• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 2001.06a
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• pp.42-43
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• 2001

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 2001.06a
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• pp.79-80
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• 2001

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.35 no.2
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• pp.99-110
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• 2008

Objectives: Preimplantation genetic diagnosis (PGD) has become an assisted reproductive technique for couples carrying genetic conditions that may affect their offspring. Osteogenesis imperfecta (OI) is an autosomal dominant disorder of connective tissue characterized by bone fragility and low bone mass. At least 95% of cases are caused by dominant mutations in the COL1A1 or COL1A2. In this study, we report on our experience clinical outcomes with 5 PGD cycles for OI in two couples. Methods: Before clinical PGD, we assessed the amplification rate and allele drop-out (ADO) rate of alkaline lysis and nested PCR protocol using heterozygous patient's single lymphocytes in the pre-clinical diagnostic tests for OI. We performed 5 cycles of PGD for OI by nested PCR for the causative mutation loci, COL1A1 c.2452G>A and c.3226G>A, in case 1 and case 2, respectively. The PCR products were analyzed by agarose gel electrophoresis, restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis with HaeIII restriction enzyme in the case 1 and direct DNA sequencing. Results: We confirmed the causative mutation loci, COL1A1 c.2452G>A in case 1 and c.3226G>A in case 2. In the pre-clinical tests, the amplification rate was 94.2% and ADO rate was 22.5% in case 1, while 98.1% and 1.9% in case 2, respectively. In case 1, a total of 34 embryos were analyzed and 31 embryos (91.2%) were successfully diagnosed in 3 PGD cycles. Eight out of 19 embryos diagnosed as unaffected embryos were transferred in all 3 cycles, and in the third cycle, pregnancy was achieved and a healthy baby was delivered without any complications in July, 2005. In case 2, all 19 embryos (100.0%) were successfully diagnosed and 4 out of 11 unaffected embryos were transferred in 2 cycles. Pregnancy was achieved in the second cycle and the healthy baby was delivered in March, 2008. The causative locus was confirmed as a normal by amniocentesis and postnatal diagnosis. Conclusions: To our knowledge, these two cases are the first successful PGD for OI in Korea. Our experience provides a further demonstration that PGD is a reliable and effective clinical techniques and a useful option for many couples with a high risk of transmitting a genetic disease.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.37 no.2
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• pp.169-172
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• 2010

Retrograde ejaculation is a condition that causes male infertility. Infertiltiy treatment is usually based on assisted reproductive technology with the use of sperms recovered from the bladder after ejaculation. Many pregnancies have been tried by artificial intrauterine insemination with the husband's sperm recovered from voided urine. In this case, ovulation was induced by clomiphene citrate and human menopausal gonadotropin, pH and osmorality of urine was controlled by modified Ham's F-10 contained 10% serum substitute supplement and immediately semen collection, to improve sperm motility. We had experienced a successful pregnancy case by above method, and reported with brief review of literature as well.

• Journal of Genetic Medicine
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• v.8 no.1
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• pp.1-16
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• 2011

Owing to the risk of fetal loss associated with prenatal diagnostic procedures (amniocentesis, chorionic villus sampling), noninvasive prenatal diagnosis (NIPD) is ultimate goal of prenatal diagnosis. The discovery of circulating cell-free fetal DNA (cffDNA) in maternal plasma in 1997 has opened up new probabilities for NIPD by Dr. Lo et al. The last decade has seen great development in NIPD. Fetal sex and fetal RhD status determination by cffDNA analysis is already in clinical use in certain countries. For routine use, this test is limited by the amount of cell-free maternal DNA in blood sample, the lack of universal fetal markers, and appropriate reference materials. To improve the accuracy of detection of fetal specific sequences in maternal plasma, internal positive controls to confirm to presence of fetal DNA should be analyzed. We have developed strategies for noninvasive determination of fetal gender, and fetal RhD genotyping using cffDNA in maternal plasma, using real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) including RASSF1A epigenetic fetal DNA marker (gender-independent) as internal positive controls, which is to be first successful study of this kind in Korea. In our study, accurate detection of fetal gender through gestational age, and fetal RhD genotyping in RhD-negative pregnant women was achieved. In this assay, we show that the assay is sensitive, easy, fast, and reliable. These developments improve the reliability of the applications of circulating fetal DNA when used in clinical practice to manage sex-linked disorders (e.g., hemophilia, Duchenne muscular dystrophy), congenital adrenal hyperplasia (CAH), RhD incompatibility, and the other noninvasive pregnant diagnostic tests on the coming soon. The study was the first successful case in Korea using cffDNA in maternal plasma, which has created a new avenue for clinical applications of NIPD.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.37 no.1
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• pp.57-64
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• 2010

