북방산개구리, 참개구리 및 옴개구리를 사용하여 성숙된 난자의 세포질에서 활성을 띠는 성숙촉진요인( maturation promoting factor, MPF)을 미세주입 법으로 확인하고 이들의 성질을 조사하였다. 핵붕괴(germinal vesicle breakdown, GVBD)된 난자의 세포질을 미성숙 난자(GV난자)에 주입하고(75-100 nl) 이들을 15-24시간 배양했을 때 대부분의 GV 난자들이 핵붕괴를 일으켰으나(약 80%) 미성숙 난자(GV 난자)의 세포질을 주입했을 때에는 약 200nl의 난자들만이 핵붕괴를 일으켰다. 핵붕괴된 난자들의 crude extract를 주입했을 때에도 역시 성숙유도 효과가 있었으며 이종간에도 효과가 있었다. 난자의 성숙을 잘 일으키지 않는 옴개구리의 난자를 사용하여 MPF를 가진 세포질을 계대주입(serial transfer)하였을 때에도 MPF가 계속 활성을 띠는 것을 확인할 수 있었다. 아울러 개구리 난자의 MPF생성과 증폭과정에 CAMP의 증가나 단백질 합성의 저해가 미치는 영향을 조사한 결과. MPF의 작용이 유의하게 이들에 의해 억제되는 것을 알 수 있었다.
난자성숙 재개와 1-세포기 배아의 세포주기에서, cAMP-의존성 protein kinase A와 diacylglycerol-의존성 protein kinase C가 핵막붕괴에 미치는 영향을 조사하였다. 난자성숙 재기는 dbcAMP, IBMX, TPA, 또는 diacyllycerol에 의해 억제되었다. 또한 protein kinase A와 protein kinase C 활성제를 같이 처리하면 난자성숙이 더욱 억제되었다. 그러나 1-세포기 배아의 전핵막붕괴에는 아무런 영향도 미치지 못하였으며, 단지 protein kinase C 활성제만이 세포질 분열을 억제하였다. 이상의 결과로부터, protein kinase A와 protein kinase C에 의한 단백질 인산화 양상이 GV난자의 핵막붕괴와 1-세포기 배아의 전핵막붕괴에 미치는 세포내 작용기작은 상이함을 알 수 있었으며, 전기영동 결과, 81 KD 단백질이 난자성숙 재개에 중요한 역할을 하리라 사료되었다.
감마선을 조사(照射)하거나 조사하지 않은 두 경우의 Bacillus Subtilis를 대상으로 하여 박테리아 세포 붕괴(lysis)를 유도한 후 방출된 유기 분자가 pH 7 조건에서 석영 용해 속도에 미치는 영향을 조사하였다. 시간이 경과하며 석영과 박테리아 혼합 슬러리에서 용존 유기탄소(dissolved organic carbon; DOC) 함량이 증가하였으며 이는 박테리아 투입량과 대체적으로 비례하는 것으로 보아 박테리아 세포 붕괴의 결과인 것으로 판단되었다. 방사선을 조사하지 않은 박테리아를 투입하였을 경우, 시간이 경과하며 박테리아를 투입하지 않은 화학적 비교 슬러리에 비해 높은 함량의 규소가 용출되어 나왔다. DOC 함량과 용해되어 나온 규소 함량간에 나타난 좋은 상관관계는 규소 용출의 원인이 박테리아 세포 붕괴에 의해 방출된 DOC에서 비롯되었음을 나타낸다. 한편 방사선을 조사한 박테리아의 세포 붕괴 산물은 방사선을 조사하지 않은 경우에 비하여 단위 DOC 함량당 매우 높은 농도의 규소를 용출시켰다. 이 때 관찰되는 규소 용출은 방사선이 조사되었을 때 교란된 박테리아 내부의 유기 분자가 방사선을 조사하지 않은 박테리아에 비하여 석영을 보다 효과적으로 용해할 수 있는 유기 분자로 변화하였기 때문으로 판단된다. 이 결과는 고준위 방사성 폐기물 처 분장에서 누출된 핵종이 지표 생태계에 도달하는데 소요되는 시간을 예측할 때 처분장 주변 대수층 암석의 풍화 속도 촉진에 미치는 박테리아 세포 붕괴의 영향을 고려해야 함을 나타낸다.
