두릅나무의 엽병을 1.0 mg/L 2,4-D가 포함된 MS 고체배지에서 배발생캘러스를 유도하였다. 배발생세포와 배발생세포괴는 1.0 mg/L 2.4-D가 포함된 MS 액체배지에서 배발생캘러스를 2주간 현탁배양하여 대량으로 얻었다. 그물망을 통과한 배발생세포는 1.0 mg/L 2.4-D가 포함된 MS 액체배지에서 배양하면 배발생능이 소실되지 않고 지속적으로 유지 및 증식시킬 수 있었다. 그물망을 통과하지 못한 배발생세포괴를 식물생장조절물질이 첨가되지 않은 1/2 MS 액체배지에 옮겨 2주간 배양하면 구상형의 체세포배로 발달하였다. 구상형의 체세포배는 5 L의 bioreactor를 이용하여 배양하면 심장형, 어뢰형, 자엽형의 배와 유식물체로 발달하였다. Bioreactor 배양을 통해 두릅나무의 체세포배를 효과적으로 대량증식 시킬 수 있었다.
본 연구는 체세포배를 통해 증식된 서울오갈피(Eleutherococcus seoulensis)의 기외 대량 묘목생산을 위한 최적의 조건을 구명하기 위해 수행되었다. 어뢰형의 체세포배는 $GA_3$가 각각 3.0 mg/L와 5.0 mg/L가 첨가된 1/3 MS와 WPM 배지에 치상하여 4주간 발아시켰으며 발아된 유식물체는 0.2% 활성탄과 1.0 mg/L $GA_3$가 첨가된 1/2 SH 배지에 옮겨주어 신장을 유도하였다. 신장된 유식물체는 대기순화 효과를 관찰하기 위해 membrane filter가 부착된 대기순화 용기에 치상하였다. 대기순화 처리와 더불어 토양의 종류가 야외순화에 미치는 영향을 살펴보기 위해 혼합토(펄라이트+피트모스), 펄라이트, 서울 남산상토에 이식하였고, 서울 남산상토에서 대기순화 과정을 거친 식물체가 8주 후 70% 이상 생존하였다. 토양순화 과정을 거친 묘목은 야외 묘포장에 이식하였고, 그 결과 8주 후 95% 이상생존하였다.
작물의 방사선 감수성에 대한 영양결핍 효과를 구명하고자 몇 가지 양분이 결핍된 영양액으로 사경 재배한 수도 유식물체에 ${\gamma}$선을 조사하고 30일간 재배하여 그 생육상태를 조사한 결과는 다음과 같다. 양분 결핍으로 재배된 수도 유식물체는 양분 전량 첨가된 대조구에 비해 초장과 생체중이 크게 감소되어 방사선 감수성이 증가됨을 보였다. 그 효과는 영양소와 수도 품종에 따라 다르게 나타났는데 일품벼에서는 철결핍이, 태백벼에서는 인산 결핍이 유의성 있는 방사선 감수성 증가효과를 보였다. 방사선 조사량에 따른 효과는 저선량인 20Gy 조사구의 경우 일품벼는 철과 아연 결핍구가, 태백벼에서는 인산과 아연결핍구가 생장 저해가 높았으나, 80Gy 조사구에서는 일품벼와 태백벼 모두 인산과 칼슘결핍구가 방사선 감수성이 높았다.
기내에서 무균 발아시킨 오이 유식물체의 자엽절편과 하배축으로부터 기관발생 및 체세포배 발생 경로를 통한 식물체 재분화 시스템을 개발하였다. 자엽절편을 1,0mg/L zeatin과 0.1mg/L IAA가 첨가된 MS 배지에서 4주간 배양하였을 때 사용한 모든 품종에서 부정아의 형성이 가장 양호하였다. 자엽절편의 기저부에서 유도된 부정아를 0.2mg/L IAA가 첨가된 MS 배지에 이식하여 뿌리를 유도하여 완전한 소식물체로 발달시켰다. 한편, 하배축을 약 5-10mm 크기로 절단하여 1.0mg/L 2,4-D가 첨가된 MS 배지에서 배양하였을 때 낙합계 품종에서 배발생 캘러스가 유도되었다. 같은 조건의 배지에서 2-3주 간격으로 계대배양을 실시하면서 배발생 캘러스만을 선발하여 유지 및 증식시켰다. 배발생 켈러스를 2,4-D가 첨가되지 않은 MS 배지에 옮겨 배양하였을 때 약 1주 후부터 배발생 캘러스로부터 구상형 시기의 체세포배가 발생하였다. 그리고 이들은 심장형, 어뢰형 및 자엽기 시기를 거처 발아하여 소식물체로 발달하였다. 자엽절편 및 하배축 배양으로부터 유도된 소식물체는 잎이 2-3장 정도 되었을 때 화분에 옮겨 온실에서 순화시켜 과실을 얻을 수 있는 완전한 식물체로 재분화시킨다.
