정자 운동의 분석은 붙임의 원인 규명과 진단에 중요한 정보를 제공한다. 본 논문에서는 연속된 정자 운동 영상을 이용해 정자 운동성의 주요 척도인 선형속도, 곡선속도, 선형성, 운동력등의 운동특성을 검출해 내는 알고리즘을 구현했다. 비디오 신호로 보내진 정자 영상을 컴퓨터에 의해 디지털화하고, 각 정자 머리의 위치를 계산해내었고, 이로부터 정자 등의 경로 및 주요 운동특성를 찾았다.
폐색성 혹은 비폐색성 무정자증에서 부정소 정자채취법 등이 부적절하다고 여겨질때는 정소 조직을 일부 절제하여 그 조직으로부터 정자를 직접 채취하게 되는데 일반적으로 이렇게 정소로부터 추출한 정소정자는 운동성이 전혀 없거나 매우 약한 운동성을 보이는 경우가 많다. 본 연구의 목적은 이러한 정소정자를 Vero cell과 공배양을 시킴으로써 운동성을 획득시키거나 향상시키고 이를 수정시키는 시기까지 지속시킴으로써 정소정자추출술 (TESE)을 시행하는 환자나 의료진들에게 보다 편안하고 융통성있는 시간대를 부여하고, 아울러 정자직접주입술 (ICSI)을 보다 용이하게 하여 성공적인 수정률과 임신율을 얻음에 있다. 또한 ICSI를 시행한 후, 운동성이 향상된 잉여의 정소정자를 냉동보존함으로써 차후에 TESE을 다시 시행치않고도 시험관 아기 시술을 시도할 수 있는 부가적인 잇점도 있다고 할 수 있다. 대상환자군은 정관폐색증(n=11) 혹은 비정관폐색증(n=2)을 보이는 13명의 무정자증의 남성불임환자였으며 난자회수예정일 3일전에 TESE를 시행하여 정소정자를 얻은 후 이를 정자직접주입술이 시행되는 당일까지 Vero cell과 공배양을 실시하였다. Vero cell과의 공배양에 의하여 운동성이 있는 정소정자의 수는 공배양전과 비교하여 평균 3.3배가 증가하였으며, 특히 공배양전에 운동성이 있는 정소정자의 수가 50,000/ml이하의 미약한 운동성만을 보였던 경우 (n=5)에는 공배양 후에 운동성이 있는 정소정자 수의 평균증가율이 7.7배였다. 공배양전 정자운동성이 전혀 없었던 2례의 비정관폐색증환자중 3일간의 공배양을 통하여 1례에서 운동성을 획득한 정소정자를 얻을 수 있었으며 (14,300/ml), 정자직접주입술을 통하여 성공적인 수정 및 임신에 도달할 수 있었다. Vero cell과 공배양을 하고 ICSI했던 결과, 평균 수정률은 75.0% 이었으며 임신율은 61.5%였다.
소의 번식효율을 증가시키기 위한 기초실험으로서 6%, 10% 및 20%의 bovine serum albumin 을 사용한 선인들의 방법과 tyrode액을 사용하여 시도한 저자의 방법으로 소의 원정액, 희석정액 및 일반시판 냉동정액으로부터 고활력정자를 분리수집하여 정자의 각종 성상과 광학현미경적 형태를 비교관찰한 결과는 다음과 같다. 1. 원정액으로부터 bovine serum albumin을 사용하여 분리한 정자는 대조군에 비하여 운동성, 운동성 정자수, 정상정자율 및 전진운동성이 현저히 높았고 정자회수율은 6%일 때 가장 높았다. 2. 원정액으로부터 bovine serum albumin을 사용하여 고활력정자를 분리한 후 냉동한 정액의 정자운동성, 정상정자율 및 전진운동성은 대조군에 비하여 현저히 높았고, 이러한 현상은 bovine serum albumin의 농도가 20%일 때에 가장 현저하게 나타났다. 3. Bovine serum albumin을 사용하여 분리한 고활력정자의 냉동전 및 냉동후의 광학현미경적인 기형율은 대조군에 비하여 현저히 낮았다. 4. Bovine serum albumin을 사용하여 분리한 고활력정자는 전자현미경으로 세포막의 확장 및 공포 형성, acrosome의 확장과 density loss의 변형율이 대조군에 비하여 낮았다. 5. 일반시판 냉동정액으로부터의 고활력정자의 분리는 bovine serum albumin을 사용할 때는 어려웠으나, tyrode액을 사용한 이 실험에서는 가능하였다. 6. 원정액, 희석정액 및 냉동정액의 고활력정자회수율은 tyrode 액을 이용하여 80분간 정치하였을때 현저히 높았다. 7. Tyrode 액을 이용하여 원정액, 희석정액 및 냉동정액으로부터 분리된 고활력정자의 운동성, 전진운동성 및 정상정자율은 대조군에 비하여 현저히 높았다. 8. Tyrode 액을 이용하여 원정액, 희석정액 및 냉동정액으로부터 분리한 고활력정자의 광학현미경적 기형율은 대조군에 비하여 현저히 낮았다.
