정자의 무분별한 이동을 충분히 억제하면서 운동성을 저해하지 않는 sucrose 층으로부터의 swim-up 분리체계를 구축하기 위하여, 정자의 이동에 장애가 될 수 있는 sucrose 층에 첨가되는 sucrose수준과 정자의 이동과 운동을 극대화시킬 수 있는 배양시간 및 sucrose 이중층의 형태를 조사하였던 바, 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. 10mM의 sucrose 층은 정자의 swim-up 이동을 억제하였다. 2. Sucrose 층을 이용하지 않은 swim-up 분리에서 25분간 배양후 회수된 정자의 수가 유의하게 증가되었다. 한편, sucrose 층을 이용한 swim-up 분리에서 10분간 배양후 회수된 정자의 수가 유의하게 증가되었으며 정자의 운동성도 유지되었다 3. Sucrose 이중층 Type I과 Type II 간에 장애효과에는 유의한 차이는 없었으나, 장애공간이 짝은 Type II 이중층에서 시료 채취가 편리하였다. 정자의 주화적 이동과 관련하여 난포액의 기능 을 밝히기 위하여, 난포액의 희석과 열처리 및 난포액으로부터 추출한 단백질과 지질이 Type II Sucrose 층으로부터 10분간 배양한 정자의 swim-up 분리에 미치는 효과를 조사하였던 바 얻어진 결과는 다음과 같다 4. 난포액은 정자의 이동과 운동을 자극하였고 수정능획득정자를 유인하였으며, 특히 10% 난포액에서 수정능획득정자의 유인효과가 가장 크게 나타났다. 5. 저온 열처리 (56$^{\circ}C$, 30분)는 정자의 이동과 운동을 자극하는 난포액의 효과를 감소시키지 않았다. 6. 난포액으로부터 추출한 단백질 성분은 정자의 이동을 자극하였으나, 단백질 성분의 여과는 정자의 이동을 자극하는 단백질 성분의 효과를 감소시켰다. 7. 난포액으로부터 추출한 지질 성분은 정자의 이동과 운동을 유의하게 자극하지 않았다. 8. 난포액으로부터 추출된 단백질과 지질의 병용처리는 정자의 이동과 운동을 자극하는 난포액의 효과를 감소시켰다. 결론적으로 정자의 swim-up 분리에 sucrose 이중층을 이용할 수 있으며, 난포액은 sucrose 층으로부터 정자의 이동과 운동을 자극하고 수정능획득정자를 유인하였다. 특히 열내성을 가진 단백질 성분이 정자의 이동을 자극하였다.
담수에서 사육한 감성돔 Acanthopagrus schlegeli(담수감성돔) 냉동/해동 정자의 생존율이 가장 높았던 결빙억제제(cryprotective agent, CPA)는 dimethyl sulfoxide(DMSO)였으며, 다음으로 glycerol, ethylene glycol(EG) 그리고 methanol 순이었다. 해동 후 정자운동성은 glycerol, DMSO, EG, methanol 순으로 높았으며, 이상의 결과들은 해수에서 사육한 감성돔(해수감성돔)에서도 나타났다. 담수 및 해수감성돔 정자의 냉동보존시 적정 CPA는 DMSO와 glycerol이었으며, 생존율과 정자운동성이 가장 높았던 적정 농도는 모두 10%였다. 특히 10% DMSO로 냉동보존한 담수 및 해수감성돔 해동정자의 생존율과 정자운동성은 10% glycerol로 냉동보존한 해동정자보다 높게 나타났다. 냉동보존기간에 따른 담수 및 해수감성돔 해동정자의 생존율과 정자운동성을 측정한 결과, 대부분 보존기간이 길어질수록 감소하였으며, CPA의 농도가 높을수록 생존율과 정자운동성은 급격히 감소하였다. 그러나 5% DMSO로 냉동보존한 해동정자의 생존율 및 정자운동성은 차이는 보이지 않았다.
정액 동결 방법들은 지속적으로 향상되어 왔지만 융해 속도에 대한 연구는 여전히 정립되어 있지 않다. 따라서, 본 연구의 목적은 동결 후 융해 속도가 정액의 기능에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 비글견으로부터 채취된 정액은 동결 보존 후 다른 융해 속도 ($37^{\circ}C$/1분 or $70^{\circ}C$/15초)에서 융해 되었다. 융해 후, 운동성, 생존성, 정상 형태율, 형질막 온전성, phosphatidylserine (PS) translocation, 세포내 $H_2O_2$ 수준을 평가하였다. $70^{\circ}C$에서 융해된 정자는 $37^{\circ}C$에서 융해된 정자에 비해 향상된 정자 운동성, 생존성, 정상 형태율, 세포막 온전성, non-PS translocation을 보였으나(P < 0.05), $70^{\circ}C$와 $37^{\circ}C$에서 융해된 실험군간 세포내 $H_2O_2$ 수준에서 유의적인 차이는 나타나지 않았다(P > 0.05). 결론으로, $70^{\circ}C$에서의 융해는 개 정자 동결 후 정자 기능을 증진시켰으며, 적절한 융해 온도는 동결 정자의 기능을 향상시킬 수 있을 것으로 판단된다.
