• Proceedings of the Korean Society of Veterinary Pathology Conference
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• 2001.09a
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• pp.13-15
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• 2001

발암성시험연구에 사용되고 있는 형질전환 동물들은 랫드와 마우스 등이 있는데, 그 중 c-Ha-ras proto-oncogene 마우스 (ras H2 mice), v-Ha-ras 형질전환 마우스 (Tg.AC mice), pim-1 형질전환 마우스 및 p53 knockout 마우스 등이 발암유발물질에 감수성이 높아 현재 중기발암성시험에 이용되고 있다. (중략)

• Journal of Embryo Transfer
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• v.30 no.3
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• pp.207-211
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• 2015

Many pronuclear stage eggs were used to generate transgenic mice (Tg) by microinjection. In this study, we used in vitro fertilized mouse eggs, followed by ultrarapid freezing to establish a simple procedure for production of Tg mice. We produced in vitro fertilized mouse eggs and cryopreserved them by ultrarapid freezing method. A total of 139 cryopreserved-thawed pronuclear eggs, of which 101 (72.6%) were survived following microinjection of chicken ${\beta}-actin$ promoter-driven firefly improved luciferase cDNA (${\beta}-act/luc^+$) and were transferred into 5 recipients. All recipients became pregnant and gave birth to a total of 15 (14.8%) pups. As a control, same DNA construction (${\beta}-act/luc^+$) was also injected into 450 in vitro fertilized eggs, of which 338 (75.1%) were survived and then were transferred into 14 recipients. Eleven (78%) mice became pregnant and littered a total of 54 (19.1%) pups. Southern blotting analysis of Tg mice indicated that one (1/15, 6.6%) and three (3/54, 5.5%) transgenic mice were production from cryopreserved and in vitro fertilized eggs, respectively. All Tg mice produced from both eggs showed the expression of improved luciferase gene. These results indicated that efficiency of produced of Tg mice from cryopreserved eggs was comparable to that from in vitro fertilized eggs. Furthermore, it is suggested that microinjection of transgene into in vitro fertilized eggs cryopreserved by ultrarapid freezing is an easy and conveniently method for production of Tg mice.

• Proceedings of the Korean Society of Toxicology Conference
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• 2002.05b
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• pp.106.2-132
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• 2002

