This research investigated the effect of pH of dyebath and dyeing temperature on the dyeability of indigotin and indirubin on silk as well as the relationship between the amount of indigotin and indirubin detected from the dyed silk through HPLC-DAD analysis and the color of samples measured using a spectro-colorimeter. Indigo standard dye and indirubin standard dye were deliberately mixed by ratios 100:0, 80:20, 60:40, 40:60, 20:80, and 0:100 to dye silk with a different pH of dyebath (7, 11) and different dyeing temperatures ($50^{\circ}C$, $70^{\circ}C$). The amount of indigotin and indirubin pigments in silk was calculated using regression equations obtained from standard calibration curves of indigotin and indirubin. A higher indigotin percent ratio resulted in the higher K/S values and the higher amount of indigotin detected from silk. However, higher indirubin percent ratio in the mixed dye did not relate to the higher indirubin pigment detected in silk. While indirubin showed low or negative contribution to the K/S values, it showed a higher effect on the color of dyed silk. Higher amounts of indirubin in dyed silk resulted in a darker PB color, which led to P color with increases in indirubin content.
전통적인 니남쪽염료 제조법을 기준으로 굴껍질가루 대신 칼슘하이드록사이드를 사용하여 천연인디고분말염료를 만들었다. 제조한 인디고분말염료에 대한 텐셀의 염색성을 몇 가지 실험조건에서 조사하였으며 염색견뢰도를 측정하였다. 제조한 인디고분말염료는 약 15.5%의 인디고 성분과 0.757%의 인디루빈 성분을 함유하는 것으로 분석되었다. 환원과 염색을 자동염색기로 one-step으로 하였으며 환원제로 소디움하이드로설파이트를 사용하였다. 최대염착량은 $60^{\circ}C$에서 얻었으며 초기 20분 동안에 염착이 거의 이루어졌다. 본 연구의 실험조건 범위에서는 염료농도 4g/L까지는 2g/L의 환원제 농도에서, 염료농도 8g/L에서는 3g/L의 환원제 농도에서 최대염착량을 보였다. 텐셀은 염욕에 가성 소다를 넣지 않고 pH 5.75에서 염색할 때 훨씬 높은 염착량을 나타냈다. 염색견뢰도는 4/5-5등급으로 대체로 우수하였으며, 염착량이 낮을수록 더 높은 광퇴색을 보였다.
향상된 인디고이드 생산능력을 갖는 코리네박테리움 유래의 변이 플라빈-함유 모노옥시게나제(cFMO)를 개발하기 위하여, cFMO 효소의 상동성모델을 이용하여 말토오스-결합단백질(MBP)과 융합된 4가지 변이체(F170Y, A210G, A210S, T326S)를 제작하고 그 생화학적 특징을 밝혔다. 정제된 MBP-T326S는 최적 활성을 위하여 야생형보다 고농도의 FAD ($100{\mu}M$)를 요구하며, $100{\mu}M$의 FAD 첨가조건에서 $k_{cat}/K_m$이 3.8배 증가되었다. 인돌 옥시게나제 활성은 야생형의 63-77%를 나타냈다. MBP-T326S는 기질이 존재하지 않을 경우 쓸모없는 NADPH 산화효소 활성이 매우 낮은 수준을 보여주었다(21-24%). T326S이외의 변이 단백질들은 야생형에 비하여 $K_m$은 비슷하며 $k_{cat}/K_m$은 증가하였다. MBP-F170Y와 -A210S 변이단백질은 인돌 옥시게나제 활성이 각각 3.1배, 2.9배 증가하였다. 2.5 g/l의 트립토판을 함유한 LB배지에서 인디고이드 생산을 시험했을 때, 야생형 cFMO를 함유한 대장균은 684 mg/l의 인디고와 104 mg/l의 인디루빈을 생산한 반면, T326S를 함유한 세포는 1,040 mg/l의 인디고와 112 mg/l의 인디루빈을 생산하였다. 이전의 결과인 Methylophaga 유래의 FMO를 발현하는 대장균에서 가장 높은 수준인 920 mg/l의 인디고를 생산한 것과 비교하면, 본 연구결과는 인디고 생산이 13% 높은 수준이였다. 상동성 모델링에 기반한 cFMO의 단백질공학은 인디고이드 생산균을 개발하는데 보다 더 논리적인 전략을 제시하였다.