삼투질농도가 감성돔(Acanthopagrus schlegeli) 정자의 운동성에 미치는 영향을 연구하였다. 감성돔 정자는 정장과 등장인 삼투질농도에서 운동성이 억제되었으나, 전해질(NaCl, KCl, $CaCl_2$, $MgCl_2$) 및 비전해질(mannitol, glucose, fructose, sucrose) 희석액의 삼투질농도가 증가할 때, 운동성을 획득하였다. 희석액의 삼투질농도에 의한 정자운동지수(SMI)의 변화는 포물선을 그렸다 모든 희석액에서 SMI는 해수의 삼투질농도와 유사한 약 1,000 mOsm/kg에서 가장 높았고 그 이상에서는 다시 낮아졌다. 비록 정자의 운동성이 희석액의 삼투질농도에 의해 유발되고 해수와 비슷한 농도의 고장인 희석 액에서 SMI가 가장 높았지만, 고장이나 저장의 희석액에 정자를 노출시키는 것은 정자의 운동성 감소를 유발하였고 생존에 유해하였다.
본 연구에서는 보다 효율적인 동결 보존법을 수립하기 위하여 현재 사용되는 동결 보존액과 동결방법을 정자의 운동성 측면에서 비교해 보았다. 즉, 세 종류의 조성이 다른 동결보존액인 TYB, dithiothreitol을 첨가한 TYB+DTT, KS II 등이 동결보존 전후에 있어 운동성에 미치는 영향을 조사하였으며, 또한 vapor freezing 방법과 computerized freezer를 사용한 동결방법이 정자 운동성에 미치는 영향을 알아보았다. 정자의 분석은 현미경적 방법과 두 종류의 컴퓨터 정자 자동측정기인 SAIS와 Hamilton Thorn을 사용하여 동결 전 후의 정자 운동성과 VCL, VSL, VAP, ALH, LIN 등의 sub-motility 패턴을 측정하였다. 정액성상이 정상인 군에서 동결보존액을 비교한 실험결과는 TYB군과 TYB+DTT군, 그리고 KS II군의 융해 후 운동성이 각각 28.3%, 23.0%, 34.8%로 KS II군이 우수하였고, 동결방법을 비교한 실험에서는 vapor freezing 군과 computerized freezing 군의 융해 후 정자 운동성이 각각 27.8%, 33.2%로 유의차는 없었다. 또한 무력정자증을 보인 정액군에서는 TYB군과 TYB+DTT군, 그리고 KS II군에서 융해후 정자 운동성이 각각 13.6%, 10.0%, 18.5%로 여기 KS II군이 우수하였으며, vapor freezing군과 computerized freezing군의 융해 후 정자 운동성은 12.8%, 12.9%로 유의차가 없었다. 이상의 결과로 보아 운동성이 정상인 정액군과 무력정자증을 보이는 정액군에서 KS II를 사용해 동결하는 것이 TYB나 TYB+DTT를 사용하는 것보다 운동성 있는 정자를 회수하는데 더 효율적이며, 동결방법 측면에서는 vapor freezing 방법과 computerized freezing방법간에 큰 차이가 없음을 볼 수 있었다.
성선자극호르몬으로 자극된 난소로부터 회수된 사람의 성숙난자의 전핵형성과 초기발생에 정자의 운동성과 성숙도가 미치는 영향을 조사하였다. 세포질내정자주입 (ICSI)은 HEPES-buffer mTCM-199 배양액에서 실시하였다. 체내에서 성숙된 난구세포부착난자를 ICS에 의하여 사정된 운동성 정자 또는 비운동성 정자로 수정하였을 때 운동성 정자로 수정된 난자가 비운동성 정자로 수정된 난자보다 전핵형성율이 높았다 (79.8% vs 51.7% ; p<0.002)). 그러나 체내에서 성숙된 난구세포부착난자를 ICS에 의해 정소 내 운동성 정자 또는 비운동성 정자로 수정하였을 때 운동성 정자와 비운동성 정자 사이의 전핵형성율은 차이가 없었다. 10.0 mM lactate, 0.5 mM pyruvate, 0.2 mM taurine, 1.0 mM glutamine, 2.22 mM MEM amino acids, vitamin 그리고 10% 사람 난포액이 포함된 수정 Tyrode 배지에서 전핵이 형성된 수정란의 초기 발생은 정자의 채취원과 운동성에 관계없이 9∼16세포기로 발생하였다.
