속성 발효 및 기능성 멸치액젓의 제조에 사용할 수 있는 미생물 starter의 개발을 목적으로 전보에서 분리한 단백질 분해활성 및 혈전용해활성이 가장 우수했던 B. subtilis JM-3는 저온성 병원성 세균인 Listeria monocytogenes에 대한 항균활성이 가장 강하였으며, linoleic acid의 자동산화를 80%이상 억제하는 항산화활성을 나타내었다. 그리고 N-nitroso compound인 NDMA 및 NMO에 대하여서는 약 50%의 변이억제활성을 나타내었으며, SNU-1(사람의 위암세포)에 대하여 배양 원액 $20\;{\mu}L$를 첨가한 경우 88.9%의 높은 성장 억제율을 나타내어 기능성 멸치액젓 제조용 starter로서의 가능성이 확인되었으며, 앞으로 본 균주의 기능성 멸치액젓 starter로서의 이용을 극대화하기 위하여서는 돌연변이에 의한 호염성 변이주의 유전적 육종이나 형질 전환 방법 등을 응용한 호염성 미생물과의 접목을 통한 내염성 균주의 개발도 필요할 것으로 여겨진다.
목 적 : 과산화수소는 산화적 스트레스를 통해 아폽토시스를 유도하는 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 과산화수소로 유발된 신경아세포종 아폽토시스 과정에서 호도약침액의 효과를 관찰하였다. 방 법 : 과산화수소로 인한 신경아세포종의 아폽토시스에서 호도약침액의 효과를 알아보기 위해 배양 중인 신경아세포종에 과산화수소를 처리하고, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MIT)분석법, 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 염색법, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), western blotting의 방법으로 확인하였다. 결 과 : 과산화수소로 인한 신경아세포종의 아폽토시스에서 호도약침액을 처리한 결과, 약침액을 처리한 세포의 생존이 약 30% 정도 증가하고, 핵 응축과 단편화를 막아주며, CASP3와 BAX단백질의 발현이 감소되었다. 결 론 : 이러한 결과로 호도약침액이 과산화수소로 인한 신경아세포종의 아폽토시스과정에서 보호효과를 나타내는 것으로 사료된다.
액아가 포함된 줄기절편을 $0.5\;mgl^{-1}$ BA와 함께 IAA, NAA, 2,4-D를 농도별 $(1,2,3\;mgl^{-1})$로 조합한 MS기본배지에 치상하여 신초를 유도하였다. 액아로부터 신초의 형성은 $0.5\;mgl^{-1}$ BA와 $2;mgl^{-1}$ IAA를 혼합처리한 배지에서 57%의 효율로 가장 높게 나타났다. 신초로부터 발근은 MS배지에 IBA를 $1\;mgl^{-1}$를 첨가하였을 때 가장 좋았다. 발생한 root의 길이는 평균 4주 후 약 4 cm로 측정되었다.
위생환경이 좋지 못하고 보건사업의 혜택이 원활치 못한 지역의 소아 및 국민학동에게서 분리한 장내 세균 중 이열성 장내 독소생성 대장균주의 분포를 배양된 부신암 세포를 이용하여 살펴보았다. 이 열성 장내독소의 존재아래 부신암 세포는 세포의 원형화 및 seroid 생성력의 항진을 보이기에 이 두 성질에 기처를 두어 독소생선균주를 감별하였다. 실험의 결과 조사대상자의 약 10%에 해당하는 균주들이 독소 생성 균주로 밝혀졌다. 분리한 균주의 화학요법제에 대한 감수성 내지 내성도를 측정하였는데 특히 주목할 것은 이열성 장내독소 균주들의 대부분이 gentamycin(10mg)과 nalidixic acid(5mg)에 감수성이 있는데 비해, colistin(10mg), novobiocin(30mg), sulfa drug(50mg)에는 내성을 나타냈으며, 장내 질환에 널리 쓰이는 chloramp-henicol(10mg)에 대해서는 균에 따라 감수성 또는 내성을 보인데 있다. 이상의 조사로 우리나라 정상아동이 상당의 이열성 장내독소 생성균주를 보유하고 있음을 알수 있다. 이를 균주중 몇개는 장내질환 치료제로 널리 사용하는 항생제에 대해 내성을 지니고 있음을 볼 수 있었다.
