• Title/Summary/Keyword: 약물전달

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신경전달물질 조절효소의 단항체 생성 및 특성연구

  • Choi, Eui-Yeol;Park, Sang-Ryul;Jang, Sang-Ho;Kim, In;Song, Min-Sun;Choi, Soo-Young
    • Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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    • 1994.04a
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    • pp.269-269
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    • 1994
  • GABA shunt에 관여하는 두 가지 효소인, GABA transminase와 Succinic semialdehyde reductase에 대한 단일 클론 항체를 생산하고 이들 항체의 특성을 살펴보았다. 소의 뇌에서 순수 정제된 효소를 동물에 주사한 후 immunodot-blot 분석법에 의하여 일차적으로 항체를 분비하는 hybridoma를 골라낸 후 생산된 단일 클론 항체가 특이적으로 이들 효소와 반응하는 가를 알아보기 위하여 Western blot 분석을 실시하였다. 뇌조직에서 추출한 총단백질을 SDS 전기영동법에 의하여 분리한 후 이들 항체를 처리한 결과, GABA-T에 대한 항체는 특이적으로 분자량이 50kDa에 해당하는 단백질 밴드만을 인지하였고 SSA reductase에 대한 항체의 경우 분자량이 34kDa 크기의 단백질 밴드와 반응하였다. 이들 분자량은 순수 정제된 소뇌의 효소 단백질의 크기에 해당하는 것을 확인하였다. 이들 소뇌의 효소에 대한 항체를 추적물체로 사용하여 다른 포유동물자 조류의 효소와 비교하는 cross-reactivity 연구를 수행하였다. 소, 돼지, 토끼, 쥐 (rat), 개, 고양이 그리고 닭의 뇌를 제거한 후 총단백질을 추출하고 Western blot을 해본 결과 GABA transaminase의 경우 조류를 제외하고 다른 포유동물에서는 같은 분자량의 단일 단백질 밴드를 확인하였고 SSA reductase의 경우 조류를 포함하는 모든 동물에서 같은 분자량의 밴드를 확인하였다 이상의 결과로 미루어 보아 포유류 뇌에 있는 이들 효소들은 변역학적으로 아주 유사하다고 사료된다.

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Changes of Specific Activity and Regulation of Nitric Oxide Synthase during Liver Regeneration after Partial Hepatectomy

  • Lee, Young-Jin;Nam, Suk-Woo;Seo, Dong-Wan;An, Sung-Whun;Ko, Young-Kwun;Sung, Dae-Seok;Han, Jung-Whan;Lee, Hyang-Woo
    • Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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    • 1996.04a
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    • pp.185-185
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    • 1996
  • Nitric oxide synthase(NO Synthase:E.C.1.14.13.39)는 생체내에서 L-arginine을 기질로 하여 citrulline과 nitric oxide(NO)를 생성하는 효소로서, 최근 연구에 의하면 2/3 부분 간 절제술 후 prereplicative phase동안에 발현되는 것으로 알려져 있다. 한편, 생체내에서 NO Synthase에 상경적 길항제인 methylarginine에 관해서도 수년간 많은 연구가 진행되어 왔다. 이들의 생성 기전은 protein methylation에 의해 생성된 methylated protein이 생체 내에서 분해되어 생성된다고 알려져 있으나, 정확한 기전에 대해서는 아직 논란의 여지가 많다. 따라서, 본 연구에서는 In vivo 실험을 통해 부분 간 절제술 후 시간대별로 간 조직에서의 NO Synthase 활성도와 혈청에서 NO의 최종 대사물인 Nitrite/Nitrate를 측정하였으며, 또한 NO Synthase 조절에 관여하는 세포내 기질인 arginine과 억제 인자인 methylarginine함량을 간 조직 및 혈청에서 측정하고, 세포 신호 전달체계에 관여하는 cyclic GMP 함량을 측정함으로써, 부분 간 절제술 후 간 재생동안에 NO Synthase 활성도와 methylarginine 및 arginine과의 상관 관계를 규명하고, 간 재생동안, 생성된 nitric oxide의 역할을 연구하려한다.

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Purification of Nitric Oxide Synthase from Bovine Pancreas

  • Nam, Suk-Woo;Seo, Dong-Wan;Lee, Young-Jin;Sung, Dae-Seok;Han, Jung-Whan;Lee, Hyang-Woo
    • Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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    • 1996.04a
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    • pp.184-184
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    • 1996
  • Nitric Oxide Synthase(NO synthase: EC.1.14.13.39)는 생체내에서 L-arginine을 기질로 하여 nitric oxide(NO)와 L-citrulline의 생성을 매개하는 효소로서 뇌, 간장, 신장, 체장등 대부분의 주요장기와 근육세포, 신경세포 등 거의 모든 조직에 분포하고 있다. NO synthase에 의해 생성되는 NO는 혈관이완작용, 신경전달 물질로서의 작용, 면역 담당세포에서의 세포 독작용 등 많은 생리현상에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히 체장에서는 췌외분비 기능의 항진에 있어 세포내 cGMP level의 변동이 NO와 연관된다는 사실에 주목하고 있으며 본연구실에서도 이에 관한 연구가 진행중이다. 따라서 본 연구에서는 소 췌조직의 100,000$\times$g cytosol을 효소원으로 하여 다음과 같이 NO synthase의 분리, 정제를 시행하였다. Ammonium sulfate로 30%(176g solid ammonium sulfate/$\ell$) 포화, 침전 후 2',5'-ADP agarose 및 calmodulin-agarose affinity chromatography를 연속적으로 시행하여 NO synthase를 분리하였으며 electrophoresis상에서 약 160kd의 분자량을 나타내었다.

