• Applied Biological Chemistry
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• 제40권6호
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• pp.495-500
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• 1997

Cyclodextrin을 합성하는 효소 CGTase를 호염기성 Bacillus sp. E1으로부터 분리하기 위하여 PCR을 실시하였다. PCR을 위하여 합성한 primer의 염기서열은 현재까지 보고된 CGTase 유전자의 염기서열을 비교 분석하여 가장 높게 보존된 영역을 찾아내어 선택하였다. PCR 증폭 결과 1.2 kbp 크기의 DNA 절편을 얻을 수 있었고 이를 molecular probe로 이용하여 Southern blot 분석을 실시하였다. Southern blot 분석결과 CGTase 유전자는 염색체 DNA를 제한효소 XbaI으로 절단한 5.3 kbp 절편내에 존재한다는 사실을 알아내었다. CGTase 유전자를 분리하기 위하여 유전자 은행을 제조한 후 선별작업을 실시하여 genomic clone인 pCGTE1을 얻을 수 있었다. pCGTEl의 염기서열을 결정한 결과 분리한 CGTase 유전자는 2109 bp의 open reading frame을 가지며 이는 703개의 아미노산으로 구성된 단백질을 coding하는 것으로 나타났다. 아미노산 서열의 유사성을 비교한 결과 Bacillus sp. KC201의 CGTase 와 가장 높은 94.3% 동질성을 나타내었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제46권1호
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• pp.169-173
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• 2007

경북 안동에서 재배하는 둥근마(Dioscorea bulbifera)에서 뿌리혹선충 피해가 발견되었다. 피해 괴경에서 다수의 암컷 선충을 분리하였고, 이들의 cytochrome oxidase subunit II (COII) DNA 서열을 분석하였다. 둥근마의 뿌리혹 형성을 유도하는 식물 선충의 COII 유전자위 크기와 염기서열은 Meloidogyne javanica 또는 M. incognita의 해당 영역과 높은 유사도를 보였다. 그러나 이들 두 종을 구분하는데 이용되는 제한효소(HinfI)위치에 있어서 본 둥근마로부터 분리된 뿌리혹선충은 이들 두 종과 뚜렷한 차이를 보였다.

• 미생물학회지
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• 제40권2호
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• pp.172-177
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• 2004

광합성 박테리아 Rhodospirillum rubrum은 광원의 조건에 따라 균주 내의 신진대사 양상이 변화된다고 보고 되어 왔다. 이러한 광조건에 의한 신진대사 변환 과정을 담당하는 유전자에 대한 연구는 광합성 박테리아에 관한 주된 과제 중 하나이다. 근래 이러한 광조건에 의한 균주내 변화 과정이 균주가 지니는 extrachromosomal plasmid와 관련이 있음이 보고되었다. 본 연구는 광합성 박테리아 R. rubrum의 extrachromosomal plamid pKYl 을 분리 정제하고 이를 제한효소 HindIII로 단편화 하여 이들 단편의 일부에 대한 염기서열을 분석하고 이들의 기능을 추론하였다. 본 연구를 통하여 plasmid pKY1에 박테리아의 유전적 재조합 (genetic recombination)에 관여하는 단백질에 대한 정보가 위치하고 있음을 유전자 및 아미노산 상동성 조사를 통하여 알 수 있었다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1273-1278
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• 1998