유기산을 생산하는 발효미생물을 획득하기 위해 갯벌, 심해, 염전 등의 퇴적토와 해초시료 등의 시료에 대해 methanogen 배지, acetogen 배지, Clostridium용 배지 등을 이용하여 농후 배양을 실시하였다. 총 8개 시료로부터 65주의 혐기성 미생물을 분리하였으며 이 중 신규성이 높거나 활용성이 높다고 알려진 11종에 대해 계통분석, 성장 양식(growth pattern), 유기산 생산 평가 등을 시도하였다. 분석이 수행된 균주 중 Bacteroidia 강에 속하는 1주 외에는 모두 Clostridia 강에 속하였으며 성장속도는 $1.2h^{-1}$ 이상이었다. 분석이 수행된 7종 중 6종은 아세트산을 생성하였으며, 부가적으로 2균주는 부틸산을, 4균주는 개미산을 생산하였다. 또한 MCWD5 균주는 제공된 포도당의 약 40%를 세포외 고분자물질로 전환시키는 것으로 나타났다. 본 연구를 통하여 국내 연안해역에서 분리된 신규 혐기성 미생물들은 유기산, 고분자 다당류를 생산하는 등 높은 응용성을 지님을 확인할 수 있었다.
메주로부터 곰팡이 및 세균 등에 생육 저해활성을 나타내는 균주 B. polyfermenticus CJ6을 분리 동정하였다. 분리 균주 B. polyfermenticus CJ6는 2단 대수기를 나타내는 생육 곡선상 특이점을 나타내었으며 배양 30시간 이후부터 최대 활성을 나타내었고 사멸기 이후 활성이 다소 감소되었으나 120시간까지 활성을 유지하였다. B. polyfermenticus CJ6의 항진균 활성 물질은 $70^{\circ}C$ 이상에서 활성이 감소되었으나 $121^{\circ}C$에서 15분간 열처리 시 역가가 완전히 소실되지 않았다. pH 안정성 실험에서는 pH $3.0{\sim}9.0$ 구간에서 안정한 활성을 나타내었으며, 각종 효소에 대한 영향에서 항진균 활성물질은 proteinase K, protease, ${\alpha}$-chymotrypsin 등의 단백분해효소 처리로 역가를 상실하거나 일부 감소되어 단백질성 물질임을 추정하였다. 균주의 항진균 활성 물질을 $C_{18}$ Sep-Pak column으로 부분 정제한 후 Tricine-SDS-PAGE 및 direct detection 실험을 통하여 분자량이 약 1.4 kDa의 물질임을 확인하였다. B. polyfermenticus CJ6가 생산하는 항진균 활성 물질은 기존에 거의 보고되지 않은 B. polyfermenticus 유래의 단백질성 항진균 활성 물질로서 천연보존제 및 천연항균제재로 사용이 기대되며, 이를 위하여 항진균 활성 물질들의 정제 및 구조분석 등의 연구가 필요하다.
가열 살균을 대체하여 식품의 신선도를 유지하면서 효과적으로 미생물을 사멸시킬 수 있는 새로운 비가열 살균기술로서 고압 $CO_2$, 처리를 고찰하고자 하였다. 이를 위해 김치에서 분리한 Leuconostoc sp.를 대상 미생물로 가압 조절인자를 달리하여 이 균주에 미치는 고압 $CO_2$의 살균 효과를 검토하였다. 사용 압력과 온도, 처리시간이 증가할수록, 이에 반해 작업용량은 감소할수록 균체의 사멸율이 증가하였으며, $30^{\circ}C$, $60\;kg/cm^2$의 $CO_2$가압 조건에서 젖산균 배양액을 $10^{-3}$만큼 감균하는데 약 150분이 소요되었다. 실험 결과로부터 고압 $CO_2$에 의한 미생물 살균은 기본적으로 $CO_2$의 세포내 침투에 의해 좌우되며, 따라서 세포 내부로의 $CO_2$ 전달 과정이 전체적인 살균 효율을 결정짓는 가장 중요한 단계임을 확인할 수 있었다.