형질전환 (유전자 결핍; Knockout) Min 마우스를 이용하여 대장암 발생에서 배추, 양배추 주성분인 indole-3-carbinol (I3C)의 대장암 예방효과를 규명하고자 하였다. 실험동물로는 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$(Min 마우스)계의 5내지 6주령의 수컷 이형접합체 형질전환 마우스 70마리와 C57BL/6J계의 동일 산자, 동일 주령의 수컷 wildtype 비형질전환 마우스 10kfl를 The Jackson Laboratory 사 (Bar harber, ME, USA)로부터 직접 구입하였다. C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 (Min)마우스 70마리를 각 군 20내지 25마리씩 세군으로 나누었다. Group 1에는 20마리, Group 2에는 25마리, Group 3에는 25마리를 배치하고, I3C 투여 실험군 (Group 1과 2)에는 실험시작시에 AIN-76A 분말사료에 I3C가 각각 100 및 300ppm이 함유되도록 조제하여 공급하였다. 그리고 실험군(Group 3)에는 실험시작부터 종료시까지 AIN-76A 정제고형사료(Teklad사, WI, USA)를 자유로이 급이하였다. 각군간의 체중, 사료 및 음수소비량을 매 2주마다 측정하였고, 10주간 (16주령)의 실험종료시에는 최종체중과 간장, 신장, 비장 등의 장기무게를 측정하여 상대장기 무게비를 산출하였다. 대조군으로서 C57BL/6J계의 동일 산자, 동일 주령의 수컷 wildtype 비형질전환 마우스 10마리는 같은 조건의 사육실에서 AIN-76A 정제고형사료를 33주간 자유로이 급이하였다. 실험동물은 부검전에 하룻밤 동안 절식하고 이산화탄소 흡입 마취하에서 흉대동맥을 절단하여 방혈하고 각 장기(심장, 폐, 위)를 적출하여 생리심염수에 넣어 장기무게를 측정하고 포르말린에 고정하였다. 소장과 대장의 검사를 위하여 위의 식도부위와 직장을 실로 결찰하여 적출하고 생리심염수를 주입하여 팽창시켜, 십이지장, 공장, 및 회장, 그리고 대장으로 나누어 여과지에 펼친 후 포르말린에 고정하였다. 소장과 대장은 육안 및 자동 영상분석길ㄹ 이용한 분석이 끝난 후에 각 부위별로 4-6개의 절편을 작제하여 포르말린에 재고정하고, 통상적인 조직처리과정, 파리핀 포매 및 3-4$\mu$m 두께의 조직절편을 제작하여 H&E 염색을 실시하여 현미경으로 검경하였다. 약 1주일간의 포르말린 고정이 끝난 소장 및 대장을 부위별, 별 종양개수 및 분포를 자동영상분석기(Kontron Co. Ltd., Germany)로 분석하였다. 체의 변화, 장기무게, 사료소비량 및 마리당 종양의 개수에 대한 통계학적 유의성 검증을 위하여 Duncan's t-test로 통계처리 하였고, 종양 발생빈도에 대하여는 Likelihood ration Chi-square test로 유의성을 검증하였다. C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스에 AIN-76A 정제사료만을 투여한 대조군의 대장선종의 발생률은 84%(Group 3; 21/25례)로써 I3C 100ppm 및 300ppm을 투여한 경우에 있어서는 각군 모두 60%(Group 1; 12/20 례, Group 2; 15/25 례)로 감소하는 경향을 나타내었다. 대장선종의 마리당 발생개수에 있어서는 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스에 AIN-76A 정제사료만을 투여한 대조군은 1.40$\pm$0.24(100%)에 비하여 I3C 저농도 투여 실험군(Group 1; 0.85$\pm$0.23; 61%, P<0.01), 그리고 I3C 고농도 투여 실험군(Group 2 ; 1.32$\pm$0.29 ; 94%)의 순으로 감소하였다. 선종의 크기별 종양의 발생개수의 분포에 있어서 I3C 저농도 투여 실험군에 있어서는 선종의 크기가 3mm이하의 수가 현저하게 감소하였다. C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스에 AIN-76A 정제사료만을 투여한 대조군의 부위별 소장선종의 발생수는 십이지장부위를 제외하고 각 군에서 유의한 변화는 관찰되지 않았다. 십이지장 종양의 발생개수에서만 I3C 저농도 투여 실험군(Group 1 ; 3.11$\pm$0.85)이 대조군 (Group 3: 1.48$\pm$0.35) 및 I3C 고농도 투여 실험군(Group 2: 1.56$\pm$0.47)에 비하여 유의성 있게 증가하였다. (P<0.05). 따라서 I3C은 소장에서는 암예방 효과가 뚜렷하지 않으나, 대장에 대한 암에방 효과가 있을 것으로 생각된다. 소장 및 대장을 제외한 간장, 신장, 비장, 심장, 폐 그리고 위 등의 기타 장기에서의 조직병리학적 변화는 관찰되지 않았다. 소장 및 대장의 종양은 선종(polyps)으로 관찰되었다. 지난 10여년간 형질전환 및 유전자 결핍 실험동물의 종류가 기하 급수적으로 증가하여 이용되고 있다. 가족성 대장 선종성 용종증(FAP)의 대표적인 모델로 이용되고 있는 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스를 사용하여 배추나 양배추의 주요성분인 Indole-3-carbinol(I3C)의 대장암 예방효과가 있는지를 검색하여 본 결과 AIN-76A정제사료만을 투여한 대조군의 대장선종의 발생률 84%에 비하여 I3C 100 및 300ppm을 투여한 실험군에 있어서 각군 모두 60%로서 감소하는 경향을 나타내었으며, 대장선종의 마리당 발생개수에 있어서는 대조군의 1.40$\pm$1.041를 100%로 환산하였을 경우 I3C 저농도 및 고농도 투여 실험군에서는 각각 약 61%와 94%를 나타내여 감소하였다. 특히 대장선종의 크기별 분포에 있어서 선종의 크기가 3mm이하의 수가 현저하게 감소하였다. 따라서 저농도 I3C의 투여는 실험적 유전성 가족성 대장 선종성 용종증 모델에 있어서 어느정도 암 예방효과가 있는 것으로 생각된다. 그러나 소장 선종의 발생에는 별 영향이 없는 것으로 생각된다. 그러나 본 실험에 사용된 C57BL/6J-Apc$^{min/+}$계 수컷 이형접합체 형질전환 마우스는 실험개시 시점이 7내지 8주령이 경과하여 이미 태생기부터 소장 및 대장의 선종 발생이 진행되어 온 것을 감안하고 특히 비스테로이드계 항염증 소염제(NSAIDS)와 같은 강력한 COX-2억제제가 아님을 고려하면, 상당한 선종의 발생을 억제할 수 있는 가능성이 매우 높다고 생각한다. 또한 이제까지 배추나 양배추 성분의 복합성분들에 대한 실험적 대장암 모델에서의 촉진효과 등에 대한 보고들이 있어 온 점을 고려할 때 위암(Kim 등, 1994) 간암(Kim 등, 1994), 유방암(Grubbs, 등, 1995; Bradlow 등, 1995)에 대한 예방효과가 있을 것으로 생각된다. 앞으로 이러한 종양조직내에서의 COX-2 및 iNOS mRNA와 단백질의 발현정도를 분자병리학적으로 연구중에 있으며, 향후 십자화과식물 성분인 indole-3-carbinol이 마우스뿐 만 아니라 랫드의 화학발암물질에 의한 대장종양에 대한 억제효과 있는지 연구 필요가 있다. Min 마우스와 같은 형질 전환(유전자결핍;knockout) 실험동물을 이용한 새로운 중기 발암성 시험범의 확립을 통한 각종 환경 유해물질의 발암성 유무 및 COX-2 억제작용이 있는 식품인자의 암예방 후보물질을 체계적으로 검색하는데 유용하게 활용될 수 있을 것으로 생각한다.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.31 no.1
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• pp.49-55
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• 1988

