목적: 본 연구에서는 콘택트렌즈 단백질제거제 개발 시 요구되는 단백질 제거효능의 적절한 평가를 위한 시험법을 확립하고 이를 실제 콘택트렌즈에 침착된 단백질의 제거효율을 측정한 결과와 비교, 분석하여 단백질제거제의 효능 평가법으로 제시하고자 하였다. 방법: 대한약전에 제시된 단백소화력 시험법을 이용하여 파파인, 판크레아틴, 섭틸리신 A 및 프로테아제와 각각의 효소가 포함된 단백질제거 정 또는 용액의 효능평가에 적절한 시험조건을 찾고자 하였다. 또한, balafilcon A 재질 렌즈에 인위적으로 침착시킨 단백질을 시판되고 있는 단백질제거 정 또는 용액으로 제거하여 세척효율을 확인하고 이들 방법의 상관관계를 분석하였다. 결과: 판크레아틴과 판크레아틴 함유 제품의 경우 단백소화력 시험법으로 평가하였을 때 둘 다 약전에서 제시하는 판크레아틴 단백소화력 기준값인 28 IU/mg를 충족하였다. 프로테아제와 삼염화아세트산 B 용액으로 실험한 섭틸리신 A의 경우는 단백소화력 시험법으로 평가하였을 때 제조사에서 제시한 효소활성 값을 충족하였으나, 파파인과 삼염화아세트산 A 용액으로 실험한 섭틸리신 A는 제조사에서 제시된 효소활성 값에 해당하는 단백소화력이 측정되지 않았다. 시판되는 단백질제거제의 경우 판크레아틴을 함유한 제품을 제외한 나머지 세 가지 제품은 단백소화력 시험법으로는 제조사에서 명시한 효소들의 단백질 효소활성 값을 확인할 수 없었다. 그러나 실제 렌즈에 침착된 단백질의 제거정도를 측정하였을 때에는 파파인을 함유한 제품을 제외한 3종의 단백질제거제는 모두 90%가 넘는 단백질 제거효율을 보였다. 파파인 함유 단백질제거제의 경우 단백소화력 시험법으로는 효능 측정이 불가능하였으나 실제 렌즈에 침착된 누액단백질 제거효율은 73.72%에 이르렀다. 결론: 본 연구결과로 콘택트렌즈 단백질제거제의 효능은 함유되어 있는 단백분해효소의 종류에 따라 시험법을 달리하여 평가되어야 함을 확인할 수 있었다. 즉, 판크레아틴, 프로테아제, 섭틸리신 A를 함유하는 단백질제거제는 단백소화력 시험법과 단백질제거효율 측정법으로 효능평가가 가능하고, 파파인을 함유하는 단백질제거제의 평가는 콘택트렌즈를 이용한 단백질제거효율 측정법만이 효율적임을 제안할 수 있다.
초임계 이산화탄소에 의한 동결 건조된 췌장내의 지질 추출 속도는 추출도, 추출압력, 초임계 이산화탄소의 유량, 원료의 입자크기에 의존하였고, 추출평형은 충진된 원료의 양에 대한 초임 계 이산화탄소의 유량에 비례하여 추출시간의 조절이 가능하였다. 초임계 처리된 원료와 수입 판크레아틴의 효소 역가 측정결과 수입원료에 비해 약 1.8배 이상의 높은 역가를 보였으며, 추출된 콜레스테롤 함량을 분석한 결과 용매추출을 한 경우는 약 2.1mg/g, 초임계 처리하였을 때에는 약 $2.2{\sim}3.1mg/g$정도 함유되어 있었다.
Pancreatin is a enzyme mixture breaking down carbohydrates, proteins and lipids. Most pancreatin used in Korea is imported from foreign countries. However, guideline of each country for pancreatin produced from each country is different. Therefore, guideline for pancreatin imported from several countries, such as Europe, Japan and America, it is standardized to control its quality. Assay of enzyme activity for pancreatin in KP is similar to tat in JP, but it is significantly different from those in FP ad in USP. We measured pancreatin digestive activities of 17 commercial products. Activity assay of digestive enzymes, starch- and lipid-digestive enzymes, for pancreatin by KP method (including JP) was difficult compared to those by FIP ad USP methods. Particularly, activity assays of starch- and lipid-digestive enzymes by KP method were mistakable, ad varied in diluted samples than those by FIP. However, activity assay of protein-digestive enzyme by KP method was similar to that by FIP. Starch-digestive enzyme activities of 17 commercial pancreatins by KP method were lower 0.079-fold compared to those by FIP method. Their protein-digestive enzyme activities by KP method were higher 75.7-fold than those by FIP method. Their lipid-digestive enzyme activities by KP method were lower 0.234-fold compared to those by FIP method.
본 연구에서는 초임계 이산화탄소와 보조용매를 사용하여 동결 건조된 돼지 췌장에 존재하는 지질을 단백질 효소의 변성 및 구조의 파괴 없이 제거함으로써 고순도 소화효소제를 분리하고자 하였고, 동결 건조된 돼지 췌장 내의 지질 제거 효율은 온도, 압력, 초임계 이산화탄소의 유량, 원료의 입자크기에 의존하였다. 추출온도와 압력이 높은 상태에서 높은 지질 제거효율이 예상되나 45$^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 효소의 활성에 영향을 미치므로 추출온도 선택이 요구되었다. 또한 한정된 온도 범위 내에서 지질제거 효율을 크게 하기 위하여 용매의 이동특성을 최대로 증가시키기 위한 최적 압력이 요구되었다. 초임계 이산화탄소를 이용하여 지질을 분리한 후 원료내의 지질함량은 3%(w/w) 이내로 90% 이상의 제거율을 보였으며, 보조용매를 사용했을 경우 사용하지 않았을 때 보다 추출시간은 약 3배 이상 단축되었으나, 사용된 보조용매가 효소의 활성에 영향을 미치므로 보조용매의 선택이 매우 중요하다는 것을 제시하고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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