본 연구는 유황오리로부터 항종양 효과를 나타내는 물질을 용매추출과 각종 chromatography를 사용하여 분리 및 정제하였다. HPLC를 사용하여 정제한 항종양활성 성분의 수율은 유황오리 1Kg당 10mg이었다. HPLC를 이용하여 정제한 항종양활성 물질을 Clonogenic assay로 측정한 결과 $200{\mu}g/m{\ell}$의 농도에서 HEp-2, KB 및 SW-156에서 각각 26%, 28%및 30%의 생존율을 나타내어 항종양 효과가 나타났다. MTT assay에서는 $100{\mu}g/m{\ell}$의 농도는 Farrow, HEp-2 및 KB에 대해서 각각 56%, 58% 및 56%의 세포증식 억제 효과를 나타내었다. bovine normal kidney cell line인 MDBK는 $500{\mu}g/m{\ell}$, $200{\mu}g/m{\ell}$, $100{\mu}g/m{\ell}$에서 각각 48%, 34%, 28%로 증식억제 효과가 나타나 정상세포에 대한 세포독성은 강하지 않은 것으로 판단되어진다.
온열처리가 근세포의 분화에 어떤 영향을 미치는 지를 알아보기 위하여 배양한 근세포에 여러가지 온열처리를 한 다음, 단백질 합성, 세포증식, 융합지수, creatine kinase(CK)의 활성 및 cholesterol 함량의 변화를 조사하였다. 배양한지 24시간지나 45$^{\circ}C$에서 1 hr의 온열처리를 하면 근세포의 융합과 CK 활성이 지연되었으며, 55시간지나 같은 온열처리를 하면 세포막내(세포내 양의 95% 이상)의 chloesterol 양이 일시적으로 증가함과 아울러 세포융합이 지연되었다. 그러나 세포증식은 대조군과 뚜렷한 차이가 없었다. 이상과 같은 실험 결과로부터 온열처리가 분화에 미치는 영향은 온열처리를 받게되는 근원세포의 분화정도에 따라 차이가 있으며 온열처리에 따른 chloesterol 양의 일시적인 증가가 근세포 융합에 영향을 미칠 수 있다는 가능성이 제시되었다. 한편, 근세포는 온열처리를 받으면 평소의 단백질 합성 수준이 떨어짐과 더불어 heat shock protein(HSP)합성이 증대 내지는 유도 되었으며 HSP 합성의 유도는 actinomycin D의 처리로 억제되었다. 또한 온열처리로 근세포는 열내성을 얻어 세포융하과 CK 활성은 동일한 온열처리를 4시간 간격으로 두번 주어도 한번 주었을 경우와 차이가 없었으며 두번째 온열처리에 의해서는 새로운 HSP 합성이 유도되지도 않았다.
국내 시판중인 인스턴트 커피에서 다당류를 추출하여 새로운 면역 활성 물질을 확인하고자 하였다. 시판중인 인스턴트 커피를 구입하여 냉수추출 후, 에탄올 침전과 투석을 통하여 약 24%의 높은 수율로 다당류(ICP-0)를 얻을 수 있었다. ICP-0은 중성당 89.9%, 산성당 10.1%로 이루어진 다당체로써, 구성 성분으로는 갈락토스 55.5%, 만노스 25.7%와 소량의 아라비노스, 람노스 등으로 이루어진 것을 확인하였으며, 갈락토만난(galactomannan)이나 팩틴 다당류(pectic polysaccharide)가 혼합된 구조일 것이라고 추정되었다. 인스턴트 커피 유래 ICP-0에 대하여 대식세포 자극에 대한 세포증식능을 확인한 결과, NC 대비 유의적으로 높은 증식활성을 보였으며, IL-6, IL-12 및 TNF-${\alpha}$의 경우, $10{\mu}g/mL$에서도 NC 대비 우수한 사이토카인 분비 유도능을 보임이 확인되었다. 또한 NO, ROS를 분석한 결과에서도 NO의 경우 $10{\mu}g/mL$ 이상에서 NC 대비 양호한 활성을 보여 주었다. ICP-0에 대하여 2차 면역기관 중 하나인 비장세포상의 증식능을 확인한 결과, NC 대비 115% 정도 증식하는 것이 확인되어 면역세포를 직접 증진시키는 마이토겐 활성이 있음을 나타내었다. 인스턴트 커피 유래 ICP-0가 장관 내 분포되어 있는 Peyer's patch를 경유하여 장관면역에 공헌할 수 있는지 여부를 확인한 결과, NC 대비 유의적으로 골수세포의 증식능을 확인하였으며 GM-CSF와 같은 관련 사이토카인의 분비 유도가 확인되었다. 이상의 결과는 시판 인스턴트 커피로부터 분리한 다당류가 대식세포의 기능과 장관면역계를 증진시킬 수 있는 가능성을 제시한다.
