본 연구는 black stain을 가진 유치 치태에서 추출한 방선균이 S. mutans에 대해 항생능을 가지는가를 평가하고자 시도되었다. 만 $2{\sim}6$세 유치열기 어린이 중 black stain이 모든 치아에 존재하는 4명의 어린이를 대상으로 치태를 채취한 후, 증균 배양하여 16개의 방선균 균주를 분리해 냈으며, 이들이 생산해내는 물질이 항생능을 가지는지를 paper disc method를 이용하여 확인하여, 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. No.1 균주와 No.5 균주에서 S. mutans에 항생능을 보였으며, 특히 No.5 균주는 Oxacillin과 유사한 항생능을 보였다. 2. No.1 균주와 No.5 균주는 일반적으로 항생능 평가시 사용되는 시험균인 Bacillus cereus, Bacillus subtilis에도 항생능을 보였다. 3. PCR을 통해 구강내 대표적인 상주 방선균들을 대상으로 이 균주들의 동정을 시도해본 결과 No.5 균주는 Actinomyces viscosus와 97% 일치하는 것으로 나타났다.
Streptomycin 은 아직까지 가장 동물체에 안전한 항생물질로 알려져 왔으나, BROWNLEE와 BUSHBY (1948)에 의하면 백혈구가 Streptomycin 처리에 의해 죽는다고 하였다. 본인등은 Streptomycin을 처리한 흰쥐의 백혈구수의 변화와 백혈구 지체의 운동능에 미치는 영향을 조사하였다. 치사를 이르키게하는 최저를 이내인 10mg, 5mg, 2mg. 1mg. 0,5mg을 각각 흰쥐에 주사한 후 일정한 시간내의 백혈구수의 변화를 보면 처리후 1시간에서부터 6시간 사이에 백혈구수가 급격히 감소하며 정상지인 12,000에서 최하 3,000수까지 내려간다. 감소하는 정도는 처리량의 다소에 관계없이 대개동일하게 일어나는 것이다. 감소하는 원인을 추구하고저 쥐의 미부로부터 탐혈하여 이에 Streptomycin을 직접 접촉시켜 백혈구의 운동능을 조사하였다. Streptomycin의 량에 tt례하여 백혈구의 운동속도는 저하한다. 일정량을 초과할 때는 백혈구는 단시간내에 죽는다. 처리량의 다소를 불문하고 일정한 정도로 수의 감소가 일어나는 것과는 달리 백혈구의 운동능은 량에 따라 많은 변화를 가져온다. 이것으로 보아 백혈구수의 감소와 운동능의 저하와는 특별한 관계가 없는 것으로 보며 백혈구수 감소의 원인에 대해서는 추후 실험에서 밝혀야 할 것이다.
Streptomyces의 분류, 분포 및 항생물질 생산특성을 알아보고자 각 토양으로부터 총 826 균주의 Streptomyces를 분리하여 토양별 분포를 조사하고 항생물질 생산능을 검정하였다. 토양별 방선균류의 분포를 조사한 결과 참나무, 잔디, 아카시아, 사과나무, 고추밭, 배추밭, banana 온실 등지에서 $10^{-5}g$ 토양중에 5개 이상의 Streptomyces가 분리되었으며 산림토양에서 평균 4.7개, 과수원 토양에서 2.4개, 경작지 토양에서 2.9개의 분리율을 보였다. 2. Streptomyces의 항균 spectrum을 조사한 결과 Bacillus subtilis, Erwinia carotovora sub-sp. carotovora, Xanthomonas campestis pv. oryzae에 49% 이상의 균주가 항균력을 나타내었으나 Escherichia coli와 Pseudomonas solanacearum에는 항균력을 나타내는 균주가 적었다. 3. 도열병균을 대상으로 Streptomyces의 항진균성 항생물질 생성능을 조사한 결과 강력한 항균력을 나타내는 균주가 40 균주였다. 4. Streptomyces의 분리율이 가장 우수한 배지는 Starch agar 였다. 5. Streptomyces의 항생물질 생성능이 가장 우수한 배지는 potato sucrose agar 였다.
이번호에는 충남 연기군의 유일한 육용종계장으로 40년간 오로지 양계산업에 종사한 조은농장을 소개하고자 한다. 이곳은 다양한 효모제와 첨가제를 사용하면서 일체 항생제를 쓰지 않는 농장이다. 최근 추세가 무항생제를 선호하기 때문에 따라간다? 그렇지 않다! 조은농장 사장인 박순종 씨는 30년 전부터 이런저런 첨가제를 사용하면서 최소한 몇 년간 사육해보고 생산성에 효과가 있는 것으로 결과를 얻어 오로지 무항생제 축산업만을 고수하고 있다. 특히나 3년 전부터는 장기능 발달로 생체 활성화 효과가 있는 비타민 미네랄 활성화제제를 첨가 급이하면서 배부율이 크게 향상되는 등 높은 부화성적으로 농가 수익창출을 보고 있는 농장이다. 조은농장 박순종 사장을 만나 인터뷰한 내용을 정리했다.
