본 연구는 zerumbone이 단구의 유주에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 진행되었다. 단구는 다양한 염증 질환의 중요한 매개자로 인식되고 있으며, 활성, 유주 등 단구의 기능 조절을 통해 염증 질환을 조절하는 가능성이 보고 되고 있다. 염증 발생 시 증가하는 케모카인인 MCP-1에 의해 단핵구 세포주 THP-1의 유주가 유발되는 것을 확인하였다. 10 ng/mL의 농도에서 유주가 발생하였으며, 100 ng/mL과 200 ng/mL의 농도에서 가장 높은 유주 현상이 나타났다. MCP-1에 의해 유발된 THP-1 유주는 zerumbone 존재 시 50% 이상 감소하였다. MCP-1 수용체인 CCR2 신호전달 과정의 중요 2차 전달자인 cAMP의 배양액 내 농도는 zerumbone 단독 처리 시 세포 단독 배양 조건에 비해 증가하였으며, MCP-1 단독 처리 시에는 의미있게 감소하였다. 그러나, zerumbone과 MCP-1을 동시에 처리했을 때에는 다시 cAMP의 증가가 관찰되었다. MCP-1 처리에 의해 일어나는 Erk 인산화도 zerumbone과 동시 처리 시 감소하는 결과를 확인했다. 본 연구는 염증성 질환에 중요한 매개자로 인식되고 있는 단구의 유주 현상을 조절하는 zerumbone의 가능성을 보여준다.
김 붉은갯병은 김 엽체에 난균류 Pythium속의 Pythium porphyrae의 기생에 의해 발생되어 매년 김 양식에 큰 피해를 주는 매우 심각한 김 갯병중의 하나이다. 최근에는 이들 병해의 발생 및 억제를 위한 김 산처리제 (활성처리제) 남용에 따른 연안 양식어장의 생태계 파괴 및 김의 자연식품에 대한 이미지 훼손 등의 문제점이 대두되고 있다. 따라서 본 연구에서는 김 양식시 발생되는 붉은갯병의 병해를 억제하고자 활성처리제 처리시 고염분해수 처리를 병용함으로써 활성처리제의 사용을 최소화하면서 처리효과를 배가시키고자 하였다. 시험에 사용한 김 엽체는 2002년 10월에 전라남도 해남군 황산면 지선에서 채묘한 방사무늬김 (Porphyra yezoensis)을 육묘해 엽장 1cm 내외에서 냉동망을 제작하여 -2$0^{\circ}C$에 저장한 엽체를 자연해수 (약 27$\textperthousand$), 15$^{\circ}C$, 100$\mu$mol photon m$^{-2}$ s$^{-1}$, 광주기 9L : 15D의 배양조건하에서 15일간 배양한 엽장 3-4cm 정도의 것이었다. 활성처리제와 고염분해수처리제의 병용에 의한 붉은 갯병 억제효과는 붉은갯병 병원균의 유주자를 김 엽체에 감염시킨 후 27$\textperthousand$의 자연해수에 12일간 배양하면서 염분농도를 3-25%, 처리주기를 1-2회로 하여 각 시험구별 병해정도로 평가하였다. 고염분해수 처리에 의한 붉은갯병균 균사의 생장억제 효과는 김 엽체를 붉은갯병 병원균의 유주자로 감염시킨 다음 감염 12시간 후 염분농도를 3-25%로 처리한 후 27$\textperthousand$의 자연해수에 4일간 배양하면서 각 시험구별 배양시간에 따른 병원균 균사에 의한 김 엽체의 감염세포수로 평가하였다. 활성처리제와 고염분해수처리제의 병용이 김 엽체 생장에 미치는 영향은 건전한 김 엽체의 절편을 27$\textperthousand$의 자연해수에 배양하면서 시험구별로 활성처리와 고염분해수 (5, 10, 15, 20, 25%) 처리를 3일 간격으로 하면서 12일간 배양한 후 엽체의 엽면적 증가율로 평가하였다. 활성처리제와 고염분해수처리제의 병용에 의한 붉은갯병의 억제효과는 대조구 (활성처리 1회)와 비교해 주 2회의 활성처리구와 염분농도 20, 25% 처리구에서 병해 억제효과가 월등히 높았다. 고염분해수 처리에 의한 붉은갯병균 균사의 생장억제 효과는 염분농도 5, 10% 처리구의 경우 무처리구에 가까운 감염세포수를 보였으나, 염분농도 20, 25% 처리구의 경우 활성처리제 처리와 비슷한 감염세포수를 보여 뚜렷한 생장 억제효과를 나타냈다. 활성처리와 고염분해수 처리의 병용이 김 엽체 생장에 미치는 영향은 대조구 (활성처리 1회)의 3.4배 생장율과 활성처리와 염분농도 5-20%의 고염분해수 병용 처리구의 3.1-3.6배 생장율은 유의한 생장차이를 보이지 않았다 (P<0.05).
P. mirabilis 로부터 정제한 cysteinylglycine 분해효소의 성질 및 세포내 국재성을 검토하였다. 본 효소의 일반적 성질은 pH가 7.3 온도 37$^{\circ}C$에서 최대 활성을 냐타내었으며 pH 8.0에서 안정하였고, 열안정성은 $50^{\circ}C$, 30분처리에 30%의 활성 손실을 보였다. 또한 $Mn^{+2}$이온과 $Mg^{+2}$ 이온에 의해 활성이 촉진되었으며 본 효소를 반응전 30분 Preincubation 하므로서 최대 활성을 보였다. 본 효소는 glutathione 일단계 분해효소인 ${\gamma}$-glutamyl transpeptidase와 마찬가지로 세포내의 periplasmic space에 존재하였다.