Biotin의 분석에 사용되는 기존의 미생물 분석법보다 신속하고 간편한 효소-단백질결합 분석법(enzyme protein binding assay; EPBA)을 개발하였다. Biotin-KLH conjugate와 streptavidin을 이용한 EPBA에서, biotin의 활성을 갖는 biocytin에 대하여 각각 109% $(IC_{50}=0.3\;ppb)$와 197% $(IC_{50}=0.8\;ppb)$의 교차반응을 보였으나 desthiobiotin과 diaminobiotin 그리고 2-iminobiotin에서는 교차반응을 보이지 않았다. Streptavidin과 biotin-KLH conjugate를 이용한 EPBA에서 검출범위는 각각 $0.01{\sim}30\;ng/mL$과 $0.01{\sim}1.0\;ng/mL(ppb)$로 나타났다. 우유시료와 과일 플레이크 그리고 당근-파인애플 쥬스에 대한 spike test에서 EPBA(biotin-KLH conjugate)와 미생물 분석법(microbiological assay; MBA)간의 상관관계는 r=0.994로 매우 높은 것으로 나타났다. 그러나 MBA는 biocytin과 desthiobiotin에 대하여 각각 80.1%, 66.7%의 교차반응을 나타냈다. 검출범위도 $0.1{\sim}0.5\;ng/mL(ppb)$로 분석 범위가 매우 제한되어 있었다. 그러므로 EPBA에 의하여 biotin을 분석하는 것이 기존의 미생물 분석법에 비하여 검출 감도나 검출 범위, 교차반응 그리고 분석시간 등의 여러 가지 면에서 우수한 것으로 확인되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권2호
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• pp.111-118
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• 1997

Theileria sergeni의 진단방법으로 Giemsa 염색에 의한 광학현미경적 관찰이 가장 통상 적으로 이용되고 있으나 감염이 아주 적거나 내과성인 경우 검출하기가 매우 곤란하다. 이에 PCR 진단을 위한 대강유전자로서 p33의 염기서열을 이용하여 4개의 oligonucleotide primers. TS1, TS2 ,TS3,, TS4를 작성하였다. 작성된 primer의 각 조합에 따라 PCR한 결과 TS1과 TS4 조합에서는 499 bps, TS1과 TS3 조합에서는 381 bps, TS2와 TS4 조합에서는 365 bps, TS2 와 TS3 조합에서는 247 bps 크기의 산물을 획득하였다 이 PCR산물은 p33 유전자 염기서열 분석을 통한 제한효소처리 및 Southern blot hybridization 방법을 통하여 그 특이성을 확인하였다. Primer의 특이성을 조사한 결과 미감염 백혈구 및 다른 주혈기생충인 Babesic ouota, Anaplosmn marginate에 대해서는 교차 반응을 나타내지 않았다. 또한 야외시료에 PCR 기법을 적용한 결과 Giemsa 염색에 의한 광학현미경적 관찰에서는 64.8%의 양성률을 보인 반면, PCR 진단에서는 본 실험에서 작성된 TS1과 TS4, TS2와 TS3 조합이 공희 88.7%의 양성률을 나타내었다.

• 생명과학회지
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• 제18권6호
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• pp.770-775
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• 2008

돼지 2번 염색체의 육질 관련 양적 경제형질에 관한 연구보고가 몇몇 이루어 지고 있다. 양돈업계에서 DNA 기술을 이용한 염색체 정보를 활용하기 위해 본 연구에서는 13개의 후보 유전자에서 생성된 중합효소연쇄반응(PCR) 생성물을 비교 재서열 함으로써 단일염기변이(SNP) 표지들을 개발했다. 11개의 중합효소연쇄반응 생성물에서 296 bp마다 에서 평균 하나의 SNP, 총 34개의 SNP를 발견하였다. 또한 11개의 SNP에 대한 PCR 제한효소길이 절편길이 다형성(RFLP) 분석을 전개한 후, 이를 대한민국 상업돈 4품종 개체군의 유전자형을 분석하는데 활용하였다. 본 연구는 유용한 단일염기변이를 식별하고 돼지 개체군 내 경제적으로 중요한 특성들과 SNP의 연관성을 확인하는 데 그 목적이 있다.

• 대한치과교정학회지
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• 제32권2호통권91호
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• pp.129-142
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• 2002

