• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.231-231
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• 1994

이 연구는 인삼 성분 약물이 도파민 수용체에 미치는 영향을 연구하기 위한 첫 단계로써 그 기본적인 assay system을 정착 시키기 위함이 목적이었다. 우리는 이 연구를 수행하기 위하여 생후 2-4 일의 쥐를 사용하여 흑질, 선조체, 해마구, nucleus accumbens등의 뇌 부위에서 신경세포 배양을 시도하였다. 흑질로 부터 배양한 신경세포들의 경우엔 면역 세포학적방법을 써서 살펴본 결과 대부분의 신경이 도파민성 신경이나 GABA성 신경들 이었다. 또한 이들 세포들의 전기 생리학적 상태를 알아보기 위하여 흑질에서 신호 전달체계가 잘 확립된 GABA 수용체의 작용을 살펴 본 결과 이 신경세포들은 GABA-A 및 GABA-B 수용체의 발현은 물론 이온 채널에 미치는 신호 전달체계를 완전히 갖추고 있었다. 도파민 수용체의 작용을 전기 생리학적으로 연구하기 위하여 배양한 신경세포에 도파민agonist를 가해서 이온 채널에 미치는 효과를 살펴 보았다. 선조체에서 배양한 신경세포들은 Dl 과 D2 agonist에 대해서 상반되는 반응을 나타냈다. 즉 Dl agonist는 선조체 신경세포를 활성화 시켰으나 D2 agonist는 선조체 신경세포들을 억제 하였다. 한편 해마구의 CAI 과 CA3 부위로 부터 배양한 신경세포에 대한 도파민 agonists의 작용은 선조체의 신경세포에 대한도파민 agonists의 작용과는 상반되는 반응 이었다. Dl agonist는 해마구로 부터 배양한 신경세포의 활성을 억제 하였으나 D2 agonist는 이들 신경세포들의 활성을 증가 시켰다. Nucleus accumbens 에서 배양한 신경세포들은 도파민에 의해서 그 활성이 억제 되었다. 이러한 결과로 미루어 봐서 같은 도파민 수용체라도 분포되어 있는 조직에 따라서 신호전달 에 관여 하고 있는 C-단백이나 이차 전령물질이 달라서 신경세포에 대한 작용이 다르든지. 약리학적으로는 구분되지 않으나 뇌의 조직에 따라서 분포가 다른 도파민 수용체의 아그룹이 존재 한다고 생각된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1993년도 제2회 신약개발 연구발표회 초록집
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• pp.147-147
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• 1993

신생쥐의 DRG 배양에서 접종후 1일째 neurite의 형성을 관찰할수 있었고 배양한 세포가 신경세포임을 확인하기 위하여 신경섬유에 대한 항체를 이용한 조직화학적 실험을 실시한 결과 붉게 염색된 세포를 볼 수 있었으므로 이 세포들이 DRG신경세포임을 확인할 수 있었다. 배양한 신경세포중 capsaicin에 대한 감수성을 갖는 신경세포군을 확인하기 위하여 cobalt stain 방법으로 실험한 결과 capsaicin에 대한 감수성율 갖는 신경세포룰 관찰할 수 있었고 비교를 위하여 함께 실험한 resiniferatoxin, KR 25018, 6-paradol, NE-19550, RDL-201등의 capsaicin 유사체들의 경우도 정도는 달리 하였으나 유사한 반응을 보였으므로 일차배양한 신경세포에 대한 작용이 capsaicin의 작용과 같을 가능성을 보여주었다. 진통효과 검정결과 진통효과가 있는 것으로 확인된 capsaicin 구조 유사체들인 resiniferatoxin, 6-paradol, NE-19550, RDL-201, KR-25018모두 농도 의존적인 반응을 보였다. 또한 칼슘 도입을 위해 요구되는 관능기로는 알킬측쇄와 P-위치의 수산기, 3-methoxy기 및 acyl amide 구조가 중요하였다. 알킬측쇄는 NVA의 경우처럼 탄소 8개 정도가 적당했으나 구조적으로 현저히 다른 치환기를 가진 resiniferatoxin이나 KR-25018의 경우에도 유효하였다. Vanillin환의 P-수산기도 필수적이었고 3-methoxy기의 존재시에는 칼슘 도입효과가 강하였다. Acyl amide 결합도 중요하나 필수적은 아니였다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제12권1호
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• pp.87-95
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• 2008