소취 및 소독제로서 사용되어온 안정화 이산화염소($S-ClO_2$)의 조직에 대한 부패억제 효과를 확인하고자 본 연구를 수행하였다. 실험을 위해 8주령 SD계 흰쥐 콩팥(kidney)을 사용하였고, 안정화 이산화염소를 처리하지 않은 대조군과, 안정화 이산화염소의 분말과 수용액을 처리한 실험군으로 구분하여 광학 및 전자현미경으로 관찰하였다. 광학현미경 관찰 결과, 부패양상은 시간경과에 따라 토리, 보우만주머니 및 세뇨관을 구성하는 세포의 핵과 세포사이 경계가 불분명해지며, 세뇨관의 경우 신장되었다가 결국에 수축되었다. 대조군의 1일군부터 괴사(necrosis)가 시작되어 3일군 이후는 전체적인 조직 괴사로 형태를 구별하기 어려웠다. 실험군에서 3일군의 경우, 조직의 전반적 형태와 괴사정도가 대조군의 1일군과 유사하였다. 전자현미경 관찰 결과, 시간경과에 따라 세포소기관 및 미토콘드리아의 부분적 붕괴로 시작되어 결과적으로 모든 세포내소기관이 붕괴되었다. 대조군의 1일군에서 세포소기관의 부분적 붕괴가 관찰되었으며, 실험군의 3일군에서 세포소기관 및 미토콘드리아의 부분적 붕괴 현상이 관찰되었다. 대조군의 3일군 이후에서는 세포소기관을 구별할 수 없었다. 이상의 연구 결과에서 $37^{\circ}C$, 습도 $80{\pm}5%$에서 안정화 이산화염소($S-ClO_2$)가 부패와 변성을 억제하는 부패억제제로서 효과가 있고, 억제 정도는 실험군의 3일군이 대조군의 1일군에 해당하는 것으로 보아 최소 2일 정도의 부패억제 효과가 있는 것으로 확인되었다.
라돈은 암석이나 토양 같은 지각물질에서 발생되는 우라늄($^{238}$ U) 붕괴계열인 라듐($^{226}$ Ra)의 붕괴과정에서 생성된다. 라돈($^{222}$ Rn)은 붕괴하면서 $\alpha$방사선을 방출한다. $\alpha$ 붕괴에 의하여 $^{218}$ Po, $^{214}$ Po, $^{214}$ Bi 등의 자핵종(Radon daughter)을 생성하며, 이 과정에서 인체의 세포를 죽이거나 염색체를 손상시킬 수 있으며, 폐암의 발생 위험률을 높이는 것으로 보고되었다$^{1)}$ . 라돈은 건물의 균열, 연결부위, 혹은 배수관이나 오수간, 주변의 틈을 통해서 실내로 유입된다. (중략)
발암성 물질로 알려진 라돈($^{222}Rn$)은 원래 불활성기체로 자연계에 널리 존재하는 자연방사능으로 암석이나 토양 같은 지각물질에서 발생하는 우라늄($^{238}U$) 붕괴계열인 라듐($^{226}Ra$)의 붕괴과정에서 생성되는 방사성 가스이다. 라돈($^{222}R$)은 $\alpha$붕괴에 의하여 $^{218}Po$, $^{214}Po$등의 자핵종(Radon daughter)을 생성하며, 최종적으로 납($^{210}Pb$)으로 변한다 라돈이 폐에 흡입되면 붕괴하면서 $\alpha$방사선을 방출하는데, 이것이 인체의 세포를 죽이거나 염색체를 손상시킬 수 있으며, 폐암의 발생 위험률을 높이는 것으로 보고되었다. (중략)
VBNC(Viable but nonculturable)란 생존에 불리한 환경하에서 살아 있으나 일반 영양배지에서 자라지 못하는 미생물의 상태를 나타낸다. 본 연구는 구리를 이용해 Escherichia coli에서 VBNC를 유도하고 이의 특성을 살펴보았다. 구리를 처리한 후 전통적인 평판 배양법에 의한 집락 형성계수(colony forming unit, CFU)를 측정한 결과 배양되지는 않으나, Live/Dead BacLight bacterial viability kit 염색 후 유세포계수기로 측정한 결과 살아있는 미생물로 계수되어 VBNC 상태가 확인하였다. VBNC 유도된 미생물로부터 genomic DNA와 RNA를 분리하고 이들의 안정성을 관찰하였는데 DNA에 비해 RNA의 붕괴가 많이 진행되었음을 확인할 수 있었고 RNA의 붕괴는 특정크기로 붕괴되는 것으로 관찰되었다. 또한 생물전용 투과전자현미경(Bio-Transmission Electron Microscope, Bio-TEM)을 통해 VBNC 세포의 형태를 관찰하였는데 VBNC 상태에서는 정상상태에 비해 periplasmic space가 온전하지 못하고 세포내막과 세포 외막이 분리되었으며 세포질의 양이 현저히 감소됨이 관찰되었다.
