Inulinase의 효율적인 재사용을 위하여 vinylsulfone activated agarose에 endo- 및 exoinulinase를 고정화시켰다. Gram gel당 exoinulinase는 400U, endoinulinase는 80U까지 고정화시킬 수가 있었고 열안정성은 exoinulinase 에서 증가되었다. 두 고정화 효소의 혼합비율에 따른 synergistic effect는 endo/exo가 0.5-0.1일 대 가장 컸으며, synergistic effect는 혼합되지 않은 상태의 고정화 효소에 비해 그 활성이 약 1.7배 증가하였다. 두 고정화 효소의 최적 pH는 4.4-5.0 범위이었으며 operational stability는 batch reactor에서 20번 반복된 실험결과 어떠한 효소활성의 감소도 보이지 않았다.
부분 정제한 Pseudomonas spp. Endo-inulinase와 Bacillus spp. Exo-inulinase를 13:1의 비율로 혼합 사용하여 inulin을 가수분해한 결과, 단독으로 사용했을 때에 비해 약 1.6배의 현저한 가수분해율의 상승효과를 얻었다. 혼합효소는 반응온도 $55^{\circ}C$, 반응액의 pH 6.0 및 각 0.5mM 농도와 $Mn^{2+}$와 $CO^{2+}$이 존재하는 반응조건하에서 가장 높은 가수분해율을 보였으며 이때 최종 가수분해 산물인 fructose의 생산량은 84를 나타내었다.
Lactobacillus helveticus YM-1 과 Streptococcus thermophilus CH-1을 환원탈지유 배지에 접종하여 생육특성 및 배양조건을 검토한 결과 두 균은 전형적인 공생을 나타냈으며 혼합배양시 최적 pH와 온도는 각각 6.5와 4$0^{\circ}C$였다. 또한 두 균 사이에는 단백질 분해력의 차이가 현저하였고 L.helveticus의 배양여액에는 S. thermophilus의 생육을 촉진시키는 물질이 함유되어 있음을 관찰하였다.
일반 상법으로 제조되는 코오지, 즉 밀 또는 대두에 A. oryzae만으로 제조하는 코오지에 Cordyceps sp.를 첨가하여 코오지의 품질에 미치는 영향을 조사하였다. A. oryzae만으로 제조하는 코오지에 Cordyceps sp.를 일정량 혼합 첨가하여 제국하여 생균수 및 포자수를 측정한 결과 48시간까지 급격히 증가했다. 이후 생균수 및 곰팡이의 포자수의 유의할만한 변화를 볼 수 없어 제국시간을 48시간 전후로 조정하는 것이 바람직한 것으로 나타났다. 또한 amylase 및 protease등의 효소역가를 측정한 결과 Cordyceps sp.를 첨가한 코오지가 Cordyceps sp.를 첨가하지 않은 코오지보다 효소역가가 높은 것으로 나타났다. 제국이 끝난 코오지에 대하여 맛, 향 및 색깔에 대하여 관능검사를 실시한 결과 A. oryzae와 Cordyceps sp.를 각각 0.5%(w/w)를 혼합 참가한 것이 더 좋게 나타났다.
Xylose 발효효모를 토양에서 분리하였으며 (X-6-41) 이는 Lodder씨 분류기준에 따라 Candida 속으로 동정되었다. 삼각플라스크 정치배양법에 의한 xylose 발효시 2% xylose, N원 asparagine, pH 4에서 발효율 약 80%로 나타났고 Mini-Jar for mentor를 이용하여 glucose와 xylose를 1 : 1로 혼합한 총당 5% 기질에서 발효를 시켜 본 바 발효율은 총당에 대해 약 72.3%(alcohol 2.3%(v/v)였다. 본 균주에 의한 xylose 발효는 일반적으로 보고된 바와 같이 호기적 발효과정이였으며 glucose와 xylose 혼합기질의 경우 glucose가 먼저 이용되고 xylose가 나중에 이용되는 것으로 나타났다. 5% xylose를 기질로 하여 Mini-Jar fermentor에서 발효시켰을 때 최대 발효율 69%(alcohol 2.2%(v/v)로 나타났으며 발효중에 xylitol이 생성되었다.