사회적, 경제적 여건의 향상으로 성인들의 교정치료에 대한 관심이 커지고 있지만 폐경기 여성에 있어서 골다공증의 증가는 교정치료에 제한이 되며, 골다공증과 카페인과의 관련 여부는 최근까지 논란이 되고 있다. 따라서 본 연구의 목적은 생후 1일된 마우스의 골모세포를 in Vitro상에서 카페인과 칼슘 및 이 둘을 혼합 처리하여 골모세포의 활성에 미치는 영향에 대해 알아보고자 하였다. 실험에 사용한 골모세포는 마우스의 두개관에서 얻었으며, 카페인 단독 처리, 칼슘 단독 처리, 카페인과 칼슘의 혼합처리를 시행하였다. 카페인 처리를 한 경우 1일, 2일, 4일째 세포 독성 정도를 570 nm ELISA로 분석을 시행하였고, 카페인, 칼슘 및 혼합 처리시 배양 후 28일째 Von Kossa staining 후 영상분석기에 의해 광화된 골결절의 밀도를 측정하였으며, 염기성 인산분해효소 활성도 변화를 배양 후 2일, 7일, 14일, 21일, 28일째 405 nm spectrophotometer로 측정하였고, IL-1 ${\beta}$의 활성도를 48시간 후 492 nm ELISA로 분석을 시행하였다. 얻어진 수치들은 ANOVA test로 통계 분석하였다. 1. 카페인에 대한 세포 독성은 카페인의 농도가 1.0 mM, 2.0 mM로 증가함에 따라, 2일, 4일로 배양 기간이 길어짐에 따라 유의하게 증가하였고, 세포수는 감소하였다. 2. 광화된 골결절의 밀도는 카페인을 단독 처리한 경 우 0.2 mM에서, 칼슘 단독 처리시에는 1.2 mM에서, 혼합 처리한 경우 0.1 mM 카페인과 1.8 mM 칼슘에서 가장 크게 나타났다. 3. 염기성 인산분해효소 활성도는 비처리시 칼슘과 같이 14일째 최대값을 보이는 반면, 카페인을 단독 처리한 경우 농도가 증가함에 따라 활성도가 증가하였다. 카페인과 칼슘 혼합 처리시에는 칼슘 농도가 1.2 mM, 1.8 mM인 경우 배양 14일에 염기성 인산분해효소의 활성도가 유의하게 증가하였으나, 2.5 mM인 경우 활성도가 감소하였다. 4. II-1 ${\beta}$의 활성도는 카페인을 단독 처리한 경우 0.2 mM, 1.0 mM에서, 칼슘 단독 처리시에는 1.8 mM에서, 혼합 처리시 0.1 mM 카페인과 1.8 mM 칼슘 혼합 처리한 경우 높게 나타났고, 고농도의 카페인, 칼슘 혼합 처리 시에는 낮게 나타났다 이러한 실험 결과를 통하여 칼슘이 1.2 mM, 1.8 mM 농도로 존재하는 경우 카페인에 의한 골모세포의 염기성 인산분해효소 활성과 IL-1 ${\beta}$의 활성 억제 효과가 어느 정도 회복되나, 2.5 mM 고농도의 칼슘은 억제된 활성을 회복시키지 못함을 확인하였다.

• 식물병연구
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• 제23권3호
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• pp.241-248
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• 2017

강원도 고랭지배추 포장에서 검출된 사탕무씨스트선충(H. schachtii)과 콩씨스트선충(H. glycines)을 구별할 수 있는 신속진단법을 개발하고자 하였다. 이를 위해 mtDNA COI 유전자 영역의 계통분석으로 동정된 사탕무씨스트선충 GC147, GC408, PM001 개체군과 콩씨스트선충 YS224, DA142, BC115 개체군을 대상으로 PCR-RFLP와 본 연구에서 개발한 특이 프라이머 세트를 이용한 PCR을 수행하였다. 사탕무씨스트선충과 콩씨스트선충 각각 3개 개체군의 mtDNA COI 영역 PCR 증폭산물에 8종류의 제한효소를 처리하여 DNA 절편길이다형성을 확인하였으며, 2종류의 제한효소 RsaI과 HinfI을 처리하면 DNA 밴드 양상의 차이로 사탕무씨스트선충과 콩씨스트선충 두 종을 구별할 수 있었다. 또한, 본 연구에서 개발한 프라이머 세트(JBS1, JBG1과 JB3R)는 사탕무씨스트선충 mtDNA COI 영역의 277과 339 bp, 콩씨스트선충의 339 bp의 특정 DNA 단편을 증폭시켰으며, 뿌리혹선충 3종과 뿌리썩이선충 2종의 식물기생선충은 증폭시키지 않았다. 따라서, 본 연구에서 개발한 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하면 사탕무씨스트선충과 콩씨스트선충을 구별할 수 있었다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제44권3호
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• pp.279-288
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• 2002