Streptozotocin으로 당뇨를 유발시킨 생쥐에서 fructan(치커리이뉼린과 치커리이뉼린올리고당, 프럭토올리고당)이 혈당, 인슐린과 소장 및 신장의 이당류분해효소 활성 및 면역능에 미 치는 영향을 조사한 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다. 혈당은 당뇨군들이 정상군보다 유의하게 높았으며, 치커리이뉼린군의 혈당이 당뇨대조군에 비하여 유의하게 낮았다. Fructan은 혈장 인슐린 농도에는 영향을 미치지 않았다. 소장점막의 maltase와 sucrase활성은 당뇨군들이 정상군에 비하여 유의적으로 높았으나, 당뇨군 중에서 치커리이뉼린군이 가장 낮은 경향을 보였다. 신장 maltase 활성은 정상군과 당뇨군이 유사한 수준이었으나, 신장 sucrase와 lactase 활성은 정상군에 비하여 당뇨군에서 유의하게 높은 수준을 보였으며, 치커리이뉼린군이 당뇨대조군에 비하여 유의하게 낮은 수준을 보였다. LPS에 의한 비장세포증식에서는 당뇨대조군에 비하여 치커리이뉼린올리고당군이 유의 적으로 증가하여 정상군과 비슷한 수준을 보였다. ConA에의한 비장세포증식은 군간 유의적인 차이를 보이지 않았으나 LPS에 의한 증식 결과와 비슷한 경향을 보였다. 비장세포로부터의 IL-2의 분비는 당뇨군들이 정상군에 비하여 낮았으나, 당뇨군간에는 유의한 차이가 없었다. 결론적으로 당뇨 생쥐에서 프럭토올리고당, 치커리이뉼린올리고당, 치커리이뉼린을 비교한 결과, 혈당 강하에 미치는 효과가 치커리이뉼린에서 유의하게 나타났으며, 비장세포 증식능은 정상군에 비하여 당뇨군에서 감소하는 경향을 보였으나, 치커리이뉼린올리고당 섭취군이 당뇨대조군에 비해 비장세포 증식능이 유의하게 증가하여 면역능이 개선되는 효과를 보였다.
본 연구는 인삼중 지용성 성분이 인체암 세포의 증식억제와 암세포내 효소 활성에 미치는 영향을 구명하고자 실시하였다. 인체 장암 세포인 HRT-18, HCT-48 및 HT-29등을 대상으로 인삼추출물 처리시 각 암세포의 증식율과 암세포내 효소 즉, sucrase, lactase, maltase 및 trehalase등 disaccharidas 활성을 측정한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. HTR-18, HT-29 및 HCT-48의 doubling time은 각각 약 20, 22, 24시간이 및 되었다. 2. 각 암세포의 증식율은 배양액 중 CX 함량의 증가와 연장에 따라 점차 더 억제되었다. 3. 인삼 extract를 함유하는 배양액에서 배양된 HRT-18 및 HCT-48 암세포의 sucarse활성은 각각 362% 및 577% 증가하였고, lactase(317%, 334%), maltase(134% 및 153%) 및 trehalase(311% 및 203%) 활성도 다 같이 유의성있게 증가하였다.
