본 연구는 수용액 상태에서 정제봉독 (purified bee venom, PBV)과 봉독멜리틴 (bee venom melittin, BVM)을 보관하기 위하여 온도, 용매, 농도의 조건에 따른 안정성을 비교 실험한 결과이다. Prep-HPLC (column: C4)를 이용하여 정제봉독으로부터 98.2%인 봉독멜리틴을 분리하여 사용하였다. 용매에 따른 안정성 실험에서, 생리식염수의 경우 정제봉독은 안정성이 증가되고 봉독멜리틴은 감소되었다. 증류수의 조건에서 정제봉독의 안정성은 감소되었으나 봉독멜리틴은 증가되는 현상이 확인되었다. 봉독멜리틴의 안정성을 장기간 유지하기 위한 최적조건으로는 보관온도 4 ℃, 증류수, 시료의 농도는 1.0 mg/mL의 결과를 얻었다.
본 연구에서는 서양종꿀벌(Apis mellifera L.) 일벌에서 봉독채집장치를 사용하여 채집한 후 정제한 정제봉독(purified bee venom)의 항비만 효과를 검정하기 위하여 지방전구세포인 3T3-L1 세포에서 지방분화에 미치는 영향을 조사하였다. 정제봉독은 1 mg/mL 이하의 농도로 처리했을 경우에는 3T3-L1 세포에서 세포독성을 유발하지 않는 것으로 확인되었다. 정제봉독을 3T3-L1 세포에 처리한 후 지방분화를 Oil-red-O 염색약으로 염색하여 비교하여 보았을 때, 정제봉독은 무처리구에 비교하여 낮은 지방축적률을 나타내어 지방세포 분화를 억제하는 것으로 확인되었다. 또한 정제봉독은 지방 분화 특이 전사인자인 C/EBPα와 PPARγ 유전자 발현을 억제시켰다. 이에 본 연구결과를 바탕으로 정제봉독이 지방세포 분화 억제를 통한 항비만 소재로서 활용 가능성이 있을 것으로 사료된다.
서양종 꿀벌의 일벌의 독을 채취하여 정제한 정제봉독에 대한 세균에서의 돌연변이 유발성 검색을 위하여 S. typhimurium의 히스티딘 요구성 균주 TA100, TA1535, TA98, 그리고 TA1537의 균주와 대장균 E. coli의 트립토판 요구성 균주인 WP2 uvrA를 이용해 복귀돌연변이시험을 실시하였다. 정제봉독은 부형제로 사용한 멸균생리식염수에 용해되었으며 모든 농도군의 조제물에서 침전은 관찰되지 않았으며, 정제봉독 조제물을 top agar와 혼합할 때 모든 농도군에서 혼탁이나 침전이 관찰되지 않았다. 대사활성계 적용 TA100, TA1535, TA98 균주에 대해 0, 1.5, 5, 15, 50, 150 및 500 µg/plate의 범위를 설정하고 미 적용시엔 0, 0.15, 0.5, 1.5, 5, 15 및 $500{\mu}g/plate$의 범위로 설정하였다. TA1537과 WP2 uvrA균주에 대한 농도 범위은 대사활성계 적용시엔 0, 5, 15, 50, 150, 500 및 1,500를 미 적용시엔 0, 1.5, 5, 15, 50, 150 및 500 µg/plate 범위로 설정하여 시험을 수행하였다. 그 결과 모든 시험균주에서 대사활성계 적용 여부에 상관없이 정제봉독 처리군의 평균 집락 수는 증가를 나타내지 않았으며, 양성판정 기준을 만족시키지 못하였다. 따라서, 정제봉독은 본 시험조건 하에 사용한 시험 균주에 복귀돌연변이를 유발하지 않는 것으로 사료되었다.
본 연구에서는 서양종꿀벌의 일벌에서 채집하여 정제한 정제봉독이 알코올 분해능에 관련이 있는 ADH와 ALDH 효소 활성에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. ADH와 ALDH 활성은 in vitro kit를 사용하여 측정하였다. 그 결과 정제봉독 처리에 의해 ADH와 ALDH 효소 활성이 크게 증가하는 것으로 확인되었다. ADH 효소는 1mg/ml 이상의 정제봉독을 처리했을 경우 양성대조구(2mg/ml) 대비 $88.6{\pm}7.34%$의 활성도를 보였으며, ALDH 효소 역시 1mg/ml 이상의 정제봉독에서 양성대조구(2mg/ml) 대비 $94.6{\pm}0.57%$의 활성도를 나타내었다. 이상의 결과로 정제봉독은 숙취 해소능에 영향을 미치는 지표물질인 ADH와 ALDH 효소 활성을 크게 증가시키는 것으로 사료되었으며, 향후 추가시험을 통해 숙취해소 작용을 갖는 식의약품 소재로 사용 될 수 있을 것으로 생각된다.
서양종 꿀벌로부터 봉독채집장치를 이용하여 채집한 정제봉독의 pH 안정성에 대하여 평가하고자 멜리틴의 함량, 단백질의변화, 항균력, 세포증식률을 측정하였다. 정제봉독을 pH2에서 pH9까지 24시간 동안 처리한 후 멜리틴 함량과 단백질의 변화, S. aureus, P. acnes, S. mutans와 E. coli에 대한 항균력, 피부세포인 HDF에 대한 세포증식률에 미치는 영향을 분석하였다. pH2에서부터 pH9까지 각각 처리한 정제봉독의 멜리틴 및 단백질 성분의 변화는 확인되지 않았다. 봉독의 주요 약리효과인 항균력에 있어서도 시험균주마다 다소 차이가 있었으나 S. aureus, P. acnes, S. mutans와 E. coli 모두 산도에 따른 유의할 만한 변화는 확인되지 않았다. 또한 피부세포 증식률에 있어서도 산도에 따른 변화는 확인되지 않았다. 이러한 결과로 미루어 봉독의 pH처리는 멜리틴 함량, 단백질의 변화, 항균력 및 세포증식률에 영향을 주지 않는 것으로 확인되어 봉독은 산도의 변화에 있어 안정성이 매우 높은 것으로 사료된다.