Objectives: Likewise fresh cycle, it is also important to select right blastocysts for transfer in purpose of improving the pregnancy and implantation rates in frozen-thawed embryo transfer (ET) cycles. To investigate the relationship between the developmental velocity at the time of cryopreservation and pregnancy rates, we compared pregnancy rates between the day 5 cryopreservation group and the day 6 cryopreservation group. Methods: Transfers of frozen-thawed blastocysts which had been cryopreserved by vitrification on day 5 or day 6 were performed between January 2006 and June 2007. Ethylene glycol, DMSO, and pull and cut straws were used for vitrification and artificial shrinkage was done in expanded blastocysts. Thawing was performed on the day before transfer and thawed blastocysts were cultured in for 15~18 hrs in Quinn's blastocyct media. Blastocyst survival was assessed before transfer and post-thaw survival was defined as >50% of cells remaining intact and blastocoele re-expansion by the time of transfer. Results: Transfers of thawed blastocyst had been cryopreserved on day 5 were 52 cycles and 41 transfer cycles were cryopreserved on day 6. Patient characteristics, the number of transferred embryos and the survival rate of thawed blastocysts were not different in each cryopreservation day. But the biochemical pregnancy, clinical pregnancy, ongoing pregnancy, and implantation rate were significantly high in transfer of frozen-thawed blastocyst which were cryopreserved on day 5. Conclusions: The clinical pregnancy and implantation rate of day-5 blastocyst showed significantly higher than those of day-6 blastocyst in frozen-ET cycles. This result indicated that developmental rate of blastocyst at cryopreservation time in frozen-thawed cycle is discriminative marker of pregnancy outcome as like in fresh cycle.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2001.03a
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• pp.57-57
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• 2001

Erythropoietin(EPO)는 혈액의 구성성분 중에서 적혈구 세포 증식에 중요한 기능을 한다고 알려져 있으며, 최근에는 암, 에이즈의 치료 등에도 효과가 있는 것으로 확인되고 있다. 따라서 본 연구팀은 지금까지 hEPO 유전자를 이용하여, 형질전환 돼지 "새롬이"의 생산에 성공한바 있다. 새롬이의 정액을 활용하여 인공수정을 실시 새롬이의 Fl를 24두 생산하였다. 이에 대하여 "형질전환 돼지의 계대번식시 유전자 전이효율에 관한 연구"라는 제목으로 발표 할 예정이며, 형질전환에 사용된 promoter가 WAP이므로, Fl이 임신, 분만을 하여야만 유즙을 통하여 hEPO물질을 생산할 수 있다. 따라서, Fl(♂)$\times$Fl(♀)의 교배에 의하여 5두가 임신, 분만을 하였으며, 이들 중 1두는 분만 후 21일에 폐사하였으며, 나머지는 현재 정상적으로 사육되고 있다. 이들 5두에 대하여 분만 후 유즙을 채취하여 유즙속에 EPO의 발현여부를 검토하였다. EPO-ELISA kit(medac)를 사용하여 분석결과, 유즙을 8,000배로 희석을 하여야만 Standard curve(1.25~160 mIU/$m\ell$)안에서 EPO의 단백질 발현을 검출할 수 있었다. 5두의 각각 농도는 28, 58, 17, 37, 27 IU/${\mu}\ell$ 였다. 또한 cDNA EPO와 genome EPO를 CHO 동물세포에서 생산하여 10배로 농축한 결과 5.5와 11 IU/${\mu}\ell$의 농도로 유즙과 비교하면 약 20~30배의 낮은 발현양을 나타내었으며, 또한 이러한 결과는 소변에서의 결과(1.1 IU/$m\ell$)보다는 약 30,000배 이상 높은 발현량을 화인 할 수 있었다. 현재, 이들 유즙 물질을 활용 빈혈 질환실험동물을 이용하여 생리활성을 검정, 체내에서 metabolic clearance rate(MCR)를 검토 중에 있다. 또한 F2의 자돈생산은 모돈 5두에서 총 25두가 생산되었는데, 이중 20두 약 80%가 EPO 유전자의 전환율을 나타내었다. 이상을 종합하면, 1) 돼지이용 생리활성물질(EPO)을 유즙에서 대량으로 생산할 수 있는 system의 활용가능성을 국내에서 처음으로 확인하였으며, 2) EPO에 있어서는 국제적으로도 형질전환 가축생산은 최초로 성공하였으며, 현재로서는 생산되어진 물질의 정제수준에 따라 활용가치가 결정되어 질 것으로 사료된다. 생리활성 물질을 생산할 수 있는 형질전환 돼지 생산의 성공은, 앞으로 형질전환 가축생산 뿐 만 아니라, 장기이식 및 복제돼지 생산의 활용 면에서의 응용가능성이 기대된다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
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• v.18 no.2
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• pp.141-150
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• 1994