LeI은 스테로이드를 통울에 투여하였을 때 분비가 촉진되어 항염증성 효과를 나타내는 calcium 의 존성 phospholipid 결합 단백질이다. S. cerevisiae는 대장균과 통물세포의 장점을 모두 가지고 있으므로 동물세포 유래의 이종 단백질의 분비 생산에 많이 이용되고 있다. 본 연구에서는 GAL10 promoterp ppL-LCI유전자 LCI terminator로 구성된 pYGLPT5 로 LCI을 S. cerevisiae SEY2102에서 발현 분비시키고 각 분획으로 나누어 LCI양을 비교한 결과 protoplast 68.6 %. periplasmic 24 %, culture supernatant 7.4%로 분포하였다. pYGLPT5로 형질전환된 S. cereviswe 2102를 유가 배양한 결과, 최종적인 LCI의 생산량은 약 $500mg/\ell$ 였다. LCI은 N 말단 부근에 $CA^{++}$ 결합부위가 있으므로 이를 이용하여 hydroxylapatite column chromatography로 정 제하 였다. 배지로 분비된 34kDa LCI을 ultrafiltration 과 hydroxylapatite column chromatography 의 두 단계로 순도 99% 이상으로 정제할 수 있었다.
Cellulose 분해에 관련된 $\beta$-Glucosidase 효소 활성의 특성 파악을 위하여 송이균사(Tricholoma matsutake DGUM 26001)의 액체 배양시 세포외로 분비되는 $\beta$-Glucosidase 효소를 부분정제하여 그 특성을 조사하였다. 효소 활성에 미치는 적정 온도는 55-$70^{\circ}C$이었고 최적 온도는 $65^{\circ}C$이었다. 적정 효소활성에 영향을 주는 적정 pH는 3.0-5.0 범위였으며 최적 pH는 4.0이었다. Salicin을 기질로 최적 조건하에서 $\beta$-Glucosidase 효소의 비활성도는 18.7 unit/mg protein이었다. 열안정성은 $60^{\circ}C$이하의 온도에 60분간 열처리시 약 90%이상의 효소활성을 유지하였다. $Fe^{++}$이온은 효소활성을 촉진하였으나, $Hg^{++}$ 및 $Cu^{++}$이온은 효소활성을 매우 억제하였다. Salicin에 대한 효소활성을 100으로 하였을 때, cellobiose는 48.6%의 상대적 효소활성을 나타내었으며, cellobiose에 대한 Km값 및 Vmax값은 각각 0.12mM과 0.02umol/min었다.
가정에서 제조된 된장을 산성조건에서 계대 배양한 후 균체외 mannanase 를 생산하는 Bacillus sp. YB-1401를 분리하였다. 분리균의 당이용능을 비롯한 생화학적 특성은 Brevibacillus laterosporus와 유사도(61.1%)가 가장 높은 반면에 16S rRNA 유전자의 염기서열은 B. amyloliquefaciens와 유사도가 가장 높았다. 분리균 YB-1401의 mannanase 생산성은 mannans에 의해 급격하게 증가하였으며, 특히 곤약(4%)이 첨가된 배지에서 약 265 U/ml로 최대 생산성을 보였다. 분리균의 mannanase는 $55^{\circ}C$와 pH 5.5 반응조건에서 최대활성을 보였으며 pH 3.5-11.0의 범위에서 1시간 방치하였을 때 실활이 거의 일어나지 않았다. 또한 LBG와 guar gum 및 mannooligosaccharides를 mannanase로 분해하였을 때 주된 반응산물로 mannobiose와 mannotriose가 생성되었으며 mannose도 소량 생성되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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