본 연구는 국내 홀스타인 젖소 보증종모우 16두와 후보종모우 93두를 이용하여 선천성 장애 유전자의 검색을 통하여 불량 유전자의 존재 유무를 판별함과 동시에 가축의 선발 및 육종, 개량시 기초자료로 제공하고자 하는데 그 목적이 있으며, 본 연구의 결과를 요약하면 아래와 같다. 공시재료(홀스타인 젖소 보증종모우 16두, 후보 종모우 93두) 109두에 대하여 DUMPS (deficiency of uridine monophophate synthase)의 검색결과 모든 개체에서 DUMPS 유전자를 보유하는 개체는 없는 것으로 판명되었다. 또한 PCR-RFLP(Ava I) 방법에 의해 조기 검색이 가능하게 되었다. 한편, BLAD(bovine leukocyte adhesion deficiency) 검색결과, 보증종모우 16두에서는 검출되지 않았으나, 후보우 93두중 5두에서 BLAD 잠재성 보유개체(carrier)로 판명되었고, 혈통확인을 통하여 BLAD 유전자의 전이 경로를 추정할 수 있었으며, PCR 증폭산물에 대한 제한효소 처리시 HaeⅢ 보다는 TaqⅠ 제한효소를 사용하였을 때 더 효율적으로 판명할 수 있는 것으로 나타났다. Citrullinemia 검색결과 보증종모우 16두 및 후보종모우 93두 모두에서 잠재성 보유개체는 없는 것으로 판명되었으나 citrullinemia에 대한 폭넓고 다양한 조사 및 분석이 이루어져야 할 것으로 사료된다. 본 연구의 결과로 미루어 볼 때 가축의 유전성 질환에 대한 다양하고 폭넓은 연구가 이루어 져야 할 것으로 사료되며, 가축의 선발과 육종, 개량에 있어서 지속적이며 혈통의 철저한 관리를 통한 개량의 방향을 설정하여야 할 것으로 판명되었다.

• Journal of Gastric Cancer
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• 제8권3호
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• pp.113-119
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• 2008

목적: TFF1 유전자의 -2bp에 위치하고 있는 단일염기다형성의 유전자형 및 대립형질 빈도와 H. pylori 감염 및 위암발생 민감성과의 연관성을 조사하고자 하였다. 대상 및 방법: 2000년 1월부터 2003년 12월까지 위 샘암종으로 근치적 수술을 시행 받은 167명과 정상 건강인 299명의 DNA를 이용하였다. TFF1 유전자의 단일염기다형성의 유전자형은 중합효소연쇄반응 후 제한효소를 이용한 제한 분절길이다형성과 single strand conformation polymorphism의 방법으로 분석하였다. 또한, H. pylori 감염은 Giemsa 염색으로 조사하였다. 결과: 정상 건강인의 TFF1 단일염기다형성에 대한 유전자형 및 대립형질의 빈도를 위암 환자군과 비교한 결과 통계적으로 의의가 없었다(P=0.715 & P=0.595). 위암 환자군을 성별로 나누어 정상 건강인과 비교한 경우에도 통계적 의의를 발견할 수 없었다. 또한, 위암 조직의 조직학적 소견 및 환자 연령과 TFF1 단일염기다형성의 유전자형 및 대립형질 빈도를 조사한 결과, 위암 조직의 조직학적 소견 및 연령은 TFF1 유전자 단일염기다형성과 무관하였다(P=0.088 & P=0.551). 한편, H. pylori 감염은 모두 39예에서 관찰되었는데 TFF1 유전자형과는 통계적으로 연관성이 없었다(P=0.7200). 결론: TFF1 유전자의 -2bp에 존재하는 단일염기다형성은 TFF1 단백의 합성에 큰 영향이 없으며 H. pylori 감염과 위암의 발생과는 무관하다는 것을 의미한다.