Morphological features of the interaction between the hatching blastocyst and implantation in pig were studied by electron microscopy. The observations extended from late blastocyst stage to the completion of trophoblastic erosion of the epithelium and early decidual transformation of the epithelium and early decidual transformation of the stromal cells. Between day 7 and 17 of pregnancy, blastocysts from 0.3 to 12 mm in diameter were flushed from the uterine horns of Dutch Landrace pigs. On the 7th of development in the pig blastocyst, the blastocyst shedded of the zona pellucida established the tips of microvilli and with bleb-like cytoplasmic protrusions of the epithelial cells. From day 11 on in pig embryo, the bilayered trophoblast undergoes a dramatic phase of elongation so that the initially spherical expanded blastocyst becomes tubular. In pig, close apposition to the uterine wall beg-ins at about 12 $^1$/$_2$ days and then attachment occurred during the afternoon of the 16th or 18th day post coitum. At this stage, embryonic loss compared with corpus luteum number is up to 40% of ovulated oocytes. Therefore, the implantation failture of these embryos may be mainly caused by morphological abnormality and failture of zona shedding.

• Development and Reproduction
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• v.11 no.1
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• pp.1-11
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• 2007

Specific endometrial preparation should occur during periimplantation period. That is a progress of serial differentiation and is absolute in implantation of embryo and successful pregnancy. Remodeling of tissues shown during embryogenesis is regulated by various factors including extracellular matrix (ECM). Marked changes during pregnancy are including embryo migration, decidual response, and differentiation of placenta in placental animals including human. These changes to successful implantation in embryo and uterus have to prepare the competence for attachment of embryo and uterus, and invasion defense of uterus. During these changes, ECM dramatically changes for maintaining the uterine and embryonic functions. The major component of most connective tissue is collagens. It is very complex and hard to explore the mechanisms for ECM modulation. Recently using high throughput methodology, PCR-select cDNA subtraction method, microarray, many candidate genes have been identified. Steroid hormones have fundamental role in implantation and maintenance of pregnancy. Dermatopontin, a regulator of collagen accumulation, is regulated spatio-temporally in the uterus by primarily progesterone through progesterone receptors at the time of implantation. Modulation of extracellular matrix is critically regulated by cascade of gene net-works which are regulated by cascade of sex steroid hormones. Pathological regulation of uterine extracellular matrix reported in diabetic patients. To know the extracellular modulation is essential to understanding implantation, feto-placental development and overcome the paths involved in female reproduction. Though ECM composed with very various components and it is complex, the present review focused on the fate of collagens during periimplantation period.

• Korea journal of population studies
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• v.17 no.1
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• pp.87-114
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• 1994