목 적: 본 연구는 정상 정액을 배양액으로 세척한 후 $4^{\circ}C$, $22^{\circ}C$, $37^{\circ}C$에서 5일 동안 보존하면서 정자의 운동성, 생존성을 관찰하여 정자의 운동성과 수명 유지를 위한 적정 배양 환경을 분석하고자 하였다. 연구방법: 정액검사 시 정상으로 판정된 남성의 정자를 HTALP 배양액으로 세척하여 정자의 최종 농도 $1{\times}10^6/ml$로 각 5 ml을 배양온도 $4^{\circ}C$, $22^{\circ}C$, $37^{\circ}C$에서 5일 동안 배양하였다. 1일, 3일 5일째에 CASA에 의해 운동성을 측정하였고, HOST로 정자막의 온전성을 분석하였으며, CTC pattern으로 수정능획득 상태 분석하여 최적의 배양 환경을 분석하였다. 결 과: 정자의 운동성, 생존성 및 수정능획득이 야기되지 않은 정자는 배양일에 따라 유의하게 감소하였다 (p<0.05). 또한 정자 배양 후 1일에는 정자의 운동성, 생존성 및 정자막의 온전성과 CTC pattern은 온도에 따라 차이가 없었으나, 배양 후 3일과 5일에서는 $22^{\circ}C$에서 배양된 정자가 다른 배양온도에 비해 가장 잘 보존되었다 (p<0.05). 결 론: HTALP로 세척된 정자를 $22^{\circ}C$에서 보존 시 5일까지 정자의 운동성과 수명을 보조생식술에 적합한 수준으로 유지시킬 수 있는 최적 배양 환경으로 제시할 수 있다.
본 연구는 $\alpha$-tocopherol과 selenium 첨가급여가 웅돈의 정액성상에 미치는 효과를 검토하였다. $\alpha$-tocopherol과 selenium 첨가급여가 웅돈의 정액량, 정자농도, 정자의 운동성, 기형정자율 그리고 수소이온농도(pH)에 미치는 영향을 조사한 결과 정액량과 수소이온농도는 처리간에 유의차가 없었으며(P<0.05) 정자의 농도, 총정자수, 정자의 운동성은 첨가구가 대조구에 비하여 유의적으로 높았으며 기형정자율은 유의적으로 낮았다(P<0.05). 한편, 정자 저장기간별 정자의 운동성은 대조구에 비하여 처리구에서 유의적으로 높은 정자운동성을 보였다(P<0.05). 이러한 결과는 $\alpha$-tocopherol 과 selenium 의 사료내 첨가 급여는 웅돈정액성상에 영향을 미치는 것으로 사료된다.
난포액에 함유되어 있는 steroids와 sterol이 수정에 참여하는 정자의 주화성에 미치는 영향을 밝히기 위하여, progesterone, estradiol 17 beta 및 cholesterol이 sucrose 층으로부터 정자의 swim-up 분리에 미치는 영향을 조사하였던 바 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. Progesterone은 정자의 이동과 운동성을 억제하였으나 수정능획득한 정자를 유인하였으며, 특히 50$\mu$g/ml 수준의 progesterone은 수정능력을 획득한 정자의 이동을 유의하게 자극하였다. 2. Estradiol 17 beta의 첨가수준이 증가할수록 정자의 이동과 운동성이 억제되었으나, 10$\mu$g/ml 수준의 estradiol은 정자의 이동과 운동성 및 수정능획득정자의 이동에 영향을 미치지 않았다. 3. Cholesterol은 정자의 이동과 운동성을 자극하였으나, 수정능획득정자의 이동에 영향을 미치지 않았으며, 특히 50$\mu$g/ml 수준의 cholesterol은 정자의 이동과 운동성을 유의하게 자극하였다. 4. Progesterone, estradiol 및 cholesterol의 병용처리에서, cholesterol은 정자의 이동과 운동을 유의하게 자극하였으나, progesterone과 estradiol은 이러한 cholesterol의 효과를 감소시켰다. Progesterone은 수정획득 정자의 이동을 자극하였으나 estradiol이나 cholesterol은 progester-one의 이러한 효과를 억제하지 않았다. 결론적으로 progesterone은 50$\mu$g/ml 첨가수준에서 수정능력을 획득한 정자의 swim-up이동을 유의하게 자극하였으며, cholesterol은 50$\mu$g/m1 첨가수준에서 정자의 이동을 자극하였으나, estradiol은 10$\mu$g/m1 첨가수준에서 정자의 이동과 운동성에 영향을 미치지 않았다.
장기간 담수순화 사육한 감성돔 Acanthopagrus schlegelii(BFW) 정액의 화학적 특성과 염분 및 이온조성에 따른정자활성을 해수사육 감성돔(BSW) 정액과 비교하였다. BFW 정장의 화학적 특성은 대부분의 요인에서 BSW 정장과 차이를 보이지 않았으나, 삼투질농도는 각각 $307.0{\pm}4.6$, $337.3{\pm}10.1$ mOsm/kg으로 차이를 보였다. 염분에 따른 BFW 및BSW의 정자운동성는 0 psu에서는 운동성이 관찰되지 않았으나, 10 psu에서 낮은 운동성과 짧은 정자 운동지속시간을 보였다. 그러나 20, 32 psu에서는 높은 운동성과 긴 정자 운동지속시간 보였다. BFW와 BSW 정자의 SAI는 이온의 종류와는 상관없이 삼투질농도에 의존하여 변화하였으며, 인공해수와 비슷한 농도에서 높았다. 결론적으로 장기간 담수에서 사육한 감성돔의 정자의 운동개시요인은 환경수의 삼투질농도가 좌우하는 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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