Activated sluge를 폐수처리와 사료로 이용하기 위하여 고구마와 소맥 전분폐수에서 채집한 32종의 균원을 선별한 결과 2종의 우수한 균원을 확인하고 N-9균원으로부터 7종의 세균J-3으로부터 6종의 세균을 분리하여 최종 선별 결과 3종의 세균 J-3-1, J-3-2, J-9-2를 선별하였다. 1. N-9의 혼합 배양의 경우 J-3보다는 floc형성능이 좋았으며 N-9로부터 Eugelena속의 원생동물 1종이 J-3에서는 Bodo 속의 원생동물 1종이 동정되었다. 2. 3종의 선별된 균에 대한 형태학적 생리학적 특성을 검사했다. 3. Sample N-9의 혼합균 배양에 의해 99%의 폐수의 B.O.D가 제거되었으며 세균 단독 배양일 경우 92% 이상의 B.O.D.가 제거되었다. 4. 원료소맥 전분폐수의 B.O.D가 8,000 ppm이하에서도 B.B.D. 제거율과 sludge에서 생산된 protein 량은 폐수의 B.O.D. 와 처리하는 균에 따라 상이하였다.
B.longum TK-100 및 L.acidophilus TK-2070으로 혼합배양한 culture로 제조한 요쿠르트는 냉장상태에서도 산생성이 되었느데 이는 B.longum TK-100에 의한 것보다는 대수기의 L.acidophilus TK-2070에 의하여 거의 생성되었다. B.longum TK-100은 편성 혐기조건 뿐만아니라 통성혐기조건에서도 생육이 좋은 것으로 나타냈다. 또한, B.longum과 L.acidophilus는 냉장보존 중인 요쿠르트 내에서도 생존도가 양호하므로 발효유의 제조, 개발에 혼합 starter로서의 이용이 가능하다고 하겠다. 한편 aniline bule 0.1가 함유된 RCAM plate상에 나타난 B.longum TK-100의 colony는 직경이 약 2mm의 광택있는 회배색의 중심에 청색을 나타내었고, L.acidophilus TK-2070의 coiny는 직경이 약 1mm 의 회배색을 나타내어 쉽게 분별할 수 있다.
유류 및 중금속 오염 토양으로부터 분리한 토착 미생물인 Bacillus sp, B1 사균(dead biomass)과 polysulfone + DMF(N,N-dimethylformamide) 용액을 혼합하여 제조한 비드(지름 2mm 이하)형 미생물 담체를 이용하여 중급속 오염 지하수를 정화하는 배치실험을 실시하였으며, 담체에 흡착된 중금속의 특성과 구조를 분석하여 미생물 담체에 의한 중금속 제거 기작을 규명하였다. 담체 내 Bacillus sp. B1 사균 비율을 달리하여 제조한 담체들을 이용하여 오염수로부터 납 제거효율을 규명함으로써 미생물 담체 제조에 사용되는 최적의 사균 농도(%)를 결정하였으며, 오염수에 대하여 첨가하는 미생물 담체의 농도변화에 따른 중금속 제거효율을 규명하는 실험을 실시하여 최적의 중금속 제거효율을 가지는 오염수 내 담체 첨가량(농도; g/L)을 결정하였다. 담체 내 사균 농도가 0%(유기중합체로만 형성)와 1%인 경우 제조된 담체의 납 제거효율이 3% 미만으로 polysulfone + DMF 만으로 이루어진 담체는 중금속 제거효과가 거의 없으며, 담체 내 미생물 기질 부분에 의해 대부분의 중금속이 제거되는 것으로 나타났다. 실험 결과 미생물 담체 비용과 제거효율을 고려하면 사균 5%를 혼합하여 제조한 미생물 담체를 2g/50mL 농도로 오염수에 주입하는 것이 가장 효과적인 것으로 밝혀졌다. 담체와 오염수의 반응(흡착)시간에 따른 납과 구리의 제거 반응 실험 결과 두 시간 이내에 평형상태에 도달하여, 현장에서 다량의 중금속 오염 지하수를 짧은 시간(수 시간 이내)에 처리할 수 있을 것으로 판단되었다. 미생물 담체의 중금속 제거효율은 넓은 pH 범위에서 높게 나타났으며, 특히 pH 2-3인 경우 제거효율이 최대로 나타나 pH가 낮은 침출수, 산성폐수의 중금속 처리에도 효과가 있는 것으로 밝혀졌다. 오염수의 중금속(Pb, Cu, Cd) 초기 농도변화에 따른 미생물 담체의 제거율 실험 결과 납, 구리, 카드뮴의 경우 10mg/L 이하의 농도를 가지는 오염수에서 80% 이상의 제거 효율을 나타내어, 대부분의 국내 오염 지하수의 중금속 농도가 이보다 낮은 것을 감안할 때 본 실험에서 사용된 조건을 적용하여 미생물 담체를 이용하는 경우 다량의 중금속 오염 지하수를 효과적으로 제거할 수 있을 것으로 판단되었다. 미생물 담체를 이용한 납 제거 배치 실험 전/후 미생물 담체(bead)의 내/외부 구조를 SEM/EDS 및 TEM으로 분석한 결과 담체 내/외부 모두 다양한 크기의 다공질로 형성되어 있었으며, 외부 표면뿐 아니라 내부 면까지 납이 다량 흡착되어있는 것으로 나타나 본 실험에서 제조한 미생물 담체가 외부 표면 흡착에만 제한되었던 기존의 polysulfone 담체보다 중금속 제거 능력이 뛰어난 것으로 밝혀졌다. 미생물 담체에 형성된 납의 구조를 분석한 결과 담체의 주된 중금속 제거기작은 담체 내/외부 표면(특히 사균 기질과 polysulfone 물질 경계부)에 의한 다양한 형태의 흡착이었다.