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Effects of Temperature on the Rheology of Lecithin/CaCl2 Organogels (Lecithin/CaCl2 유기젤의 온도 영향에 대한 유변학적 연구)

  • Jung, Yeon-Geon;Lee, Hee-Young
    • Applied Chemistry for Engineering
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    • v.29 no.2
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    • pp.244-247
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    • 2018
  • Lecithin, a zwitterionic phospholipid, forms spherical reverse micelles in organic solvents such as decane. The addition of multivalent ions like calcium chloride to lecithin organosols induces the transformation of organosols into organogels. A variety of applications of such organogels were found in gelation of fuels, food processing and drug delivery. Here, we investigated the effect of temperature on their rheological properties. In particular, the organogels showed a distinct melting temperature (${\sim}95^{\circ}C$) and their elastic properties decreased with increasing temperature. This is maybe due to the fact that the electrostatic interaction between lecithin and calcium chloride could be weaken with increasing temperature.

후 시상하부의 심혈관계 조절기전(I): 흰쥐 후 시상하부에서 세포외액의 모노아민과 그 대사체들에 대한 생체내 미세투석법에 의한 연구

  • 이상복;성기옥;조영진;이석용;김인순;김성윤
    • Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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    • 1992.05a
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    • pp.34-34
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    • 1992
  • 심혈관계의 중추 조절작용과 고혈압 치료제의 작용기전을 규명하기 위한 연구의 한 단계로서 생체내 미세투석법(in vivo microdialysis)을 이용하여 후 시상하부의 국소부위에서 catecholamine들과 serotonin 및 그 대사체들의 세포와 농도의 변화를 정상혈압 횐쥐 (WKY)에서 관찰하고, 자연발생성 고혈압 횐쥐(SHR)에서 이들의 기준치를 비교하였다. 뇌정위 고정장치에 의해서 미세투석관을 후 시상하부에 위치시킨 후 링거액으로 관류하였다. 모노아민들과 그 대사체들은 고속액체 크로마토그라피와 전기화학 검출기률 이용하여 정량하였다. WKY에서 imipramine(50$\mu$M)의 관류에 의하여 norepinephrine의 농도가 유의하게 증가되었고, 또한 Pargyline (75mg/kg, i.p.)에 의하여 norepinephrine의 농도는 유의하게 증가된 반면에 DOPAC, HVA 및 5-HIAA는 감소하였다. WKY와 SHR에서 비교하였을때 norepinephrine, epinephrine, dopamine, serotonin의 농도는 차이가 없었으나 DOPAC, HVA, 5-HIAA의 농도는 SHR에서 유의하게 증가된 결과를 얻었다. 상의 결과들은 모노아민중에서 norepinephrine이 정상혈압 흰쥐의 후 시상하부에서 유리되는 주된 신경전달물질임을 시사한다. 또한 자연 발생성 고혈압 흰쥐의 후 시상하부에서 dopamine과 serotonin의 교체속도가 증가되었을 가능성이 큰 것으로 사료된다.

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신경약리학적 방법에 의한 $5HT_{1A}$ Receptor agonist의 평가

  • 김학성;성연희
    • Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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    • 1992.05a
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    • pp.39-39
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    • 1992
  • 5-Hydroxytryptamine(serotonin, 5-HT)은 중추신경의 신경 전달물질로서 조울병, 불안신경증 등의 정신병태생리에 중요한 역할을 한다. Radioligand 결합실험에 의하여 5-$HT_{1A}$, 5-$HT_{1B}$, 5-$HT_{1C}$, 5-$HT_{1D}$, 5-$HT_{2}$, 5-$HT_3$의 5-HT receptor subtypes의 존재가 확인되어 있고, 그 중에서도 5-$HT_{1A}$ receptor는 중추작용 증 정 도의 조절에 관계가 깊은 raphe nuclei 및 해마에 주로 존재하여 약리학적으로는 체온강하, 혈압 강하, 과식작용, corticosterone 분비 등과 관련되어 있음이 알려져 있다. 따라서 본 수용체 agonist가 항불안약, 항우울약 또는 항고혈압약으로서의 응용이 가능해지면서 5-$HT_{1A}$ 수용체 기능의 해명 및 그 agonist의 개발이 주목받고 있는 가운데, 본 연구에 있어서, 항불안약 개발목적으로 합성된 일련의 화합물 중 1-<3-(3,4-methylene-dioxyphenoxy)propyl> 4-phenyl piperazine (DP-554)이 5-HT 수용체에 특이적이고 선택적으로 높은 친화성을 가지며, rat 해마의 막분획에서 adenylate cyclase 활성을 억제하고, 뇌내 5-HT turnover rate를 감소시키는 둥의 약리학적 작용을 나타내어, 이 화합물이 5-$HT_{1A}$ receptor agonist로서 작용함을 밝혔다. Mouse vas deferens (MVD)를 이용한 실험에서 5-$HT_{1A}$ receptor가 MVD의 교감신경 말단에 존재하여 그 neurotransmission을 억제함이 시사되었으며, 이 조직에서 또한 5-$HT_2$와 5-$HT_3$ 수용체의 존재를 확인하고 각각의 기능을 분명히 했다.