함초(Salicornia herbacea)는 염습 지대에서 자생하는 명아주과에 속하는 일년초 식물로서 우리말로는 퉁퉁마디라고 불리우며, 식용과 약용으로 이용되고 있다. 건조된 함초로부터 열수 추출을 하여 조추출물(CSP)을 얻었으며, 조추출물을 한외 여과 및 gel 여과를 통해 다당체I(SP I)과 다당체 II(SP II)를 얻었다. 이렇게 얻은 함초 추출물들은 마우스 면역 조절 활성을 확인하는데 사용되었고, 실험은 시험관 내 실험과 생체 내 실험으로 나누어 진행되었다. 시험관 내 실험에서는 $7{\sim}8$주 된 Balb/c 마우스로부터 비장 세포와 T 세포를 분리하여 시료를 농도별(0.5, 1, 2, 4 mg/mL)로 처리한 후 일정 시간 배양하여 MTS assay를 통해 세포 증식능을 확인한 결과, 비장 세포와 T 세포에서 각각 4 mg/mL 농도로 24시간 배양한 경우 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 SP I이 3.2, 3.5배로 유의적인 세포 증식 활성을 나타내었다. 생체 내 실험에서는 $7{\sim}8$주 된 Balb/c마우스를 대조군과 투여군으로 나누어 7일 동안 경구 투여를 실시하였는데, 실험 종료 후 비장 세포를 적출하여 mitogen을 이용한 세포 증식능을 확인한 결과, SP I을 경구 투석한 비장 세포가 가장 높은 세포 증식능을 보였다. 즉, 함초로부터 조추출물과 다당체를 획득하여 이들에 대한 면역 활성능을 확인한 결과, 조추출물과 다당체에서 면역 세포 활성 증강 효과를 보였는데, 조추출물보다 다당체에서 더 높은 활성을 보였다. 따라서 함초 다당체는 면역 증강 활성을 가진 바이오 헬스 소재로 개발될 수 있을 것으로 기대된다.
대황(Eisenia bicyclis)은 온대 태평양에 서식하며 우리나라에서는 울릉도 일대에서 주로 발견 되는 갈조류이다. 대황은 칼슘 함량이 가장 높고 요오드, 철, 마그네슘뿐만 아니라 많은 미네랄과 비타민을 포함하고 있다. 본 연구에서는 대황 추출물을 이용하여 세포 수준에서 대황의 골 형성에 미치는 영향을 검토하였다. MTT 분석법에 의한 조골세포 증식률에서는 대황 에탄올 추출물 10 ${\mu}g/ml$ 처리하였을 때 128%의 높은 활성을 나타내었다. 반면 열수추출물 첨가군에서는 에탄올 추출물에 비해 유의적으로 낮은 활성을 나타내었고, 첨가 농도가 증가할수록 감소되는 결과를 보였다. 대황 추출물의 농도에 따른 석회화 형성에 미치는 영향을 검토한 결과, 대황의 에탄올 추출물 1~100 ${\mu}g/ml$의 범위에서 시료를 처리 하지 않은 대조군에 비해 높은 골석회화 형성능을 나타내었다. 또한, 적색의 석회화 형성 부위를 현미경을 통해 관찰한 결과, 대황의 에탄올 추출물을 처리 하였을 때, 시료를 처리하지 않은 대조군 보다 붉은 색의 반점이 많이 형성된 것을 확인할 수 있었다. 한편, ALP 활성에서는 에탄올 추출물 50 ${\mu}g/ml$에서 179% 활성을 나타내었다. 파골세포인 RAW 264.7 세포를 이용하여 세포 증식률을 측정한 결과, 대황 열수추출물의 경우 1~200 ${\mu}g/ml$의 모든 농도에서 대조군과 비교하여 유의적으로 감소하여 파골세포의 증식억제 효과가 나타났다. 파골세포의 분화형태를 측정하고자 TRAP 효소 활성을 측정한 결과, 열수 및 에탄올 추출물의 10 ${\mu}g/ml$이상의 농도에서 대조군에 비해 감소하는 경향을 나타내었다. 대황 추출물의 첨가 농도가 증가함에 따라 파골세포의 증식이 감소된 결과와 마찬가지로 파골세포의 분화 지표인자인 TRAP활성 역시 농도가 증가함에 따라 감소함을 알 수 있었다. 이상의 결과, 대황 추출물이 조골세포의 증식, 분화유도와 석회화능을 촉진하고 파골세포의 증식 및 분화를 억제시킨다는 것을 알 수 있었다. 향후 대황 추출물 중의 활성성분들의 규명과 in vivo 연구가 병행된다면 조골세포의 증식과 파골세포의 억제에 관여할 수 있는 기능성 식품의 천연소재로 개발이 가능하리라 사료된다.