본시험은 비육돈사료에 미생물제제를 사료에 미생물제제 A 및 B 0.1 미생물제제 C를 0.2% 혼합 급여할 경우 사료섭취량 및 돈분의 오염물질 배설농도에 미치는 영향을 분석하기 위하여 4처리$\times$반복당 5두로서 총 20두를 공시하여 실시하였는데 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 비육돈의 일일 평균사료섭취량은 대조구 3.15 kg/일.두였고 미생물A, B, C구는 각각 3.14kg/일/두, 3.31, 3.42로 미생물제제 C구에서 일일 사료섭취량이 가장 높게 조사되었으며(p<0.05), 2. 일일평균 음수량은 사료섭취량이 높았던 미생물 C구에서 3.95kg/일/두로 가장 높게 조사되었다(p<0.05). 3. 미생물제제 처리구별로 분뇨배설량은 사료섭취량이 높았던 미생물제제 C구에서 가장 많이 배설되는 것으로 조사되었으며(p<0.05), 돈뇨의 배설량도 미생물제제 C구에서 2.23kg/일/두에서 높았다(p<0.05). 4. 돈분뇨의 수분 함량은 및 비료성분인 T-N, $P_{2}O_{5}$, $K_{2}O$ 성분도 처리 간에 큰 차이를 보이지 않았다(p<0.05). 5. 돈분뇨의 평균 BOD 농도는 돈분의 경우 미생물제제 B, C제제 급여구가 유의적으로 높게 조사되었다(p<0.05). 그리고 돈뇨의 BOD의 경우에는 대조구에서 $8,657.5mg/{\ell}$로 가장 높은 것으로 조사되었다(p<0.05). 6. COD 농도는 대조구에서 가장 높게 조사되었으며(p<0.05). 돈뇨의 경우에는 미생물제제 A급여구에서 평균 $9,545mg/{\ell}$로 가장 높았다(p<0.05). 7. SS 농도는 미생물제제 B급여구에서 가장 높게 조사되었으며(p<0.05), 돈분뇨중의 T-N 농도는 처리구간에 유의적인 차이가 나타나지 않았다(p<0.05). 그리고 T-P 농도의 경우에는 미생물제제 C급여구에서 유의적인 차이가 나는 것으로 조사되었다(p<0.05). 이상의 결과를 요약해보면 비육돈에 미생물제제 혼합급여시 사료섭취량과 음수량을 증가시키는데 효과가 있는 것으로 조사되었으나, 비료성분 배설량에는 큰 차이를 보이지 않는 것으로 조사되었으나, BOD 등 오염물질농도의 경우에는 미생물제제 A급여구에서 가장 낮게 조사되어 비육돈사료에 미생물제제 급여시 오염물질 저감효과가 있는 것으로 조사되었다.
혼합유박은 황화물, 암모니아 그리고 아민이 발생하는 것으로 알려져 있다. 악취 저감 미생물을 선별하기 위해 물과 혼합유박이 포함된 바이얼을 농화 배양하였다. 황화물 저감 미생물의 분리를 위해 황화수소 및 메틸메르캅탄 저감 활성실험을 수행하였다. 대조군에는 100 ml 바이알에 혼합유박(0.25 g)과 증류수(10 ml)를 넣어 악취를 발생시켰으며 실험군에는 대조군 바이알과 같은 상태에서 분리균주를 접종하였다. 분리균주 중에서 황화합물의 저감효율이 가장 높은 균주를 일반적인 동정 방법인 16S rRNA sequence 분석으로 동정 결과 Brevundimonas diminuta로 동정되었으며 KCTC에 기탁하여 기탁번호 KCTC11724BP를 부여받았다. B. diminuta는 황화수소 표준가스를 200 ppmv까지 24시간내에 모두 제거하였다. 또한, 황화수소와 메틸머캅탄의 최대 제거 효율은 바이알 실험에서 453 ppmv과 98 ppmv에서 각각 100% 효율을 나타냈다. 또한 돈분을 이용한 악취발생반응기에서는 접종량 20% (v/weight of swine manure)일 때 황화물 95% 이상 제거 효율을 나타냈다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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