1950년대부터 많은 개발도상국가들은 가족계획을 위주로 하는 인구제어정책을 추진하여 왔다. 특히 가부장제도를 중심으로하는 동아시아 국가들에 있어서는 남아선호관이 출산력 저하나 피임 실천율이 증대에 지대한 유해요인으로 일관해 왔다. Sheps(1963)는 실증적으로 2명의 아들을 갖기 위해서는 약 3.9명 정도의 자녀를 두어야 한다는 연구결과를 제시한바 있다. 이와 같은 남아선호관의 여파에도 불구하고 한국과 홍콩은 1980년대 증반에 이미 1.6명 수준의 저출산율을 이룩하였으며, 1970년대에 인구억제 정책을 시작한 중국도 2명 수준으로 저하되어 가족계획사업의 성공사례로 평가되어 왔다. 그러나 이들 국가들의 출산율은 지난 20-30년이라는 짧은 기간에 너무나 급진적으로 감소된 반면에 남아선호관의 상존으로 인한 성비(여자 100명당 남자수)의 불균형을 초래하게 되였다. 한 예로 한국의 경우 1960년도만 해도 6명 이상의 자녀를 출산하는 과정에서 1-2명의 아들을 둘 수 있는 확률은 매우 높았으나, 최근에는 출산율이 2명 이하로 저하되어 아들을 둘 수 있는 확률은 과거보다 3-4배 어려워졌기 때문에 인위적인 방법으로 아들을 두는 부모의 수가 증가하고 있다. 중국은 1970년대 중반기부터 강력히 추진되어온 소위 "한자녀 갖기 운동"으로 인하여 여아출산인 경우 영아살해 또는 출생의 미신고등 많은 사회적 물의를 야기하였고, 최근에는 초음파검사를통한 선택적 인공임신중절(태아가 여아인 경우)으 경우가 급격히 증가하고 있다. 우리 나라의 성비는 출산율이 급격히 감소된 1980년대 증반기부터 급격히 증가되었다. 즉 인구전체에 대한 성비는 1980년의 103.9명에서 1985년에 110명으로 증가하였고ㅡ 1990년 116.9명으로 증가되었다. 성비는 자녀의 수가 적을수록 높아지는 추세이다. 1991년 조사에서 출산을 종료한 부인의 경우 1자녀의 성비는 무려 206명이나 되고 있다. 이와 같은 결과는 한자녀를 원하는 부인이 아들을 둔 경우 1자녀에서 조산을 결심하기 때문인 것이다. 통계청 자료에 의하면 성비는 무엇보다도 자녀의 출산순위와 밀접하다. 1991년 출생신고자료의 경우 첫아이의 출생시 성비는 106.1명이고, 둘째아이가 112.8명이나, 셋째아이는 184.7명으로 크게 증가하고 넷째 이상의 경우는 212.3명이나 된다. 동일한 출산순위라도 이미 두고 있는 자녀의 성에 따라서 많은 차이를 보인다. 1991년도 3번째 출산의 경우 딸만 2명을 두고 있는 자녀의 성에 아들만 2명 또는 아들과 딸을 각각 1명씩 두고 있는 경우에 비해 높은 성비를 보이고 있다. 자녀를 출산하는데 있어서 처음에는 아들ㅇ르 기다리지만 딸의 수가 증가함에 따라 적극적으로 아들을 낳고자 하는 노력을 지속하게 됨을 알 수 있다. 이는 즉 임신한 자녀의 성이 딸로 판명되면 인공임신중절을 통해 임신을 종결시키고 있음을 의미한다. 최근 한국보건사회연구원에서 수행한 연구결과에 의하면 이미 출생한 자녀의 성구성은 임신결과를 결정하는 가장 중요한 변수로 부각되고 있다. 즉 임신이 인공임신중절로 귀착되는 확률은 부모가 이미 아들을 두고 있는 경우에 일관성 있게 증가되고 있음을 보이고 있다. 따라서 남아선호관은 임신결과를 결정할뿐 아니라 선택절 인공임신중절에 의한 성비의 불균형을 초래하는 주요 변수로써 할거되었다. 특히 피임실천이 보편화되고 선택적 인공임신중절의 이용이 손쉬운 현대사회에 있어서는 남아선호관이 출산력 저하에 저해요인으로서가 아니라, 인위적이던 자연적이던 간에 아들만 두면 단산하는 현행의 출산풍토하에서는 남아선호관이 오히려 출산력저하에 결정적으로 작용하고 있다고 하겠다. 태아의 성 판별을 통한 선택적 인공임신중절의 건수는 1990년 한해에 약 20,000건 정도가 되고, 1986-1990년 사이에 총 80,000건으로 추정된다. 이 수치는 출생한 여아수의 5%에 해당한다. 현재 출생시 성비의 불균형은 연간 총출생수의 10% 미만에 불과한 3번째 이상의 출산에서 발생되고 있기 때문에 인구학적인 측면에서는 큰 문제가 아니다. 그러나 앞으로 출산율의 감소와 더불어 선택적 인공임신중절이 년간 출생수의 90% 이상을 차지하고 있는 둘째, 첫째출산순위로 확산된다면 성비의 불균형은 급진적으로 가속화되어 전통적 결혼관습의 재연등 인간의 생태계를 파괴하는 새로운 차원에서의 사회인구학적인 문제가 야기될 것이다. 결론적으로 성비의 불균형을 초래하는 근본적인 원인은 우리 나라으 전통적인 의식구조인 남아선호관의 상종과 최신의 의료기술에 의한 선택적 인공임신중절에 기인된 것이기 때문에 이를 시정하기 위한 제반 사회제도적 극복정책은 지속적으로 강화되어야 할 것이다.되어야 할 것이다.