일반적으로 규조류는 무독한 적조생물로 알려져 있으나, Chaetoceros spp.의 특정한 종은 적조를 형성할 경우 수산생물에 직$\cdot$간접적인 영향을 미치기도 한다. 본 연구는 해양 세균을 이용하여 규조류 Chaetoceros spp. 적조의 방제기술 개발을 위한 목적의 일환으로 우리나라 연안에서 Chsetoceros calcitrans증식 저해균을 검색 분리하였으며 분리균의 세균학적 특성과 각종 규조류의 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 1. C. calcitrans에 대해서 증식 저해활성이 간한 균을 검색$\cdot$분리한 결과 Alteromonas sp.로 동정되었으며, 이 균을 Alteromonas sp. SR-14로 명명하였다 2. Alteromonas sp. SR-14는 생해수, 숙성해수, 무기염 배지 및 미세조류 C. calcitrans 배양석액에서 증식할 수 있었다. 3. Alteromonas sp. SR-14는 C. calcitrans, C. muclleri 및 C. negracile 등에 대해서만 증식 저해활성이 있었다. 4. Alteromonas sp. SR-14에 의한 C. calcitrans의 사멸과정은 대부분의 경우 외형을 그대로 유지하면서 세포 내용물만 서서히 소실되었고, 부분적으로는 protoplast도 출현하였다가 용해되는 경우도 있었다.
섬애약쑥, 인진쑥, 약쑥, 강화사자발쑥 및 개똥쑥 열수 추출물을 제조한 다음 항산화 및 항암활성을 비교 분석하였다. 5종의 쑥 추출물 중 총 페놀 함량은 인진쑥에서 유의적으로 가장 높았으며, 다음으로 섬애약쑥, 개똥쑥, 약쑥 및 강화사자발쑥 순이었다. 플라보노이드 함량도 인진쑥이 가장 높았고, 섬애약쑥은 인진쑥과 유의차가 없었다. 추출물의 농도를 달리하여 항산화능을 측정한 결과, DPPH 라디칼 소거능은 50 ${\mu}g/ml$ 농도에서 섬애약쑥의 활성이 가장 높았고, NO 라디칼 소거능은 200 ${\mu}g/ml$ 농도에서 약쑥, 강화사자발쑥 및 개똥쑥이 약 50% 이상의 활성을 나타내었으며, 이들 시료간에 유의차는 없었다. FRAP법에 의한 항산화능은 섬애약쑥 및 인진쑥에서 높게 나타났으며, ${\beta}$-carotene 존재 하에서의 항산화능 또한 섬애약쑥 및 인진쑥이 100 ${\mu}g/ml$ 농도에서 50% 이상의 높은 활성을 나타내었다. 400 ${\mu}g/ml$ 농도에서 인체 자궁경부 상피암 세포인 HeLa의 증식억제 활성은 인진쑥이 80% 이상으로 활성이 높았고, 유방암 세포인 MCF-7의 대해서는 강화사자발쑥과 섬애약쑥이 80% 이상의 증식억제 활성을 보였다. 이상의 결과, 쑥 추출물은 높은 항산화 활성과 암세포 증식억제 활성을 나타내었으며, 특히 항산화 활성은 ascorbic acid 이상의 높은 활성을 나타내어 천연 기능성 식품 소재로써 활용 가치가 높을 것으로 생각된다.
본 연구에서는 감태나무 추출물의 항산화 활성을 측정하기 위하여 총 폴리페놀 함량, DPPH 라디칼 소거능, 아질산염 소거능, 환원력 방법을 사용하였으며 HT-29와 HCT116 암세포를 이용하여 세포 증식 억제 효과를 측정하였다. 그 결과 본 연구에서 사용된 식물 중 감태나무 뿌리와 감태나무 줄기가 가장 높은 총 폴리페놀 함량을 보였으며 또한 DPPH 라디칼 소거능, 아질산염 소거 활성, 환원력도 가장 높게 나타났다. 암세포 증식 억제 효능평가에서도 감태나무 줄기와 뿌리는 대장암세포 HT-29, HCT116 세포주의 증식 억제에 대한 높은 활성을 나타냈다. 이러한 연구 결과는 감태나무의 기능성 소재로써의 기초적 데이터베이스로 활용할 수 있을 것으로 생각되며, 앞으로 더욱 더 감태나무의 질병에 대한 효능 및 기전연구가 지속되어야 할 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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