A few SV4O-transformed human cells such as SV8O are potentially tumorigenic but rejected by athymic hosts. However, one cell line in this group (W118IVA-2) is known to be fully tumorigenic. Two clones were obtained after the injection of W118IVA-2, of which NW1SC1-1 was tumorigenic but NW18C1-2 was not in nude mice. As examined by Southern blot analysis, NW18C1-1 appears to contain more copy number of SV40 sequences than NW18C1-2 does. However, it was unable to demonstrate that this difference elicits the tumorigenicity in NW18C1-1 but not in NW18C1-2. Therefore, the latter clone was tested if it expresses SV40 early genes to produce large T as well as small t antigens using indirect immunofluorescent assay and immunoprecipitation. In addition, mouse NIH3T3 cells were transfected with the cellular DNA of NW1SC1-2 as well as that of NW18C1-1 to examine if the viral genomes in the clones can make the nontransformed cells to acquire malignant growth potential in vivo. The transformed cells expressed large T antigen and became tumorigenic. Thus, the transforming functions of NW1SC1-2 cell appers to be intact. These results clearly suggest that the inability of NW18C1-2 cell to form tumor in nude mice is not because they are inherently nontumorigenic. However, the possibility that the interaction of SV40 with its host differs in these clones can not he ruled out.

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 1997.10a
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• pp.51-51
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• 1997

• Journal of the Korea Institute of Information and Communication Engineering
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• v.18 no.2
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• pp.482-487
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• 2014

This study is to investigate the effects of testosterone on adipogenesis and its molecular mechanism using RT-PCR analysis and transient transfection assays. Castrated(CAST) mice treated with testosterone had lower white adipose tissue weights and expression of adipocyte-specific genes($PPAR{\gamma}$ and aP2) than CAST control mice. Consistent with the in vivo data, testosterone treatment inhibited triglyceride accumulation and expression of adipocyte-specific genes($PPAR{\gamma}$ and aP2) in differentiated 3T3-L1 cells compared with control group. Testosterone-activated androgen receptor(AR) repressed the luciferase reporter gene activity induced by $PPAR{\gamma}$ transfection. Thus, these results suggest that testosterone downregulates the actions of $PPAR{\gamma}$ on adipogenesis through AR.