만능성 인간 배아줄기세포로부터 확립된 신경줄기세포 또는 신경전구세포는 퇴행성 신경질환 세포치료제로 이용될 수 있는 다양한 종류의 신경세포로 분화 유도될 수 있다. 하지만, 인간 배아줄기세포로부터 신경세포를 생산하기 위한 기술은 아직 많은 장애를 가지고 있다. 인간 배아줄기세포 유래 신경전구세포에서 특징적으로 나타나는 신경관 유사로제트에 대한 이해는 인간 배아줄기세포 신경 분화의 효율을 높이는데 유용한 정보를 제공할 것으로 사료된다. 일반적으로 신경로제트(neural rosette)는 분화 중인 배아체를 부착 배양함으로써 유도하지만, 이 방법은 시간이 걸리고 복잡하다는 단점이 있다. 본 연구에서는 신경로제트가 부착배양을 하지 않고 부유배양으로 형성될 수 있는지 조사하였다. 우선적으로, 배아체 형성 및 신경분화에 인간 배아줄기세포 클럼프(clump) 크기가 영향을 주는지를 조사하였고, 사방 $500\;{\mu}m$ 크기의 인간 배아줄기세포 클럼프가 신경 분화 유도에 가장 효과적임을 확인하였다. 로제트 형성을 유도하기 위해, 사방 $500\;{\mu}m$ 크기의 인간 배아줄기세포 클럼프를 1주일 동안 EB 배양배지에 부유 배양함으로써 균일한 크기의 배아체를 얻은 후, NES 배양 배지에서 부가적으로 $1{\sim}2$주 동안 계속 부유 배양한 결과, $7{\sim}10$일 사이에 신경관 유사 로제트가 형성됨을 확인하였다. 로제트 형성 세포의 신경전구세포로서 특성은 RT-PCR과 면역형광염색법을 이용한 신경전구세포 특이적 마커(vimentivi, nestin, MSI1, MSI2, Sox1, Tuj1) 발현을 통해 확인하였다. 또한, 성장인자를 제외한 NES 배양 배지에서 신경로제트를 $2{\sim}6$주 동안 지속적으로 배양하면 성숙 신경세포로의 말단 분화가 유도됨을 확인하였다. 신경세포 특이적 마커(Tuj1, MAP2, GABA)와 신경아교 특이적 마커($S100{\beta}$, GFAP)는 $2{\sim}3$주 또는 4주 후에 각각 발현이 유도됨을 확인하였고, 희소 돌기아교 특이적 마커(O1과 CNPase)는 $5{\sim}6$주 후에 발현이 증가함을 확인하였다. 본 연구결과는 신경로제트가 부유 배양시스템에서 성공적으로 형성됨을 보여주고 있으며, 이는 인간 배아줄기세포의 신경 분화를 이해하고, 신경전구세포 유도 과정을 단순화하는데 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국동물학회지
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• 제34권2호
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• pp.209-216
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• 1991

신경세포의 분화에 미치는 insulin의 영향을 알아보기 위하여 계배의 단뇌 신경아세포를 serum-free defined medium에서 배양하였다. Immunofluorescence실험을 통하여 신경특이단백질인 MAP-2는 신경아세포의 세포체와 신경돌기에 존재하는 것으로 나타났다. 또한, 배양액내에 insulin의 농도를 증가하면 신경아세포의 신경돌기 형성이 증가할 뿐 아니라 MAP-2의 합성도 증가하였다. 따라서, 신경아세포의 형태적분화와 생화학적 분화는 서로 밀접하게 연관되어 일어나는 것으로 추측되며, insulin은 신경특이단백질의 합성을 촉진시킴으로써 신경아세포가 신경돌기를 형성하며 분화되어 가는데 결정적인 역할을 하는 것으로 보인다.

• 생명과학회지
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• 제12권3호
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• pp.306-316
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• 2002

흰쥐의 좌골신경을 절단한 후 혈관내에서 배양한 신경줄기세포를 이식하여 말초신경에서도 수초의 재생이 일어나는지를 형태 학적으로 규명하고 배양한 신경줄기 세포들로부터 분화한 Schwann cell들이 회복할 수 있는지를 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 이식한 20일 후 동맥내 배양한 신경줄기세포는 Schwann cell로 분화하여 신경섬유의 재생이 일어나기 시작하였다. Schwann cell은 증식 후 재수초화를 형성하기 위하여 다른 Schwann cell들로부터 여러 가지를 자극을 받고 있었으며 NGF 소견으로 볼 때 신경외막으로부터 기존의 Schwann cell로부터 신경줄기세포의 분화가 유도되었으며 PCNA 반응으로 볼 때도 기존의 신경섬유의 Schwann cell주위에서부터 증식이 일어났다. 미세구조적으로는 Schwann cell의 재수초화, 축삭내 사립체와 미세소관의 수의 증가를 관찰할 수 있었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVII)
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• pp.163-163
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• 2005

• 생명과학회지
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• 제21권2호
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• pp.176-182
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• 2011

해양심층수는 깊이 200 m 정도 혹은 그 이상의 해수를 말한다. 해양심층수는 무기물질이 풍부하여 여러 분야 적용을 위해 많은 관심이 쏠리고 있다. 본 연구에서는 동해 양양 부근에서 취수한 해양심층수에서 배양된 쥐 해마신경세포의 ${\mu}$-아편양 수용체 발현에대한 영향을 조사하였다. 경도 800 및 1,000 심층수가 25% (v/v) 포함된 minimal essential media에서 해마신경세포를 배양해 대조군(증류수 첨가)과 비교하였다. 경도 800 및 1000심층수 첨가 배양액에서 배양된 신경세포 및 별아교세포에서 ${\mu}$-아편양 수용체의 면역반응 신호가 매우 증가했다. 흥미롭게도 신경세포보다 별아교세포에서 ${\mu}$-아편양 수용체의 면역반응 신호 증가가 더 뚜렷했다. 통계 분석시 경도 800 및 1000에서 배양된 별아교세포에서 ${\mu}$-아편양 수용체 군에 대한 상대적 강도가 약 4배 증가했다. 이런 증가는 통계적으로 매우 유의했다(p<0.001). 대조적으로 신경세포에선 이런 증가가 상대적으로 덜 뚜렷하였고, 경도 1000배양에서만 통계적으로 유의하였다(p<0.001). 이 결과들은 심층수가 신경세포 및 별아교세포에서 ${\mu}$-아편양 수용체의 발현을 항진 시킨다는 것을 나타내었다.