발아후 일주일간 생육한 보리 유식물체를 이용하여 혐기처리, 저온처리 및 기계적 상처에 대한 보리 식물체의 반응양상을 유리아미노산과 유리당 함량의 변화를 분석하여 조사하였다. 혐기적처리에 반응하여 함량의 변화가 뚜렸하게 나타나는 아미노산은 alanine, GABA, glutamic acid였다. Alanlne과 GABA함량은 10시간까지의 혐기처리에 의해 급속히 증가하였으나 glutamic acid 함량은 크게 감소하는 경향을 나타내었다. 상처에 의한 alanine, GABA, glutamic acid반응 양상은 혐기처리와 유사하였으나, 함량변화 정도는 혐기처리에서 보다 훨씬 낮았다. 저온처리에 의하여 지상부와 뿌리 중의 GABA 함량이 증가하였다. 혐기적 처리에 의하여 지상부의 유리당함량이 변화하였으며, glucose나 fructose보다는 sucrose의 함량변화가 상대적으로 크게 나타났다
울금의 기내대량번식을 위한 경정배양에 알맞은 기본배지의 종류와 기내증식 및 생장에 미치는 식물생장조절제의 농도를 구명하고자 본 실험을 수행한 결과는 다음과 같다. 울금의 경정은 MS(Murashige and Skoog)기본배지에 치상한 경우 Wanspojen, LS, White 배지보다 shoot와 root의 형성율이 높은 경향이었다. 기내의 유식물체 생장은 오옥신(NAA 0.5-l.0 $\textrm{mg}/\textrm{l}$)과 사이토키닌(BA 1.0-5.0 $\textrm{mg}/\textrm{l}$) 혼용처리가 효과적이었다.
유용약용식물의 배발생세포를 MS (murashige and Skoog) 액체배지에서 배양하여 균일하게 대량으로 증식시키고, 이들이 체세포배과정을 거처 유식물체로 발달시키는 기술을 개발하였다. 이 방법에 의해 일부 귀중한 약용식물은 공장생산이 가능하게 되었고, 싼가격에 약용식물의 유용성분을 추출하여 건강식품, 음료, 차, 의약품 및 화장품의 원료로 사용할 수 있다.
Mature zygotic embryos dissected from ginseng(Panax ginseng C. A. Meyer) seeds were cultured on Murashige and Skoog's (MS) medium containing various concentrations of 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid(2, 4-D) and kinetin. Somatic embryos were induced directly from cotyledonary tissue or from intervening callus. The induction frequency of somatic embryos was up to 55%. Upon transfer to half-strength MS medium supplemented with 1 mg/1 6-benzyladenine(BA) and 1 mg/1 GA3, most somatic embryos developed into plantlets. Over 50% of the plantlets flowered after 4 weeks of culture and then a few bore immature fruits in vitro. Therefore, it is suggested that the juvenility of the ginseng tissue which give rise to somatic embryos does not interfere with in vitro flowering of their regenerated plantlets.
Secretory ducts in the stem of Panax ginseng seedlings are observed with light and electron microscopes to clarify development of the epithelial cells of secretory ducts. Secretory duct initial cell is developed from procambial cell which originated from initial cell is differentiated into ipithelial cell ofsecretory ducts. Intercellular space between the epithelial cells are gradually expanded and differentiated into duct lumen. Disintegrations of epithelial cells occur throughout all the stages of development. The cytoplasm of epithelial cells darken and the epithelial cell wall are lysed, preceding their disintegraton. In the epithelial cell organelles are scattered in the cytoplasm. Development of vcuoles are sparse at the early stage. Starch grains decreased gradually, while lipid droplets increased. Free ribosomes are distributed throughout the cytoplasm and secretory vesicles which originated from rough endoplasmic reticulum and Golgi complex are fused with the plasmalemma. These suggest that the cellular metabolism is active. Microtubules and plasmodesmata are typically observed in the thickened epithelial cell wall. Secretions are accumulated in duct lumen.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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