토끼에서 bovine serum albumin gradients로 성(性)의 전선택(前選擇)이 가능(可能)한지를 알아보기 위하여 6%, 10% 및 20%의 농도(濃度)를 달리한 bovine serum albumin을 사용한 방법(方法)으로 고활력정자(高活力精子)를 분리수집하여 정자(精子)의 성상(性狀)과 분리된 정액(精液)의 인공수정시(人工授精時)에 있어서 자토(仔兎)의 성비(性比)를 비교관찰한 결과는 다음과 같다. 1. Bovine serum albumin을 사용하여 분리(分離)된 정자(精子)는 임신율(妊娠率)에 있어서는 대조군에 비해 높은 성적(成績)을 나타내었으나, 자토(仔兎)의 성비(性比)에 있어서는 변화를 일으키지 못하였다. 2. Bovine serum albumin에 의해 분리(分離)된 정자(精子)는 대조군에 비하여 운동성(運動性), 정상정자율(正常精子率) 및 전진운동성(前進運動性)이 현저히 높았으며, 정자회수율(精子回數率)은 6%일 때 가장 높았다. 3. 원정액(原精液)으로부터 bovine serum albumin을 사용하여 고활력정자(高活力精子)를 분리(分離)한 후(後) 냉동(冷凍)한 정액(精液)의 융해후(融解後) 정자운동성(精子運動性), 정상정자율(正常精子率) 및 전진운동성(前進運動性)은 대조군에 비하여 현저히 높았다.
채취한 정액에 대하여 희석액의 배율을 달리하고 보존온도를 다르게 하여 3시간 보존 후 정자의 운동성 및 수정률을 조사한 결과, 정자 운동성은 5$^{\circ}C$ 냉장보존 온도에서 희석배율에 따른 차이를 보이지 않았으나, $25^{\circ}C$ 상온보존에서는 정액과 희석액이 1:1 희석배율보다 1:3 및 1:6 희석배율이 정자 운동성이 현저히 높았고(P<0.05), 35$^{\circ}C$ 고온보존에서도 1:1 희석배율보다 1:3 및 1:6 희석배율이 정자 운동성이 현저히 높은 것으로 나타났다(P<0.05). 5$^{\circ}C$에서 3시간 냉장보존 후 인공수정을 하였을 때 1:1~1:6의 희석배율에 따른 수정률의 차이를 보이지 않았고, $25^{\circ}C$ 상온보존에서도 희석배율에 따른 수정률의 차이를 보이지 않았으나, 35$^{\circ}C$의 고온보존에서는 1:1 희석배율보다 1:3 및 1:6 희석배율에서 수정률이 현저히 향상되었다(P<0.05). 이상의 결과로 보아 여름철 고온시는 1:1의 희석배율보다는 1:3 이상의 희석배율을 사용함이 좋을 것으로 사료된다.
목 적: 보조생식술에서의 정자처리법으로서 인간 난포액을 이용한 swim-down 방법의 유용성을 확인해 보고자 하였다. 연구방법: 분당서울대학교병원 산부인과에서 불임평가 목적으로 정액검사를 시행할 때 정자무력증 (asthenozoospermia, sperm motility < 50%)을 보이는 12명의 남성을 대상으로 하였다. 이들에서 검사 후 남은 정액을 100% 인간 난포액을 이용한 swim-down법과 SpermGrad를 이용한 밀도차 분리법을 적용하여 각각 처리하고 컴퓨터 정액분석기를 이용하여 정액검사를 시행하였다. 결 과: 두 군 모두에서 운동성과 빠른 운동성 정자의 비율, VCL (curvilinear velocity), ALH (amplitude of lateral head displacement)치 및 과활동성 정자의 비율이 통계적으로 유의하게 상승하였고 LIN (mean linearity)치는 유의하게 감소하였다. 100% 인간 난포액을 이용한 swim-down법에서 정자의 운동성이 SpermGrad를 이용한 밀도차분리법에 비하여 유의하게 높게 나타났으며 ($81.2{\pm}4.7$ vs. $67.6{\pm}2.3$, p=0.02), 다른 변수들은 두 군에서 차이를 보이지 않았다. 결 론: 100% 인간 난포액을 이용한 swim-down법은 정자무력증을 보이는 경우 유용한 정자 처리법으로 사료된다.
