구조라든가 성질을 검토하지 않으면 안 된다. 그렇게 하기 위해서는 될 수 있는 한 목적효소를 생체내에 존재할 때와 같은 상태로 순수하게 정제할 필요가 있다. 일반적으로 효소류는 생체내에 존재할 때는 상당히 안정하게 유지되지만, 일단 세포 외에 추출되면 생체 내에서의 생리적 조건으로부터 벗어나기 때문에 서서히 실활되는 경우가 많다. 따라서 효소의 취급에는 안정성을 고려한 세심한 주의가 필요하다.
Cyclomaltodextrinase(CDase, EC 3.2.1.54), maltogenic amylase(EC 3.2.1.133). neopullulanase(EC 3.2.1.135)는 cyclomaltodextrin(CD), pullulan 및 전분을 가수분해하는 효소들이다. 이 효소들은 $\alpha$-1,4-Ο-glycosidic 결합에 작용하여 CD와 전분을 말토오스로 pullulan을 panose로 가수분해할 뿐만 아니라 올리고당들을 다양한 당 수용체 분자들의 C-3, C-4. C-6 수산기로 전이시키는 활성도 갖고 있다. 이러한 특성들은 기존의 $\alpha$-amylase를 비롯한 판수화물 분해효소들과 뚜렷이 구별되는 것으로 전분 분해효소들의 분류체계에 새로운 기준점을 제시한다고 하겠다. 본 총설에서는 CDase, maltogenic amylase, neopullulanase처럼 pullulan이나 전분보다 CD를 훨씬 더 잘 분해하는 효소들과 Thermoactinomyces vulgaris amylase II(TVA II)처럼 CD를 분해하기는 하나 pullulan을 더 잘 분해하는 효소들의 생화학적, 효소적, 구조적 특성들을 종합하여 소개하고자 하였다. 이 효소들은 40~60% 정도로 아미노산 서열이 동일하고, 세포 내에 존재하며, 분자량이 62~90 kDa로 $\alpha$-amylase보다 다소 크다. 아미노산 서열 비교분석 및 maltogenic amylase와 TVA II 등의 3차구조 분석 결과, 이 효소들은 아미노 말단에 보통 $\alpha$-amylase에는 존재하지 않는 약 130개 아미노산으로된 영역을 갖고 있어 이를 매개로 이합체를 형성할 수 있는 것으로 나타났다. 이합체-단위체 평형은 염 농도, 효소 농도, 산도 등에 의해 조절되고 단위체와 이합체 모두 효소환성을 갖고 있으나, 기질 특이성이 다르며 단위체는 전분을, 이합체는 CD를 선호하는데 이는 이합체 형성 시 활성부위의 구조적 변화에 따른 것으로 분석되었다. 본 총설에서는 CD 분해효소들의 다양한 기질 특이성을 올리고머 형성 등의 구조적 특성과 관련하여 논함으로써 관련 효소들의 분류체계를 보다 명확히 할 수 있는 자료를 제공하고자 하였으며, 이러한 효소들의 생리적 기능 및 산업적 이용에 대해 제안하고자 하였다.
키토산 올리고당을 효율적으로 생산하기 위하여 고정화 효소 를 이용한 키토산의 효소적 가수분해를 시도하였다. Chitosanase는 Chitopearl계 고정화 담체에 대해서 높은 흡착율로 결합되었다. 키틴에 고정화된 효소는 비록 흡착율은 낮았지 만 그 활성은 가장 높게 나타났다. 키틴 고정화 효소는 유리 효소에 비해 약 90% 이상의 활성을 유지하였다. 고정화 효소의 최적 온도는 60°C로서 유리 효소보다 $15^{\circ}C$ 더 높았으며, 열에 대한 안정성도 유리 효소보다 넓은 온도범위에서 우수하였다 그러나 고정화 효소는 pH에 대해서는 어떠한 뚜렷한 효과도 보이지 않았다. 고정화 효소의 저장 안정성은 유리 효소보다 더 높은 저장온도인 60t에서도 더 안정한 것으로 나타났다. 키틴 고정화 효소에 의한 키토산의 가수분해반응은 반응 3시간까지 급격한 증가를 보이다 그 이후의 반응시간 경과에서도 더 이상 증가를 보이지 않았다. 고정화 효소에 의해 생성된 올리고당의 조성은 효소의 반응시간에 따라 크게 의존하였으며, 2시간의 반 응에서 비교적 고차 올라고당인 COS-4-6의 함량은 약 90% 이상이었다 두 효소에 대한 반용속도상수에서, 고정화 효소는 유리 효소에 비해 낮은 기질친화성과 낮은 반웅속도를 보였지 만, 높은 기질농도에서도 전혀 기질저해반응은 일어나지 않았다. 따라서 키틴 고정화 효소는 유리 효소에 비해 활성의 감소없이 효율적으로 키토산을 가수분해할 수 있었으며, 고차 올리고당의 생성 량도 매우 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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