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Protein kinase C와 이와 관련된 단백질 연구

  • 이재란;김진한;최명언
    • Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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    • 1993.04a
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    • pp.135-135
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    • 1993
  • 신호전달과정에 중요한 역할을 하고 있는 다기능 serinei/threonine 단백질인산화효소인 protein kinase C(PKC)의 연구를 위해 이 효소의 정제를 뇌에서 착수하였다 PKC의 활성측정을 myelin basic protein을 기질로 하여 20 mM Tris 완충용액 PH 7.5, 0.15 mM [${\gamma}$-$^{32}$P]ATP(3 $\times$ $10^{5}$ cpm), 0.1 mM $Ca^{2+}$, 10$\mu\textrm{g}$ phosphatidylserine과 2$\mu\textrm{g}$ diolein을 넣어 반응시켰다. 반응은 TCA로 정지시킨 후 방사성 단백질을 Millipore filter paper로 걸러 섬광 계수기로 읽었다. Cytosol PKC의 정제과정은 첫 단계에서 DEAE-cellulose를 사용하였으며, phenyl sepharose CL-4B와 protamine agarose를 연속적으로 이용하여 800배의 정제에 성공했다. SDS-PACE 상에서 80 kD로 나타났으며 순도는 95 % 이상이였다. 이를 이용 PKC의 각종 기질 연구에 착수하기 시작했으며, 이중 MBP의 인산화연구를 통한 myelin의 안정성과 MBP와의 구조 관계가 일부 수행되고 있다 연차적으로 PKC와 이와 관련된 단백질의 특성을 살피기 위해 뇌의 PKC 기질 중 cold stress를 통해 환경에 민감한 것을 찾고 있으며, 현재 autoradiography를 이용해 80 kD, 54 kD, 49 kD와 35 kD의 단백질이 연구대상이 되고있다. 그 중 49 kD는 B-50(또는 GAP43, neuromodulin이라고도 함)일 가능성이 높아 이 단백질 조절과 PKC 활성화 사이의 관계 정립이 흥미로운 과제로 대두되고 있다.다.

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Techniques for Cryo-electron Tomography in Biological Field (생물학분야에서 Cryo-electron Tomography 활용기법)

  • Mun, Ji-Young;Lee, Kyung-Eun;Han, Sung-Sik
    • Applied Microscopy
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    • v.38 no.2
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    • pp.73-79
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    • 2008
  • In Biology, Studies Using Electron Microscopy for making Cell Structure to 3D reconstruction very fast development. Recently, by using Cryo fixation, we can see cell 3D structure without structural change, instead of using chemical fixation which can change cell structure. Before using this technology, we could understand cell structures only in 2D images. But now, through cryo-ET, 3D reconstruction of cell structure without artificial structure changes can be possible and this technology will give us many advantages in Drug delivery and Nanothechnology.

Technology Trend for the Preparation of Polymeric Particles by SPG Technique (SPG 막유화법을 이용한 고분자 입자 제조기술의 동향)

  • Lee, Sang-Kug;Kim, Sung-Wook;Choi, Kyoung-Ho;Lim, Eun-Hee
    • Elastomers and Composites
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    • v.44 no.3
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    • pp.222-231
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    • 2009
  • Shirasu-porous-glass (SPG) membrane emulsification is highly attractive in the field of toner industries, foods and drug delivery systems because of its easy control of particle size in micro-scale, narrow size distribution and multiple emulsion. The particle size and morphology of emulsion droplets can be controlled by changing the type of initiators, additives, monomers, crosslinkers and inhibitors in SPG membrane emulsification. In this paper, principles of SPG membrane emulsification, influence of process parameters and industrial applications have been addressed.

Effect of Water on Lecithin/Bile/Decane Organogels (레시틴/담즙염/데케인 유기젤에 대한 물의 영향)

  • Eun-ae Chu;Na-hyeon Kim;Min-seok Kang;Kyo-chan Koo;Hee-Young Lee
    • Journal of Adhesion and Interface
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    • v.24 no.4
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    • pp.131-135
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    • 2023
  • Lecithin self-assembles into reverse spherical micelles in organic solvents as an amphiphilic molecule. When additives such as bile salts and water are introduced into lecithin solutions, it induces structural changes in the molecular form of lecithin, leading to the transformation into reverse cylindrical micelles. In this study, we observe the rheological changes of lecithin/bile salt mixtures in a decane system after the addition of water. The resulting mixtures exhibit high viscosity and characteristics of viscoelasticity, suggesting potential applications in various fields such as drug delivery and edible oil gels.