Market available fermented indigo powders of Indian origin (FI1, FI2), Chinese origin (FC1, FC2), and raw indigo powders of Indian origin (R1, R2) were examined using TLC and HPLC analyses to investigate their pigment contents. TLC analysis gave $R_f$ values of 0.81 and 0.72 for blue and red pigments, respectively. All the powder products and the synthetic and natural indigo standards eluted at 6.9 min and 8.3 min in the HPLC chromatograms, and the peaks showed the ${\lambda}_{max}$ at 610nm and 542nm, representing indigotin and indirubin, respectively. The pigment content calculated based on the area of indigotin and indirubin peaks in the HPLC chromatograms showed that the indigotin content was higher in FC1 and FC2, while FI1 and FI2 had a higher indirubin content. The relative percentage of indirubin was the highest in R2, but the HPLC peak intensity was quite low. Despite the higher indigotin content in FC1 and FC2, cotton dyed with FI1 and FI2 (versus cotton dyed with FC1 and FC2) showed a higher blue (B) hue, the highest K/S values, and the highest antimicrobial effect.
쪽풀 생잎에서 우려낸 색소 액에 소석회를 첨가한 후 쪽풀 색소의 침전물을 만들어서 냉동 건조시켜 쪽풀 색소를 제조하여, 그 성분을 조사한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. UV분광광도, TLC 정성 분석, HPLC 측정 결과 쪽 분말 용액의 2개 bend가 나타났으며, 적색색소대인 540nm 와 청색 색소대인 620nm가 존재함을 알 수 있었다. 2. FT-IR 분석으로부터 $1627cm^{-1}$에서 채, $3200{\sim}3300cm^{-1}$에서 NH의 흡수대가 나타나고, 적색 및 청색 색소의 IR spectrum이 일치하였으며, 3. EI-mass 분석 결과 청색과 적색 색소의 fragment 이온의 m/z가 일치하고, $^1H_MNR$ 분석결과로부터 두 색소는 이성질체임을 알 수 있었고, 4. 쪽 염료 성분 함량을 조사한 결과 인디고 색소 4.06%와 인디루빈 1.06%이었다.
전통 쪽 염료제조 및 염색 방법을 개선하기 위하여 시험한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 전통 족 염료 제조에 사용하는 꼬막껍질태운가루의 3 g/l 넣을 경우의 수용액의 pH 12.30 정도이었다. 2. 쪽 풀을 2일간 물에 침지를 하였을 경우가 염료의 K/S 값이 2.49로 가장 높았고, 명도 값이 5.03으로 가장 낮았으므로 색상이 가장 짙었다. 3. 볏짚 잿물과 꼬막 껍질 태운가루 양과의 관계를 염료 염색 상태를 보았을 때 3일째부터 염색이 되어5일 째까지의 염색이 가능 하였다. 4. 발효 온도 별로 꼬막껍질 태운가루의 사용량에 따른 발효 상태를 본 결과는 $30^{\circ}C$에서 발효할 경우 3~4g/l일 경우가 K/S 값이 가장 높았다. 5. 쪽 염료 발효 시 사용한 물엿 양은 20 g/l을 사용한 구가 염색 직물의 K/S값이 가장 높은 3.10이었으며, 염색 온도는 $30$~$50^{\circ}C$에서 비슷하며, 염료의 구성 성분도 인디루빈과 인디고 2개의 색소로 구성되었다. 6. 염료의 색소 및 염색 직물의 항균력은 99.8%로 우수하였고, 색소간의 차이는 없었으나 소취성은 sodium hydrosulfite(개선)첨가 발효 방법이 높았다.
방향족 화합물은 화학, 식품, 고분자, 화장품, 의약 산업 등에 이용되는 중요한 물질로, 현재까지 대부분 화학 합성법 또는 식물 추출법으로 만들어진다. 그러나, 화석 연료의 고갈, 지구 온난화, 환경규제의 강화, 식물자원의 과다한 채취 등의 많은 위협요인에 직면하면서 재생 가능한 생물자원을 이용한 미생물을 이용한 생물공학적 방법으로 방향족 화합물을 생산하는 것은 매우 유망한 대안이다. 대사공학이 합성생물학과 접목되면서, L-트립토판 생합성 경로 유래의 인공 생합성 경로가 재 구축되어 5-히드록시트립토판, 세로토닌, 멜라토닌, 7-염화-L-트립토판, 7-브로모-L-트립토판, 인디고, 인디루빈, 인돌-3-초산, 바이오라세인, 데옥시바이오라세인과 같은 다양한 고부가 화합물을 생산할 수 있게 되었다. 본 총설은 이러한 방향족 화합물의 특성, 용도, 생합성 경로를 요약하였다. 또한 방향족 화합물을 미생물을 이용하여 생산하기 위한 최신의 대사공학 전략과 생산 농도를 올리는데 제기되는 문제들을 극복하기 위한 해결방안 등을 정리하여 보고한다. 시스템 대사 공학에 기반한 균주 개발과 재생 가능한 생물자원을 사용한 배지 및 생물공정의 최적화가 이루어지면 방향족 화합물의 미생물 생산을 위한 상업적으로 실행 가능한 기술 개발을 가능하게 할 것으로 예상된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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