• Reproductive and Developmental Biology
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• v.31 no.3
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• pp.145-152
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• 2007

Transgenic mice were generated by microinjecting a plasmid DNA containing the SV40 (simian virus 40) large T antigen (Tag) gene fused with mouse albumin promoter/enhancer sequences into fertilized one-cell mouse embryos. Among eleven founder transgenic animals, four developed hepatocellular carcinoma, two showed kidney cancer and one developed skin and brain tumors. Three stable transgenic lines, #1-2, #1-6 and #1-11 were established. Members of the lines #1-6 and #1-11 reproducibly developed liver tumors by 8 to 10 weeks of age but did not exhibit any phenotypic changes in other tissues. Histological changes loading to liver tumor formation occurred with predictable kinetics and could be classified into three distinct stages; (a) newborn to 3 weeks of age, characterized by hyperplastic hepatocytes with reduced amounts of cytoplasm without any nuclear alterations, (b) between 4 to 8 weeks of age, characterized by diffuse liver cell dysplasia without observable tumor nodules, and (c) 9 weeks of age and thereafter, characterized by hepatocellular carcinomas in the background of extensive liver dysplasia. Metastasis to the lung from a liver carcinoma was observed in #1-11 founder animal. This transgenic mouse system displays similarities with human liver cancers in a number of aspects and provides a useful model for the study of molecular events involved in hepatocarcinogenesis.

• Proceedings of the Korea Society of Poultry Science Conference
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• 2003.11a
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• pp.69-70
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• 2003

According to topographical methods, the chicken spermatogonia was located in basal membrane of seminiferous tubules. It has large nuclei and mitochondria and proliferated with cellular bridges. Immunohistochemistry data showed that anti-SSEA-1 antibody specifically reacted with $\textrm{A}_{pr}$ and $\textrm{A}_{al}$ type spermatogonia. Lectin, STA and integrin-6, -1 were also specific to $\textrm{A}_{s}$ type spermatogonia.

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.27 no.1
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• pp.69-75
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• 2003

The objective of this study is to improve the efficiency of embryo transfer in generation of transgenic mice using inbred mouse (C57BL/6J) embryos. The embryos of C57BL/6J and BCF1 mice were superovulated by the standard protocol. One-cell stage of embryos were microinjected and the resulted one-or two-cell were transferred into one-or two-side oviducts of foster mother, respectively. When one-cell stage of embryos were transferred into one-side oviduct of 0.75 d.p.c. foster mother, the results were not ideal because of showing pregnancy ratios of 68.8$\pm$7.83% for C57BL/6J and 48.3$\pm$14.22% for BCF1, and development ratios of pups vs transferred embryos of 11.9$\pm$5.51% for C57BL/6J and 10.5$\pm$8.03% fur BCF1 . However, when two-cell stage of embryos were transferred into two-side oviducts of 0.5 d.p.c. foster mother, we got better results of 94.4$\pm$9.64% and 100$\pm$0% pregnancy ratio, and 22.1$\pm$0.4% and 21.8$\pm$0.38% development ratio for C57BL/6J and BCF1, respectively. Therefore, transferring two-cell stage of C57BL/6J embryos into two-side oviducts of 0.5 d.p.c. foster mother may be competitive to the result in BCF1 embryos. Even if there are a lot of other factors affecting these results, we conclude from these experiments that transfer of two-cell embryos into two-side oviducts of 0.5 d.p.c. foster mother is a more efficient and safe method than others in generating transgenic mice using inbred mice embryos.

• Journal of Life Science
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• v.27 no.2
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• pp.194-201
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• 2017

Rapeseed (Brassica napus L.) is an oil crop classified as Brassicaceae, and it is widely grown worldwide. To develop a drought-resistant rapeseed, the ${\beta}$-glucosidase 1 (AtBG1) gene was introduced into rapeseed because drought- and salt-resistance phenotypes were observed when the AtBG1 gene was overexpressed in arabidopsis. Newly developed genetically modified crop must be proved to be safe. Safety assessments are based on the historical usage and scientific reports of a crop. In this study, we examined the potential acute oral toxicity of AtBG1 protein expressed in genetically modified (GM) rapeseed and calculated the minimum lethal dose at 6 weeks in both male and female ICR mice. AtBG1 protein was fed at a dose of 2,000 mg/kg body weight in five male and five female mice according to the marginal capacity concentration of OECD, 2,000 mg/15 ml/kg. Mortalities, clinical findings, and body weight changes were monitored for 14 days after dosing, and postmortem necropsy was performed on day 14. This study showed that no deaths occurred in the test group, and AtBG1 protein did not result in variations in common symptoms, body weight, and postmortem findings between the two groups. This showed that the minimum lethal dose of AtBG1 protein expressed in transgenic rapeseed exceed 2,000 mg/kg body weight in both sexes.