본 연구는 사료 내 첨가된 봉독이 육계의 혈청 성분, 항산화능 및 간 내 지방산 조성에 미치는 영향을 조사하기 위해 수행하였다. Ross 308 1일령 육용종 수평아리를 공시하여, 5개의 처리에 7 반복으로 반복 당 25수씩, 총 875수를 완전임의배치하여 실험을 진행하였다. 기초사료는 옥수수 및 대두박 위주의 사료를 사용하였으며, 정제 봉독을 기초사료에 $10{\mu}/kg$, $50{\mu}/kg$, $100{\mu}/kg$, $500{\mu}/kg$ 수준으로 첨가하여 5주간 급여하였다. 실험 21일차에 펜당 1수의 육계를 $CO_2$가스로 안락사시킨 뒤 혈액 샘플을 채취하여 혈액지표와 항산화능을 측정하였다. 또한, 간 샘플을 채취하여 간 내 malonaldehyde 함량과 지방산 조성을 분석하였다. 사료 내 봉독 첨가는 triglyceride와 NEFA를 제외한 나머지 혈청 성분에는 영향을 미치지 않았다. 봉독 첨가 수준이 증가할수록 간 내 지방산의 불포화 지방산(palmitoleic acid, oleic acid, 그리고 linoleic acid)은 감소하였으나(quadratic, P<0.05), 간 내 stearic acid 함량은 반대로 증가하였다. 마지막으로 간 내 MDA 함량은 봉독 첨가 수준이 증가할수록 감소하였다. 본 연구에서 육계 사료 내 봉독 첨가는 항산화능을 높이고, 지방산 대사에 영향을 미치는 것으로 조사되었다.
Objective : This study is aimed to investigate the effects of bee venom and purified bee venom on cell death in synovial cell line. Methods : It was evaluated by using MTT assay, morphological method, flow cytometry, immunocytochemistry analysis, RT-PCR. Results : The result obtained is as follows. 1. The MTT assay demonstrated that synovial cell viability was significantly inhibitted dose-dependently by treatment with BV and PBV in comparison with control. And the inhibitory effect of BV and PBV was almost same. 2. The morphologic study demonstrated that synovial cell showed apoptotic body resulted from apoptosis after treatment with BV and PBV for 6 hours using microscope. 3. The Flow cytometry demonstrated that apoptosis of synovial cell treated with BV and PBV was related with stop of cell cycle in stage of G0/G1. 4. Immunocytochemistry assay demonstrated that COX-II and iNOS were slightly expressed by treatment with BV and PBV in comparison with control group. 5. RT-PCR analysis demonstrated that COX-II were almost down-regulated by high dose treatment with BV and PBV in comparison with control group. iNOS were well down-regulated by treatment with $5{\mu}g/ml$ BV and PBV whereas it was well expressed in control group. Conclusion : These results suggest that bee venom and purified bee venom have significant effect on cell death in synovial cell line and further study is needed in vivo.
To further access honeybee (Apis mellifera L.) venom (BV) as a cosmetic ingredient and potential external treatment for topical use, we investigated its ability to inhibit tyrosinase activity and melanin biosynthesis on melanogenesis in B16F1 melanoma cells. We found that BV increased the cell viability in B16F1 melanoma cell and BV (0.01~1 ${\mu}g/ml$) inhibited melanin synthesis in with 10 nM ${\alpha}$-melanocyte-stimulating hormone (${\alpha}$-MSH) for 48 h. In addition, we used reverse transcription-polymerase chain reaction and western blotting for me melanogenesis-related genes such as tyrosinase to examine the mechanisms underlying the inhibitory effects of BV on melanogensis. BV inhibited direct tyrosinase activity, which decreased melanin synthesis in ${\alpha}$-MSH stimulated B16F1 melanoma cells. Thease findings suggest that BV induces the downregulation of melanogenesis by inhibiting tyrosinase activation.
Purified bee venom was collected from colonies of honeybees (Apis mellifera L.) using a bee venom collector under sterile conditions and then purified under strict laboratory conditions. Purified bee venom contained $63.9{\pm}5.4%$ melittin, $10.9{\pm}1.6%$ phospholipase A2, and $2.3{\pm}0.3%$ apamin. Purified bee venom has various anti-bacterial, anti-inflammatory and immunostimulating effects. In this study, we evaluated purified bee venom which are mammary gland cells, MAC-T cells are used to increase the synthesis of milk protein. Purified bee venom promoted the proliferation of MAC-T cells at concentrations below $1{\mu}g/mL$, but cytotoxicity at $10{\mu}g/mL$ and above. As a result of the increase in the synthesis of ${\beta}-casein$, a milk protein after treatment with MAC-T cells at a concentration of the bee venom without cytotoxicity, the ${\beta}-casein$ content in the cell culture was increased when treated at a concentration of 1 ng/mL or more. In addition, it was confirmed that purified bee venom significantly increased the expression of bovine ${\beta}-casein$ (bCSNB) mRNA, a ${\beta}-casein$ synthesis gene, at a concentration of 1 ng/mL or more. These results suggest that purified bee venom can be used to increase the production of livestock by ultimately increasing the expression of milk protein.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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