한탄바이러스의 내피 단백질 (N)은 이 바이러스에 대한 중요한 항원으로 작용하지만 신증후출혈열 예방과 관련된 작용은 명확히 알려져 있지 않다. 본 연구는 이러한 내피 단백질이 한탄바이러스에 대한 중화 항체를 유도할 수 있는가 하는 관점에서 수행되었다. 한탄바이러스의 내피 단백질을 대장균에서 용해된 형태로 발현하고 이를 단클론 항체를 이용한 면역친화 컬럼으로 분리 정제하였다. 정제된 내피 단백질을 기니픽에 면역하여 항혈청을 얻고 이것의 한탄바이러스에 대한 중화능력을 중화항체 플락 감소법 (plaque reduction neutralization test)을 이용하여 조사한 결과 최고 1:160의 중화능이 있음을 관찰하였다. 이는 한탄바이러스의 내피 단백질이 중화 항체를 유도할 수 있는 epitopes을 가지고 있음을 의리하며 이러한 생각은 본 연구에서 수행한 면역침강법과 N 단백질에 대한 단클론항체를 이용한 면역친화법을 통한 한탄바이러스의 정제 실험 결과에서도 뒷받침되고 있다.
It was found that the diapause in the silkworm egg is induced by the action of the diapause hormone secreted from the suboesophageal ganglion, and "esterase A" affects protein metabolism in oocyte and egg. In this connection, some changes in protein metabolism of silkworm egg according to embryonic developments could give some information on the diapause, using Ouchterlony Test. Antigenicity of the protein of silkworm egg was detected through antigen-antibody interaction among the extracts of rabbit blood. Furthermore, existence of the specific antigen was also detected according to embryonic development, using the adsorption test. The results were obtained as follows: 1 Detection of antigenicity The antigenicity of silkworm egg was ascertained by inoculating it into a rabbit, but positive results were shown in most of the silkworm eggs tested, whereas the antibody specific to a certain antigen was not detected. 2. Detection of the common antigen It was demonstrated that most of the antigen could incite the common antibodies, but the specific antibody formation was not detected in a few antigens, even though the nonspecific antibody formation was displayed. 3. Detection of the specific antigen It is suggested that there are the specific antigens detectable in each treated eggs by the adsorption test.
Immunological analysis between endotoxin proteins produced by Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki HD1 and HD73 have been investigated by using polyclonal antibodies. The antisera against the endotoxin proteins were prepared from rabbits injected with the endotoxin protein antigens. When about 2mg/$m\ell$ of the antigens were injected for 7 times, the titers were highest. The stability of the antigens was reduced to about 50% after 9 days incubation at 4$^{\circ}C$. The sensitibity of endotoxin protein from B. thuringiensis HD1 and HD73 by indirect ELISA was 50ng/$m\ell$ and 400ng/$m\ell$, respectively. The cross reaction of antiserum appeared that anti-HD1 partialy reacted with crystal protein but anti-HD73 reacted with HD1 endotoxin about 100%.
We have studied the effects of serum concentration and initial cell density on hybridoma cell growth and monoclonal antibody (MAb) production at various media supplemented with different types of serum. The types of serum were fetal bovine sera, newborn bovine calf sera, calf sera including supplemented calf sera, horse serum, and goat serum. The concentrations of each serum were 0.5, 1.25, 2.5, and 5% (v/v) and the inoculum densities were $5{\times}10^4, 1{\times}10^5, 2{\times}10^5,$ cells/ml. The hybridoma cell growth and anti-Hepatitis B surface antigen (anti-HBsAg) MAb production were found to be enhanced by increasing the serum concentration and by increasing inoculum density regardless of serum type. We found that test sera purchased from different companies show different effects on cell growth and MAb production, although they are the same type of serum.
An, Byung-Hoon;Lee, Gu Chang;Yoon, Tae Young;Kim, Mi-Jung
Clinical and Experimental Pediatrics
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v.48
no.3
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pp.342-345
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2005
Neonatal lupus erythematosus(NLE) is a distinct subset of lupus characterized by cutaneous findings, cardiac conduction defects, hepatic or hematologic abnormalities. These manifestations are associated with the presence of maternal auto-antibodies such as anti-SSA/Ro, anti-SSB/La, and rarely anti-RNP($U_1RNP$) antibodies. Cases of $U_1RNP$ antibody-positive NLE have somewhat atypical cutaneous manifestation without cardiac or systemic abnormalities. We report a case of cutaneous NLE associated with $U_1RNP$ antibodies.
These experiments were undertaken as a basic study to develop immunocontraceptive vaccine and to understand the role of zona pellucidae in early fertilization process by identifying the monoclonal and polyclonal antibody to porcine zona pellucidae and polyclonal antibody to mouse zona pellucidae by indirect ELISA and indirect immunofluorescence test. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The titer of the antibodies to zona was determined by indirect ELISA using solubilized porcine zona coated plates. Both monoclonal and rabbit polyclonal antibodies showed very high titers ; O.D at 1 : 12,800 dilution of antibodies was still significantly higher than that of non-immunized control serum. Rabbit anti-mouse zona pellucidae sera also reacted with porcine zona pellucidae. 2. By indirect immunofluorescence test strong fluorescences were observed on the egg treated with homologous and heterologous rabbit polyclonal antibodies and FITC lablled 2nd antibodies and found to crossreact strongly with the eggs from the pig and mouse. While weaken fluorescences were observed on the eggs treated with monoclonal antibodies.