토양에서 분리한 알카리 내성 Bacillus sp. YA-14 의 promoter를 Bacillus promoter probe vector인 pPL703을 이용하여 Bacillus subtilis내에 cloning 하였다. 얻어진 형질전환체 중 promoter 활성이 가장 높은 균주의 CAT 비활성은 8.07로 expression vector인 pPL708의 CAT 비활성보다 2.5배 이상 높았으며 대수 증식기가 끝난 이후에 그 활성이 급격하게 증가하였다. 재조합 plasmid내의 삽입 DNA 단편은 그 크기가 2.8kb이고 제한효소 BamHI, Sal I 인식부위가 각각 한군데 존재하였다.
알카리 내성 Bacillus sp. YA-14의 chromosomal DNA로 부터 유래된 promoter를 subcloning하여 그 생화학적 특성과 포자형성과의 관계를 조사하였다. 알카리내성 Bacillus sp.와 B.subtilis에서 promoter의 활성은 포자가 형성되기 시작하는 단계에서 증가하기 시작했다. 또한 배지내 glucose가 1.0(w/v) 첨가시 promoter 활성이 억제되었다. 5가지의 spoO 유전자 중에서 3가지 유전자 (spoOB, spoOH, spoOJ) 산물이 promoter 활성에 필요하다.
항생물질과 RNA 분해효소를 동시에 생산하는 방선균의 한 균주를 토양으로부터 분리하여 이 균주가 생산하는 RNA 분해효소의 물리화학적 성질 및 분해산물에 대해 검토하였다. 효소반응의 최적 pH 및 온도는 명명 pH 5.6과 $50^{\circ}C이었다.$$37^{\circ}C$ 에서 90분간 열처리 시켰을 때, 이 효소의 활성은 비교적 안정하였지마는 $50^{\circ}C$ 에서 90분간 열처리 시켰을 때는 효소활성이 심하게 저하되었다. 이 효소의 활성은 $Ba^{2+}$ 에 의하여 50% 정도의 저해 작용을 나타내었지만 EDTA에 의해서는 저해되지 않았다. 이 효소에 의한 RNA분해로 이 효소가 대사산물로서 guanosine, adenosine과 밝혀지지 않은 두 가지의 핵산관연물질을 생산함을 알 수 있었다. 제2보에서는 ENase의 효소학적 성질을 검토하였으며 이후 항생물질 측면에서 검토할 예정이다.
흙으로부터 분리된 곰팡이 144주와 식품공학과에 보존하고 있는 곰팡이 60주로부터 121주가 endo-polygalacturonase의 활성을 나타냈다. 그 중 효소생산이 좋은 Aspergillus sp. A-2를 선정하여 배양생산된 효소에 관하여 연구한 결과는 다음과 같다.(중략)
1) 모든 처리에서 공히 가장 낮은 농도에서 약해를 유발한 계면활성제는 LE, NP, LN, SDSS, PAAS 및 DBC였으며, Tween, Span, SP, SC, STPP 및 CLIS 등은 고농도에서 약해유발이 가장 적었다. 2) 논담수상태에서는 음이온계면활성제가 비이온 계면활성제보다 낮은 농도에서 약해를 유발하였으나 그 밖의 처리에서는 거의 유사한 경향이었다. 3) 벼와 피는 약해에 있어서 거의 동일한 반응을 보였으며 각 초종간에 반응의 차이는 거의 없었다. 4) 밭상태와 건답상태의 발아전 처리에서는 10%이상의 고농도 시료에서도 약해유발이 매우 적었으나 논담수상태의 발아전 처리에서는 모든 처리 중 가장 낮은 농도에서 약해가 유발되었다.
PAF (Platelet-activating factor: 혈소판 활성화인자)는 1972년 Benveniste등에 의해 토끼의 호중구 배양 상청액중에서 발견되어 1979년 그 구조가 1-alkyl-2-acethyl-sn glycero-3-phosphocholine의 구조를 갖는 에테르형 인 지질임이 밝혀졌다. 그후 혈소판 이외 과립구, 단구나 macrophage, 혈관내피세포등 조직의 염증담당세포가 다양한 자극에 응하여 PAF를 생성됨이 보고되었다. PAF가 나타내는 대표적 활성으로는 혈소판, 호중구, 단구들의 활성화, 호중구의 유주 활성, 혈관투과성 항진, 혈압강하작용. 기관지 수축 등이 알려졌으며. 또한 염증, 알러지, 천식 endotoxin shock 등 여러질병에 직·간접적으로 관여함이 알려졌다. 이와같은 여러 생리 현상은 PAF의 특이적수용체를 개재하여 일어난다는 것이 밝혀졌다. 따라서 PAF의 다양한 질병의 관여가 밝혀짐으로서, PAF길항제의 개발이 활발히 진행되어왔다. 지금까지 PAF길항제의 개발은 PAF 구조 유사체. benzodiazepam유도체, thiazole유도체 등과 같은 합성품과 ginkolide, kadsurenone과 같은 천연물 유리의 것이 알려져 in vivo model에서도 그 효능이 확인되었다. 본 연구는 이와 같은 배경에서 20여 종의 생약에서 PAF 길항제를 검색하던 중 5종류의 생약에서 PAF 길항작용을 갖는 분획을 찾았기에 이에 보고한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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