본 연구에서는 제주산마의 액상정액 및 동결정액의 성상 개선을 위하여 펜톡시필린 수준을 설정하여 정자의 운동성, 생존율, 정자막 온전성을 평가하였다. 말 동결-융해 정액의 30분 경과 후 정액성상 비교 결과 펜톡시필린 4mM(T1)처리구와 8mM(T2)처리구에서 Progressive Motility(PM)가 $53.25{\pm}2.87$, $50.28{\pm}2.14$로 $40.09{\pm}5.15$와 $41.27{\pm}2.82$인 대조구와 16mM(T3)에 유의적으로 높게 나타났으며(p<0.05), Progressive Fast Motility(PFM)도 펜톡시필린 4mM(T1)처리구와 8mM(T2)처리구가 각각 $22.44{\pm}1.62$와$ 22.74{\pm}3.07$로 대조구와 16mM(T3) 처리구의 $13.47{\pm}1.48$와 $14.66{\pm}3.68$ 보다 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05). 말 동결-융해 정액의 30분 경과 후 정액성상 비교 결과에서는 총 운동성(Total Motility)에서 T1와 T2가 $68.96{\pm}1.64$와 $67.90{\pm}6.72$로 $53.48{\pm}4.84$와 $58.14{\pm}2.65$인 대조구와 T3에 비해 유의적으로 높은 운동성을 보였다(p<0.05). 이상의 결과를 종합해 볼 때 펜톡시필린 4mM와 8mM를 처리했을 때 대조구보다 정자의 운동성을 증진시키는 효과가 있었으며, 펜톡시필린 16mM 이상의 처리에서는 정자 성상에 좋지 않은 영향을 미치는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 활성산소를 억제하는 효과가 액상정액 보존 과정에서 발생하는 ROS로부터 정자를 안정적으로 보호하는 것으로 판단되며, 동결-융해 정액의 펜톡시필린 처리구 4mM 첨가구에서 다른 처리구보다 융해 후 1시간 동안 총운동성이 약 10%가량 높은 경향을 나타내었다. 펜톡시필린 처리가 동결-융해 후 정자의 운동성을 10% 이상 개선시킨다는 Taylor 등(2013)의 보고와도 비슷한 경향을 보였으며, 펜톡시필린이 동결-융해 후 정자 운동성 향상 등 정자 성상을 개선하는 것으로 판단된다.
본 연구는 정액의 보존 기간 동안 정액의 질적 변화를 알아보고자 시행하였다. 돼지 정액을 Beltsville Thawing Solution (BTS)에 희석한 후 $17^{\circ}C$에서 5일 동안 보존하였다. 보존 기간 동안 정자의 운동성(%)과 linearity는 3일째부터 유의하게 감소하였으나, 다른 운동 역학 변수에서는 유의적 변화를 나타내지 않았다. 또한, 5일 동안 정액을 보존할 경우 첨체의 온전성에도 변화가 없었다. 그러나 제 4일째부터 첨체 변화가 야기된 정자는 유의적으로 증가하였으나, 수정능 획득이 일어난 정자는 유의적으로 감소하였다. 정액의 보존 기간 동안 첨체의 온전성의 유의적 변화가 없었다. 즉, 보존 기간 3일동안 정자의 질적 운동성 및 첨체 온전성에는 유의적인 변화가 없었으므로 상업용 돼지 액상정액은 $17^{\circ}C$에서 적어도 3일간 수정능력을 만족스럽게 유지함을 보여준다.
본 연구는 Hamster 정소상체 정자의 운동성에 영향을 미치는 methylxanthine derivatives 의 효과를 알아보고자 수행하였다 . Pentoxifylline 을 첨가하였을 때 운동 형태에 대한 첨가효과는 정소상체 체부에서 차이를 보였으며, 농도에 대한 변화는 1 mM 농도군에서 현저한 차이를 나타냈다. 2-Deoxya-denosine 첨가군에서도 pentoxifylline 첨가군과 같이 특히 VCL 이 정소상체 체부 정자부터 증가하였으며 다른 농도군에 비해 1 mM 과 2 mM 에서 차이가 났다. Hypoxanthine 첨가군은 1 mM 농도에서 다른 첨가군에 비해 운동 형태가 증가하였다. 그러나 pentoxifylline 과 adenosine 첨가군과는 달리 농도를 달리하여도 뚜렷한 운동형태의 변화는 관찰되지 않았다. VCL 과 VAP 는 pentoxifylline 1 mM 과 2-Deoxyadenosine 1 mM 첨가군에서 정소상체 체부 정자의 운동성이 증가하고 hypoxanthine 1 mM 첨가군도 유의하게 증가하였다. 결론적으로 hamster 정소상체 정자의 운동성은 적정한 농도의 methylxanthine derivatives 의 첨가로 증가됨을 알 수 있었다.
항정자항체의 종류 및 존재부위가 정액성상 및 수정능력에 미치는 영향을 조사하였다. 항정자항체의 종류 및 존재부위는 immunobead binding test에 의하여 시행하였으며, 정자와 수정능력은 투명대제거 햄스터 난자 침입법에 의하여 시행하였다. 항정자항체는 정자수, 운동성 및 운동지수에 악영향을 끼쳤으며, 수정능력에도 악영향을 끼쳤다. 항정자항체의 존재부위에 따른 차이는 보이지 않았다. 항정자항체 IgG가 정자두부 혹은 정자미부에 존재할 경우 및 항정자항체 IgA가 정자미부에 존재할 경우 수정능력을 크게 감소시켰다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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