효소는 생물이 만드는 단백질로서 화학반응을 촉진시키는 촉매이다. 현재까지 알려진 효소의 종류는 약 3,000종이 되며 그 숫자는 해마다 증가하는 경향을 보이고 있다. 이 가운데 산업적 응용 가능효소는 150여종이며 상업적으로 생산되고 있는 효소는 60여종이 된다. 효소의 산업적인 이용은 1894년 소화제인 takaamylase가 Aspergillus oryzae의 배양에 의하여 생산된 이래 $\alpha$-amylase와 동물에서 pancreatin, trypsin, chymotrypsin, 사람의 소변에서 urokinase와 식물체에서 protease등이 공업적으로 생산되고 있다. 효소는 화학촉매보다 많은 장점을 가지고 있는데 온건한 반응조건에서 촉매력과 기질특이성(specificity)이 높고 부산물(by-product)이 적다. 그러나 효소의 폭넓은 산업적인 이용은 아직 많이 제한되어 있는데 대체적으로 열, 화학물질, protease, 반응환경등에 의해 쉽게 불활성화되기 때문이다. 이러한 한계를 극복하기 위해 많은 노력을 기울여 왔고 산업적인 필요성에 부응하여 1993년말 이래 미국, New Zealand, Ireland 등지에서 별도의 학술적인 모임이 열렸다. 본 고에서는 현재 식품산업에서 사용되고 있는 효소와 그의 특성, 효소 개발기술 및 국내외 효소시장 현황을 중심으로 개술하고자 한다.
최근들어 미생물 이용에 관한 연구가 활잘해지면서 많은 진보가 있었다. 미생물반응을 촉매하는 효소는 각종 공업생산물, 식품공업및 의료에 응용되고 있는데 특히 특이성이 높기 때문에 특수성분의 생산, 계측및 성분의 분석수단에 다방면으로 이용되고 있다. 그러나 이용분야가 넓고 다양한 점에 비하여 현재까지 공업적으로 사용되고 있는 효소의 종류는 그리 많지 않다. 더구나 미생물이 생산하는 효소는 생산성및 안정성 때문에 이용이 제한되어 있으며 현재에는 20여종에 불과하다. 지금까지 산업적으로 이용되지 않고 있는 효소는 1) 효소를 생산하는 미생물의 안정성 문제 2) 미생물효소의 생산성이 낮거나 3) 효소의 특성이 구명되지 않아 용도의 개발이 늦어지고 있기 때문이다. 따라서 유전자 조작을 통한 생산성및 안정성 문제의 해겨, Bioreactor 기술 개발로 생산성의 증대등으로 효소의 산업적 응용을 가능하게 하리라 본다. 한편으로는 효소를 분리하여 여러가지 특성을 구명한다면 새로운 효소를 발견하고 또한 새로운 용도를 개발할 수 있을 것이다.
최근 유전공학의 발달로 리소좀 축적 질환에서 효소 치료제가 개발되어 실제 치료에 사용되고 있다. 현재 효소 보충 치료가 가능한 리소좀 축적 질환에는 고셔병(Gaucher disease), 파브리병(Fabry disease), 폼페병(Pompe disease), 뮤코다당체침착병(Mucopolysaccharidosis, MPS) 1형, 2형, 6형이 있으며 비교적 안전하면서 증상 완화에도 효과적으로 보인다. 그러나 이미 진행이 된 증상에 대해서는 비가역적이므로 조기에 진단을 하여 치료를 시작하는 것이 중요하다. 효소 보충 치료의 장기간에 걸친 치료 효과에 대해서 지속적인 평가가 필요하며 무엇보다 뼈와 중추신경계에 대한 효과는 제한적이므로 이에 대한 새로운 치료법의 개발이 필요하다.