• Applied Microscopy
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• 제29권4호
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• pp.459-470
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• 1999

9, 10일 계배의 대뇌 신경세포 분화의 변화를 관찰하기 위하여 신경세포의 미세구조 변화를 전자현미경을 이용하여 관찰하였으며, 또한 대뇌 단백질, 탈수소효소의 활성도 및 ATP의 변화상을 분석한 결과는 다음과 같다. 대뇌 신경세포의 미세구조의 변화는 발생 9일 계배의 염색질은 핵질내에 비교적 고르게 분포해 있었으며 핵막은 2중막으로 아주 선명하게 구별되어 있음을 관찰할 수 있었다. 특히 조면소포체와 Golgi복합체가 잘 발달되어 있었으며, 또한 polysome이 관찰되었고 synaptic소포들이 산재되어 있었다. 10일 배양군의 계배의 신경세포는 염색질이 고루 분포해 있었으며 핵막을 뚜렷이 구분할 수 있었다. 세포질을 포함한 조면소포체와 mitochondria 그리고 Golgi 복합체가 비교적 잘 발달되어 있었다. 계배대뇌의 9일 배양군에서는 37개의 polypeptide band들이 분리되었고, 10일 배양군에서는 38개의 band가 생성되었다. 탈수소효소 활성도는 배양시간이 증가할 수록 증가하는 현상을 보였는데, LDH의 활성도는 9일 배양시 11.07이며 10일 배양시에는 12.12이였고, MDH는 각각 11.89와 13.44로 나타났다. 그리고 SDH는 9일 배양군에서는 8.45이며 10일 배양군에서는 10.52의 활성을 보여 증가했음을 알 수 있다. ATP의 변화는 10일 배양군$(2.10\times10^{-4}mol/ml)$이 9일 배양군$(2.50\times10^{-6}mol/ml)$에 비해 감소현상을 보였다.

• 대한한의학방제학회지
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• 제7권1호
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• pp.143-151
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• 1999

척수감각신경절세포에 대한 산소자유기의 신경독성효과에 대한 기전을 규명하기 위하여 여러 농도의 Glucose Oxidase(GO)를 배양 척수 감각신경절세포에 처리한 후 GO의 독성효과를 분석하였으며 또한 GO에 의하여 유발된 신경독성에 대한 음양곽(Epimedium Koreanum Nakai)의 방어효과를 MTT assay법에 의하여 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. GO는 신경세포에 처리한 농도와 시간에 비례하여 세포의 생존율을 유의하게 감소시켰으며, 또한 음양곽이 GO의 독성효과를 효과적으로 방어하였다. 이상의 결과로부터 산소자유기인 GO는 생쥐의 배양 척수감각신경절세포에 독성을 나타냈으며 음양곽과 같은 한약추출물이 GO의 독성을 방어하는데 효과적인 것으로 나타났다.

• 사상체질의학회지
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• 제11권2호
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• pp.251-266
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• 1999

1. 연구목적 본 실험은 청심연자탕이 대뇌신경세포의 산화적 손상에 대한 효능을 밝히기 위한 것이다. 2. 연구방법 신생 생쥐에서 분리 배양한 대뇌신경세포에 여러 농도의 hydrogen peroxide가 포함된 배양액에서 6시간 동안 처리하여 hydrogen peroxide가 배양 대뇌신경세포에 미치는 영향을 조사하였으며 hydrogen peroxide의 독성효과에 대한 청심연자당의 영향을 조사하였다. 3. 결과 및 결론 산소자유기인 hydrogen peroxide는 NR assay와 MTT assay에 의한 세포생존율을 감소시켰고 lipid peroxidation의 증가 및 LDH양의 증가에 의하여 생쥐의 배양 대뇌신경세포에 독성을 나타냈다. 청심연자탕(淸心蓮子湯)은 hydrogen peroxide의 산화적 손상에 대한 신경독성에 대하여 Iipid peroxidation의 감소에 유의한 효과를 보였다. 청심연자탕(淸心蓮子湯)은 hydrogen peroxide의 산화적 손상에 의한 신경독성에 대하여 LDH양의 감소에 유의한 효과를 보였다. 이상의 결과로 보아 hydrogen peroxide는 생쥐에서 분리한 대뇌신경세포에 산화적 손상에 의한 신경독성을 나타냈으며 청심연자탕(淸心蓮子湯)이 hydrogen peroxide와 같은 산소자유기의 산화적 손상에 대한 방어에 효과적인 것으로 사료된다.