다제내성균 A. baumannii에 유용한 항생물질을 생산하는 방선균을 선별하기 위하여 토양에서 분리한 방선균 300여 균주를 대상으로 항균 활성을 실험하여 그 활성이 가장 뛰어난 B-51 균주를 최종적으로 선별하였다. 이 균으로부터 항생물질 생산을 위한 최적 조건을 조사하기 위하여 발효 배지를 기본배지로 하여 동일조건 하에서 탄소원, 질소원, 무기염 및 인삼염만을 다르게 하여 항균 활성을 실험한 결과 glycerol 2%, soybean meal 0.5%, $CaCl_2$ 0.01%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.01%, $KH_2PO_4$ 0.01%에서 항생물질 생산이 가장 높았다. 또한 이렇게 결정된 배지 조성에서 초기 pH 6.0, 배양온도 $30^{\circ}C$, 배양시간 76시간 조건 하에서 항생물질 생산이 가장 많았다. 항생물질을 생산하는 대부분의 방선균이 항생물질 생산 시 배양액의 final pH가 중성 혹은 약 알칼리인 점을 비교해 볼 때 본 균주인 B-51의 경우 항생물질 생산능이 높은 경우 final pH 4.0 부근인 산성 pH를 보여 그간의 논문보고와는 상반되는 결과를 보였다.
현재까지 미생물에 의해 생산되는 10,000여 종의 항생물질 가운데 약 2/3 에 해당하는 64% 정도가 방선균으로부터 발견되었다. 따라서 토양 중에 널리 분포하고 있는 방선균을 분리하여 광범위 항생물질 생산능이 가강 우수한 Y-88을 최종 선정하였다. 이 균을 형태학적, 생리상 및 배양학적으로 동정한 결과 Streptomyces 속으로 밝혀져 Streptomyces sp. Y-88 이라 명명하였다. Y-88로부터 항생물질 생산 최적 배양조건을 검토한 결과 soluble starch 1.6%, glucose 1.6%, beef extract 0.6%, $K_2HPO_4$, $MgSO_4$$7H_2O$ 및 $ZnSO_4$$7H_2O$가 각각 0.01%였으며, 최적 pH4.0, 배양온도 25$^{\circ}C$ 그리고 배양시간으로 위의 조건에 30시간에서 항생물질 생산이 빠른 것으로 나타났다.
진균성식물병을 생물학적으로 방제할 수 있는 미생물제제의 개발을 위하여 경북 지역의 저병해 경작지 토양에서 고추역병균 Phytophthota capsici과 시들음병균 Fusarium oxysporum에 강력한 길항능을 가지며 균주 상호간에 공생이 가능한 AY1, AY6, AB1, BB2, F4, 5종의 균주를 선발하였다. 이들의 P. capsici에 대한 길항기작은 모두 내열성 저분자의 항균성 항생물질 생산에 의한 것이었으며, 이 중 BB2균주는 항생물질 생산능뿐만 아니라 고추역병균의 세포의벽 가수분해효소인 cellulase도 생산하여 다기능 길항기작을 보유하고 있었다. 선발된 5종 균주는 Halobacterium sp. AB1, Xenorhadus sp. AY1, Bacillus sp. AY6, Bacillus sp. BB2, Zymomonas sp. F4로 각각 동정되었으며, 이들은 0.1% galactose, 0.1% $NaNO_2$, 5 mM $Na_2HPO_4$가 포함된 배지에서 pH 5.5의 조건에서 48시간 배양했을 때 길항물질 생산능이 매우 우수하였고, 이 배양액을 1톤 규모의 발효탱크에 접종하고 대량배양 후 복합 미생물제제로 생산하였으며, 생산된 시제품의 액상 미생물제제는 경북 영천지역의 농가의 시험포장에서 3일 간격으로 3회 처리 해 본 포장시험에서 오이덩굴쪼김병, 방울토마토시드름병의 방제와 시금치잘록병의 방제 및 생육촉진에 탁월한 효과가 있었다.