차나무의 분자학적 유연관계 및 유전적 다양성을 알아보기 위하여 한국에서 자생하는 차나무 집단 21개 지역 차나무에 대하여 DFR 유전자 부위를 이용하여 PCR-RFLP분석을 하였다. DFR 4+5 primer 쌍을 이용하여 증폭결과 DFR유전자의 크기는 약 1.4kb에서 PCR산물을 획득하였다. PCR산물에 제한효소 Hpa II 및 Mse I를 이용하여 RFLP분석 결과 차나무 집단간 또는 집단내 차나무간의 유전적 다양성을 보였다. Hpa II 제한효소를 이용한 RFLP 밴드패턴은 3가지 형태로 구분되었으며, 같은 차나무 집단내에서도 유전적 다양성이 나타났다. Mse I 제한효소를 이용한 밴드패턴은 6가지의 형태로 다양성을 보였으며, 웅포집단 차나무의 경우 집단 내 다양성이 2가지 형태로 나타나 같은 집단내에서의 유전적 변이는 적은 것으로 보인다. 본 연구에서 사용한 2가지의 제한효소의 결과 차나무의 집단간 또는 같은 집단내의 차나무간에서 유전적 다양성을 확인할 수 있었다.
한우의 mt DNA cytochrome oxidase subunit I, II, 및 III complex지역의 유전적 다형현상을 제한효소를 이용하여 검출하였다. PCR primer 6종에 대하여 20가지 제한효소를 처리하였으며, Pst I, Pvu II, Rsa I, Eco RI, Bgl II, and Msp I 제한효소를 사용하여 유전적 변이를 검출하였다. 검출된 변이체와 한우의 성장과의 관련성을 조사한 결과 cytochrome oxidase subunit III complex 지역의 유전염기서열을 근거로 제작한 primer Mt9 좌위에서 제한효소 PvuII를 이용한 절단형과 체중형질 인 WT15(P<0.05) 및 WT18(P<0.01)에서 고도의 유의성이 관찰되었다. 아울러 , Mt9-Pvu II(P=0.07), Mt6-Bgl II(P=0.05), and Mt8-Rsa I(P=0.05) 좌위 또한 WT9, WTl5, and WT15에서 각각 통계적 유의성이 관찰되었다. 따라서 본 결과는 cytochrome oxidase subunit III complex segments가 candidate gene으로서 기초적 유전정 보 제공은 물론 유전적 개량을 위해 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
Pseudomonas의 분해계 플라스미드와 이들에 유용한 벡터를 개발하기 위해서 본 연구실에서 분리, 보존하고 있는 Pseudomonas 중에서 P.putita KU 190으로부터 하나의 플라스미드를 분리하여 그 특성을 해석코저 하였다. size marker로 RP4와 pSy343를 사용하여 플라스미드의 크기를 결정한 바 41Kb로 나타났으며, 이 플라스미드를 pKU 41라 명명하였다. 제한효소 Bglll, BamHl, Eco Rl, HindIII, Sall등으로 이 플라스미드를 소화하여 이들의 제한효소 pattern을 조사한 결과, Bg III가 1. BamHl 3, Hin dIll는 3, EcoRI은 6 그리고 SalI은 13개 이상의 절단부위를 가지고 있었다. 이 제한효소의 절단부위, 토막들의 크기로부터 BamHI, HindIII에 대한 지도를 작성하였다. 플라스미드의 생울학적 기능을 조사하기 위하여 탄화수소 자화능에 대한 큐어링 실험을 하였으나 이로부터 뚜렷한 관련성 여부를 관찰할 수 없었다.
2017년 추계에 남해 전선역을 파악하고, 알칼리 인산분해 효소(Alkaline Phosphatase; APase) 활성을 이용하여 제한 영양염과 제한 영양염의 시간적인 변화를 평가하였다. 전선역이 형성된 인근해역의 경우, 용존무기인(dissolved inorganic phosphorus; DIP)의 농도와 용존무기질소(dissolved inorganic nitrogen; DIN): DIP 비가 각각 $0.2{\mu}M$ 이하와 최대 23.2로, DIP가 제한된 환경임에도 불구하고 Chlorophyll a(Chl.-a)가 $0.2{\mu}g/L$로 높은 생물생산력을 보였다. APase와 DIP는 중요한 역의 상관관계(r = -0.81; P<0.001)를 보여, DIP가 제한되어진 해역임을 알 수 있었으며, APase와 Chl-a 관계는 APase의 60 %가 식물플랑크톤, 40 %가 박테리아 기원인 것으로 평가되었다. 용존태 APase와 입자태 APase의 분포로부터 전선역은 장기간 DIP가 제한된 해역이며, 그 외의 해역은 최근에 DIP 제한이 해소된 것으로 판단되었다. 따라서 전선역에서 APase와 같이 가수분해효소의 측정은 제한 영양염의 시공간적인 변화 특성을 평가할 수 있으며, 전선역에서 생지화학 순환의 이해를 높일 수 있을 것으로 생각된다.
