A comparative study of leaf anatomy in tribe Sorbarieae (Adenostoma, Chamaebatiaria, Sorbaria, Spiraeanthus) including one related genus Lyonothamnus was carried out using light microscopy. Anatomical characteristics of the leaf blade and midrib were described and taxonomically evaluated. The anatomical characters which described in this study are as follows: thickness of leaf midrib, blade in cross section, cuticle, epidermal cell, stoma, trichome, mesophyll, crystal, main vasculature type. All features were compared and the vascular patterns of midrib were distinguished two types. - Type 1: Trace tripartite (Adenostoma), Type 2: Trace continuous, subtype 2A: flat arc (Chamaebatiaria, Spiraeanthus), subtype 2B: U-shape arc (Lyonothamnus, Sorbaria). In conclusion, some of leaf anatomical characters (e.g., cuticle, epidermal cell, trichome, mesophyll, main vasculature type) can be useful for diagnostic features. Hypostomatic type, dorsiventral mesophyll, Ushape vasculature type would constitute a major characters for genus Sorbaria in Sorbarieae. The detailed anatomical description of studied taxa is provided, and its systematic importance is also briefly discussed.
This study was carried out to establish the in vitro short-term culture system of developing male germ cells by purifing germ cells of various stages. The decapulated testicular cells were incubated with collagenase (lmg/ml) and try psin (2.5mg/ml) in HBSS. After separating male germ cell, the separated germ cells were stained with heamatoxylin/eosin and determined developing stages under light microscopy. The purity of pachtene spermatocytes a and round spermatid were 85%, respectively. Yield of total male germ cells was highly variable between individuals, with a mean value of 3.5 to 4.5 ${\times}$ 10$^7$ cells/testis. Viability of the cell was over 97% after separation. In DMEM medium, the optimal cell number for culture is approximately 1 x 10$^5$ cells/dish, but low cell den-sities than 1 ${\times}$ 10$^5$ cell/dish showed a decreased cell viability. Furthermore, about :36.8% of pac-hytene cells was successfully cultured for 6 days and some of cells were developed to secondary spermatids and round spermatids. Therefore, our data suggested that this culture conditions will be utilize as a feasible tools to produce tran-sgenic livestock using techniques such as intrac-ytoplasmic injection and cell fusion.
Roh, Young-Bok;Chung, Kyung-A;Chung, Ji-Sook;Kim, Jung-Sam;Kim, Il
The Korean Journal of Zoology
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v.38
no.3
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pp.388-394
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1995
We investigated ultrastuctural change of small intestinal mucosal epithelial cell, columnar cell and mucous cell, of hibernating ground squirrel during activating and hibernating stages. In active columnar cells, many mitochondria and rough endoplasmic reticulum were observed. In hibernating columnar cells, more free nhosome than rough endoplasmic reticulum were observed. In active mucous cells, large and many mucosal granules, mitochondria and rough endoplasmic reticulum were observed. Mucosal granules have been secreted excellently. In hibernating mucous cells, small and little mucosal granules and many free ribosome were observed.
The seeds of 16 species from sect. Anthacantha and related taxa were examined using light and scanning electron microscopy to illucidate the boundary of the section and their relationship among species. Using six qualitative characters clustering analyses were conducted, and three types were recognized. Type I including species from sect. Anthacantha+sect. Meleuphorbia is characterized by the ovate shape, rounded at base and smooth along the ventral line. Type II including species from sect. Medusae+sect. Treisia-1 is squared in shape and are tuberculate. Tubercles are prominent along the ventral line. Type III (sect. Treisia-2 group) is mostly rounded, and as in type II, tubercles are prominent along the ventral line, but the unique crestae consisting of the grouping testa cells differed from the surface patterns of Types I and II. Based on the seed morphology, sects. Anthacantha and Meleuphorbia are closely related, which is well supported by the results from molecular and pollen morphological studies. Besides, sects. Treisia and Medusae are not closely related in terms of seed characters, and this is not consistent with the results of recent molecular studies.
Cytological characteristics of Abeliophyllum distichum (Oleaceae), endemic to Korea, was examined. Somatic chromosome numbers was 2n = 28 which corresponds to diploid based on x=14. Chromosome length was varied continuously from $1.00{\mu}m$ to $2.03{\mu}m$. Karyotype of Abeliophyllum distichum was investigated in this study for the first time. The cytological characteristics including basic chromosome number, continuous variation of chromosome length, diploid and karyotype were similar to those of the genus Forsythia, which indicated the close relationship between Abeliophyllum and Forsythia, and consequently the two genera seemed to be included to same tribe.
Anatomical features of both leaves and stems of the four mistletoes in Korea (Viscum album var. coloratum, Korthalsella japonica, Loranthus yadoriki, L. tanaka) and of their secondary haustorial structure within several host plants were investigated. Among the four mistletoes, there were diagnostic characters of the anatomy of leaves and stems which enabled us to distinguish the four taxa. Leaves were observed to have three distinct characters including unifacial or bifacial leaves, the number of vascular bundles in the midveins, and the level of development of sclerenchyma cells. There were four diagnostic characters of stems: overall morphology of stems in transverse view, degree of cuticle development, arrangement of vascular bundles, and features of the sclerenchyma and pith. In order to determine secondary haustorial traits, the research focused on the seven host plants of L. yadoriki and on the five host plants of K. japonica. The following features were found to be important: presence or absence of an aerial runner root, the shape of the haustorial strand and flange, the degree of penetration into host tissues, and their development of shaft in transverse view, the development both of secondary haustorial cells and short tracheid in hyphae. Korthalsella japonica and L. yadorki were clearly distinguished by these characters. The secondary haustorial forms in each host were somewhat different, due to varying degrees of development in the strength of the host plants' wood. However, qualitative characters like the final position of the secondary haustorial penetration into host tissues and the development of short tracheid cells were not only affected by the degree of development of the host plants, but also useful for the systematic study.