본 연구에서는 생물농약용으로 연구 개발된 길항미생물의 균주들을 이용하여 친환경농업용 길항미생물 컨소시엄을 개발하고자 하였으며, 개별 길항미생물의 항생능력, 항진균성 siderophore 및 ${\beta}$-glucannase 생산능, auxin생산능, 인산가용능 등 각 기작별 상호 보완형 미생물균주의 컨소시엄 후보군을 구성하였다. 구성된 컨소시엄 후보군 중 컨소시엄 No. 11이 in vivo pot test에서 가장 좋은 고추생장촉진능과 교추역병 방제능을 발휘하였다. 최적 컨소시엄인 No. 11 컨소시엄내 두 길항미생물인 B. subtilis AH18과 B. licheniformis K11은 기작별 상호보완형으로 모두 auxin생산능, 항진균성siderophore 및 ${\beta}$-glucannase생산능을 가지며, 특히 B. licheniformis K11는 고추역병을 길항하는 항생물질인 iturin을 생산한다. 고추역병방제용 최적컨소시엄 구성균주들간의 상호 비경쟁적 상리공생 여부를 조사하기 위하여 개별균주인 B. subtilis AH18과 B. licheniformis K11을 각각 단독으로 배양한 것과 두 균주를 동시에 접종하여 배양한 것 그리고, 각각 단독으로 배양한 것을 접종시에 혼용하는 것의 3가지 처리를 실시하였다. 그 결과 동시 배양한 것은 각각을 단독을 배양한 것과 비교하였을 때 방제능과 생육촉진능 모두 시너지 효과를 나타내지 않았다. 하지만, 단독배양 후 혼용한 처리구에서는 시너지 효과를 크게 나타내었는데 방제능도 가지면서 뿌리, 줄기, 잎의 생장촉진효과에서 모두 개별 단독배양 후 처리 또는 동시배양 후 처리에서 보다 50% 이상 시너지 효과를 발휘하였다.
항진균성 항생물질에 의한 고추역병의 생물방제에 관한 연구를 위하여 지역 경작지에서 고추역병균 P. capsici 생육을 저해는 다기능의 강력한 길항세균을 선발하였다 선발된 균주는 배양학적, 생리학적, 생화학적 실험과 AEI(CHB50) 및 Biolog(Microlog 4.01C) 시스템을 이용하여 동정한 결과 B. megaterium와 97%이상 일치하여 최종적으로 선발된 길항세균을 B. megaterium KL 39로 명명하였다. B.megaterium KL 39의 P. capsic에 대한 길항은 열에 안정하고 n-BuOH에 추출이 되는 저분자성 항생물질과 용매에 추출되지 않은 열에 약한 고분자성의 식물병원균 세포벽 가수분해효소인 cellulase에 의한 것으로 확인되었다. 길항균주 B.megaterium KL 39가 생산하는 항진균성 항생물질은 P.capsici의 포자발아와 균사성장에 큰 영향을 미쳤으며 0.4% fructose, 0.3% yeast extract, 5 mM KCI (pH 8.0)을 포함한 배지에서 3$0^{\circ}C$, 40시간 배양하였을 때 그 생산성이 최대치를 나타내었다. Diaion HP-20 column, silica gel column, Sephadex LH-20 column과 HPLC에 의해 항생물질을 정제하였으며 정제된 항생물질은 TLC plate상에서 Ethanol:Ammonia:Wate.(8:1:1)로 전개한 결과 RF value가 0.32를 나타내었으며, 단일물질로 정제된 항생물질을 KL39로 명명하였다. 선발된 길항미생물 E. megaterium KL 39와 정제된 항생물질 KL39를 가지고 고추를 기주식물로 하여 in vivo pot시험 결과 고추역병균 P.capsic게 의해 유발되는 고추역병에 대한 길항력으로 두 가지 모두 고추역병 방제력이 있음을 식물실험에서 확인할 수 있었다.
Virginiamycin(VM) 생산 유도에 관여하는 virginiae butanolide C(VB-C)및 receptor의 기능을 명확히 규명하기 위해 S. virginiae로부터 NTG및 hydroxylamine 처리를 통해 두 개의 변이주를 분리하였으며, VM을 생산하는 균중에서 VB, receptor를 모두 생산하지 않는 S. ostreogriseus와, receptor는 생산하나 VB를 생산하지 않는 S. graminofaciens를 대상으로 하여 유도능의 관계를 검토하였다. 분리한 S. virginiae mutant N-25와 H-05는 VB가 receptor보다 먼저 생산되는 특성을 나타내었으며, VM 생산시기가 현저히 지연되었다. 이는 S. virginiae 모균주에서 receptor가 생사노디기 이전에 합성 VB-C를 첨가하였을 때 VM 생산이 억제되는 것과 같은 현상인것으로 판단되었다. 한편, VM 생산균인 S. ostreogriseus 및 S. graminofaciens는 모두 VB를 생산하지 않으며 합성 VB-C 첨가에 의한 유도능을 검토한 결과, receptor를 생산하지 않는 S. ostreogriseus의 경우 VM 생산이 억제되는 반면, receptor를 생산하는 S. graminofaciens의 경우에는 VM 생산이 촉진되었다. 이들 결과에서 볼 때, VM 생산 촉진에 VB가 필수적이며 VB의 신호전달에 따른 VM 생산 촉진 효과는 반드시 receptor의 존재하에서 일어난다고 사료되었다. S. graminofaciens의 경우 합성 VB-C 첨가에 의해 생산된 하생물질을 HPLC를 이용하여 분석한 결과, 항생물질 생산량이 증가하였으며, 새로운 항생물질 생상 유도도 가능한 것으로 시사되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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