정신분열병의 약물치료에서 중요한 역할을 하는 도파민의 기전은 지금까지 5종류의 수용체들이 발견되고 클론되면서, 새롭고 보다 근본적인 유전학적 접근을 통해 규명될 수 있게 되었다. 특히, 도파민 수용체 D4 (DRD4)는 막단백질의 세포질쪽 세번째굴곡에 48-bp반복 다형성배열을 가지고있다. 이러한 다형성 반복배열이 신호전달에 참여할 가능성이 높은 막단백질의 세포질쪽 굴곡에 있다는것은, 각 개인의 항정신병약물에 대한 민감성의 차이를 포함하여 정신분열병에 대한 개개인의 유전적 차이를 진단할 수 있는 가능성을 제시한다. 이러한 가능성을 검증하기 위하여 주로 손쉽고 빠른 중합효소연쇄반응(PCR)을 사용하여 DRD4의 아형들을 분류하게 되는데, DRD4의 PCR은 그 반복배열과 그 주변배열의 높은 GC함량(78% G+C) 때문에 일반적인 PCR 방법을 변형시켜 사용해야한다. DRD4의 아형을 분류하기 위해 변형된 PCR은 통상적으로 7-deaza dGTP와 10% DMSO를 사용하게된다. 이러한 DRD4 PCR은 대부분의 경우 성공하지만, 항상 모든 시료에서 PCR이 성공되는것은 아니었으며 반복적으로 시도하여 증폭시킬 수 있었다. 이러한 어려움은 대부분이 template DNA에 문제가 있을것으로 의심되며 DNA정제 또는 template DNA를 제한효소로 적절하게 무작위절단하여 성공율을 높일 수 있었다.
황해서식 참조기(Pseudosciaena polyactis)에 대한 계군을 분석하기 위한 연구의 일환으로 우선 황해의 목포 연근해에서 채집된 참조기의 난자와 근육으로부터 mt-DNA와 근육 actin을 추출하였다. 난자의 경우 mt-DNA를 추출한 뒤 제한효소로 처리하여 절편다형현상을 관찰하였으며 근육 actin의 경우 단백질 분해효소(Staphylococcus aureus $V_8$ protease)로 처리하여 N-terminal 절편의 다형현상을 각각 관찰하였다. Mt-DNA의 genome 크기는 약 $\16\pm0.2$ Kb였고 전체 절편수는 37개였으며 사용된 20개의 제한효소 중 8개의 제한효소만이 3개 정도의 절편을 보이므로써 유의성을 관찰할 수 있었다 한편 근육 actin을 Staphylococcus aureus $V_8$단백질 분해효소로 처리하였을 때 N-terminal 부위에서 26 KDa 및 16 KDa의 분자량을 갖는 특이절편을 관찰할 수 있었다.
Thiostrepton 내성 유전자(tsr)를 포함하는 multi-copy 재조합 플라스미드 pJY7J2의 제한효소 절단지도를 작성하였다. pJY, 712는 Streptomyces에서 넓은 host range를 나타내었으며 cloning 목적에 사용할 수 있는 단일 BgtIl 제한효소 인식부위를 갖고 있었다. 플라스미드 pJY 712는 lethal zygosis(Ltz+) 현상을 보였다. pJY 712의 혁질전환빈도는 S. lividans에서 $5.0\times 10^{4}$ TFU였다. pJY 712의 Bell 제한효소 인식부위에 tyrosmase 유전자(mel)를 삽입하여 플라스미드 PJY713을 제조하였다. met 유전자를 포함한 재조합 플라스미드 pJY 714는 pJY 713의 일부분(1.9kb BgllI-BelI 단편)을 제거하여 제고하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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