Kim, Hyun-Jin;Lee, Jae-Hyung;Kim, Yeon-Hee;Nam, Soo-Wan
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.36
no.4
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pp.307-313
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2008
The yeast surface expression system, pCTXYN (6.8 kb), of Bacillus endoxylanase gene (xynB, 642 bp) was constructed and introduced into Saccharomyces cerevisiae EBY100 cell. The transformed yeast cell showing the highest endoxylanase activity was selected through the active staining of colonies grown on YPDG medium containing xylan. With the yeast transformant, EBY100/pCTXYN, grown on galactose containing medium, it was found that the endoxylanase was successfully displayed on the yeast cell surface and the xylooligosaccharides were efficiently produced from xylan. The most of endoxylanase activity was detected in the cell fraction and reached about 1.9 unit/mL after 48 h cultivation. The optimized conditions for xylooligosaccharides production from xylan were determined as follows: substrate and its concentration, oat spelt xylan 6%; concentration of yeast whole-cell, 5 unit/mL; temperature, $50^{\circ}C$, and reaction time $2{\sim}4\;h$. When the oat spelts xylan and corncob xylan were hydrolyzed by treatment with cell surface-displayed endoxylanase, xylotriose was formed as a main product.
본 연구에서는 vesicular stomatitis virus G glycoprotein (VSV-G)를 envelope로 가지는 pantropic retrovirus vector system을 이용하여 재조합 human FSH 유전자가 전이된 형질전환 닭을 생산하고자 하였다. Human FSH $\alpha$ 및 $\beta$ 유전자와 CTP linker는 human pituitary gland cDNA library에서 RT-PCR 방법을 이용하여 cloning하였으며, 각각의 fragment는 FSH$\beta$-CTP-FSH$\alpha$ 순서의 단일사슬로 연결하였다. 연결된 FSH$\beta$-CTP-FSH$\alpha$는 retroviral vector 내의 $\beta$-actin promoter의 조절 하에 도입한 후, PT67 packaging cell line에 transfection하여 virus를 생산하였으며 생산된 virus는 pantropic한 virus producing cell인 GP293에 infection하여 FSH 유전자가 도입된 virus를 생산하였다. FSH 유전자의 발현을 in vitro에서 확인하기 위하여 CHO (chinese hamster ovary) 세포에 virus를 감염시킨 후, 세포의 배양액을 취하여 electrochemilumine-scence immunoassay 방법으로 정량하였다. In vitro에서 전이 후 발현이 확인된 FSH 외래유전자의 retroviral vector virus를 초원심분리로 고농축하여 stageX의 계란의 배반엽 층에 주입하였으며, 그 결과 18%의 부화율과 91%의 부화한 닭의 유전자 전이율을 확인할 수 있었다. 전이된 유전자의 확인은 FSH$\beta$와 Neo 유전자에 대한 primer를 이용한 RT-PCR의 방법을 이용하였다. In vitro에서와는 달리 in vivo에서는 FSH 유전자의 전이는 확인되었으나 발현을 확인하지는 못하였는데, 이는 적은 수의 실험군이 형질전환율에 비해 상대적이지 못하였거나, 외래 유전자인 FSH의 발현에 의한 생리적인 부작용이 유발되어 해당개체가 부화되지 못한 것으로 추정된다. 본 문제점을 해결하기 위하여 실험군의 수를 늘리고 외래 유전자에 대한 controllable expression system이 보완될 필요성이 요구되며, 이러한 점이 해결된다면 높은 유전자 전이율에 기인하여 retrovirus를 이용한 형질전환 방법은 형질전환 가금의 생산에 있어서 매우 효율적이고 주목할 만한 방법으로 사료된다.
형질전환체 제작 시 발현벡터가 삽입되는 위치에 따라 발현 또는 억제되는 현상인 ‘position effect(위치효과)’를 극복하기 위해 Matrix Attachment Region(MAR)을 포함하는 발현벡터를 제작하였다 MAR는 핵 기질(nuclear matrix) 부착 부위로 발현조절에 관여하는 전사인자 등이 존재하는 핵 기질 부착부위로, 삽입된 발현벡터가 전사활성을 할 수 있는 게놈 환경을 제공해 주어 형질전환 유전자 발현을 향상시켜 준다고 보고되고 있다. 본 연구에서는 사람에서 이미 분리되어 염기서열이 밝혀진 MAR를 PCR로 증폭하였다. 증폭된 1,270 bp의 human alpha-1-antitrypsin MAR와 1,080 bp human corticosteroid binding globulin promoter MAR를 T vector에 클로닝하여 염기서열을 확인했으며 발현벡터 클로닝에 사용하였다. 유용 유전자와 세포 형질전환에 사용할 선별 유전자로 neo를 포함하며, 그 외 벡터골격은 pGL3 control vector를 사용하여 기본 발현벡터를 제작하였다. 이 벡터에 MAR를 5', 3' 양쪽 또는 한쪽만 포함하도록 클로닝하였다. 이는 MAR의 위치에 따른 게놈내 삽입 및 발현효과를 확인하여 형질전환동물 생산용 발현벡터로 활용하고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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