These experiments were carried out to investigate of the molecular characteristics of porcine zona pellucidae and to examine the reactivity of anti-zona antibody by SDS-PAGE, Immunoblotting and Immunoprecipitation. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The result obtained by SDS-PAGE of porcine zona pellucidae indicated that it composed of several units with molecular weight ranging 55,000-110,000. 2. In order to see the reactivity of antibodies to zona pellucidas, immunoblotting was applied. The results indicated that polyclonal antibodies to porcine and mouse zona reacted with porcine zona. While monoclonal antibody to porcine did not react with the procine zona enough to show a clear band on a gel. 3. Labelling of porcine zonae with 125I was performed using the Iodogen method, the radioactivity and the percent incorporation of 125I into porcine zonae were approximately 26,000 cpm/10${mu}ell$ and 16, respectively. 4. Measurements of radioactivity and O.D value for Immunoprecipitates produced by reaction of 125I-porcine zona with anti-zona antisera were confirmed that existence of reactivity of monoclonal antibody to porcine zona although its reactivity was lower than that of polyclonal antibodies, and reconfirmed that cross-reactivity of polyclonal antibody of mouse zona with porcine zona.
These experiments were undertaken as a basic study to develop immunocontraceptive vaccine and to understand the role of zona pellucidae in early fertilization process by investigating the effect of monoclonal and polyclonal antibody to porcine zona pellucidae and polyclonal antibody to mouse zona pellucidae on the fertilization of porcine and mouse eggs in vitro. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. Treatment of porcine and mouse eggs with undiluted anti-zona serum produced intense precipitation layer on the poricne and mouse zonae, respectively, thus resulting in the total inhibition of sperm adherence on surface of zona. 2. In vitro fertilization of eggs pre-treated with 0.3∼10% of various antibodies was examined, and resulting in that 5 and 10% of rabbit polyclonal antibodies to porcine zona inhibited completely both in vitro fertilization and polyspermy of porcine eggs while monoclonal to porcine zona and rabbit polyclonal antibody to mouse zona did not inhibit in vitro fertilization but monoclonal antibody reduced the rate of polyspermy compared to that of control group. Almost the same results were obtained in the study on the effect of anti-zona serum on in vitro fertilization of mouse eggs.
Chick antibodies (IgY) raised against Streptococcus mutans (serotype c) were separated from egg yolk and their properties were investigated. The purity of IgY extracts prepared by the method of ${\lambda}-carrageenan$, $gammaYolk^{TM}$, and $EGGstract^{TM}$ was 20%, 46%, and 48%, respectively, and the yields of IgY extracts from a gram yolk were 11. 3 mg, 1.7 mg, and 1.8mg, respectively. Quantitative immunoprecipitation test showed that specific IgY content of crude IgY prepared by ${\lambda}-carrageenan$ method was 12.2%, which means that 0.85 g of crude IgY from an egg yolk (15 g) contains about 100 mg of specific IgY. When the reactivity of the specific IgY towards 3 caries-inducing strains (serotype: b, c, f) was examined, the strains cultured in sucrose-added medium showed higher reactivity (the orders were c(+), f(+), b(+)) than those cultured in sucrose-free medium. Heat and pH stability of specific IgY was good, for crude IgY contained 50% of antibody activity after heat treatment at $70^{\circ}C$ for 5 min and they were stable at pH $4{\sim}8$.
HA Jai Yi;PARK Jun-Hyo;KIM Myoung Sug;CHUNG Joon-Ki;JEONG Hyun Do
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.32
no.4
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pp.420-426
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1999
We examined the immune response in flounder, Paralichthys olivaceus, with immunization of formalin killed Edwardsiella tarda as an antigen. The ELISPOT-assay (enzyme-linked immunospot assay) was optimized technically and applied to count the number of total and specific antibody secreting cells (TASC and SASC) in lymphocytes of different lymphatic organs. Incubation of lymphocytes on 96 well plate for more than 2.5hrs came out enough time in ELISPOT-assay for counting the antibody secreting cells in the anterior kidney and spleen. However, too much of plate-coated antigen or rabbit anti-flounder immunoglobulin for SASC or TASC counting, respectively, was appeared to decrease the sensitivity of the assay system. Specificity of the system was also confirmed by the absence of TASC in lymphocytes treated with cycloheximide to prevent protein synthesis. The peak numbers of SASC appeared at wk 3 post immunization after that there was a sharp decrease and reached to almost zero at wk 7. In the spleen and kidney, the timing and numbers of SASC on peak response were concurrent without preferential organ distribution. The specific antibody level in the sera increased rapidly between wk 2 and 3 after immunization, i.e. like the specific cellular response found with ELISPOT-assay on that period, However, the remained high level of specific serum antibody from wk 5 after immunization until the end of experiment was clearly distinguishable from the kinetics of SASC response decreased sharply.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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