광범위한 천연 소독제로서 사용되어온 자몽추출물의 조직에 대한 부패억제 효과를 확인하고자 본 연구를 수행하였다. 실험을 위해 8주령 SD계 흰쥐 콩팥(kidney)을 사용하였고, 자몽추출물을 처리하지 않은 대조군과, 55% 자몽추출물의 분말과 수용액을 처리한 실험군으로 구분하여 광학 및 전자현미경으로 관찰하였다. 광학현미경적 소견에서 대조군의 경우, 1일군부터 보우만주머니의 경계가 불분명해지기 시작하였고, 사구체 및 세뇨관의 형태로 부분적으로 괴사가 진행되었으며, 3일군에서 보우만주머니, 사구체 및 세뇨관의 형태가 대부분의 괴사나 유실되어 형태의 구분이 어려웠다. 그러나 실험군의 경우, 3일군부터 보우만주머니, 사구체 및 세뇨관 형태의 명확한 구별이 어려웠고, 부분적인 괴사가 관찰되었다. 한편, 전자현미경적 소견에서 대조군의 경우, 1일군은 바닥판의 일부가 붕괴되었으나 전체적인 형태는 유지되었고, 세포질 내 세포소기관의 붕괴로 전자밀도가 높은 응집된 형태로 관찰되었다. 2일군에서는 대부분이 붕괴되어 형체를 구별할 수 없었다. 그러나 실험군의 경우는 2일군에서 세포막의 부분적인 파괴가 확인되었고, 3일군에서 바닥판의 일부가 붕괴되기 시작하였고 세포소기관의 붕괴로 인한 응집 현상이 관찰되었다. 본 연구결과는 $37^{\circ}C$, 습도 $80{\pm}5%$에서 55% 자몽추출물은 부패와 변성을 억제하는 부패억제제로서 효과가 있고, 실험군의 3일군 조직의 형태가 대조군의 1일군 조직의 형태적 특성과 유사하게 나타났다. 따라서 자몽추출물은 최소 2일 이상의 부패억제 효과가 있는 것으로 확인되었다.
Phosphatase의 저해제로 알려진 okadaic acid(OA)가 한국산 개구리(북방산개구리 참개구리) 난자의 성숙에 미치는 효과를 조사하였다. 북방산개구리 난자에 약 50 nl의 okadaic acid(0 5-500 mM)를 미세주입한 후 18시간 배양한 결과 0.5 mM의 농도에서 부터 난자의 핵붕괴를 일으키기 시작하였다 동면초기에 처리한 progesterone에 반응하지 않는 난자들도 OA에 의하여 성숙을 일으켰으며. 이 성숙은 배양액에 첨가한 cycloheximide(10 mg/ml)에 영향을 받지 않았다 또한 OA의 처리를 받고 일정시간 배양한 난자의 세포질에는 미성숙 난자의 성숙을 유도하는 maturation promoting factor (MPF)의 활성이 생기었다 참개구리의 난자도 역시 OA에 의해 성숙이 유도되었으며, 주입 후 6시간에서부터 핵붕괴가 일어나기 시작하였다 참개구리에서도 OA의 처리가 MPF의 활성을 촉진하는 것을 세포질내에 Hl histone kinase의 활성도가 증가하는 것으로 확인할 수 있었다 참개구리에서도 OA에 의한 성숙은 cycloheximide나 CAMP에 의해 영향을 받지 않았다 이러한 결과들은 개구리 난자의 MPF 활성화와 성숙과정에 phosphatase가 관여함을 보여주는 것이다.
생쥐 난자-난구 복합체를 인공배양하면서 adenylate cyclase의 촉진제인 forskilin과 phosphodiesterase의 저해제인 3-isobutyl-1-methylxanthine(IBMX)을 배양액에 첨가하여 이들이 난구세포의 분산과 난자의 성숙(핵붕괴)에 미치는 효과를 관찰한 결과 다음과 같았다. 1. Forskilin은 0.001$\mu$M에서 부터 난구세포의 분산을 유도하기 시작하여 (36%) 0.1-10$\mu$M 구간에서 최대의 분산율을 나타내었고 (80-90%) 100$\mu$M에서는 그 효과가 줄어들었다(60%). 이때 난자의 핵 붕괴는 10$\mu$M까지 정상으로 일어나다 (75-80%) 100$\mu$M에서 부분적으로 억제되기 시작하였다(40%). 2. IMBX는 0.01$\mu$M에서 부터 난구세포의 분산을 유도하기 시작하여 (30%) 1-1,000$\mu$M의 전 구간에서 최대의 분산율(81-89%)을 나타내었다. 난자들은 10$\mu$M의 농도까지 정상적으로 핵 붕괴를 일으키었으나(90% 이상) 100$\mu$M 이상에서 급격히 억제되었다(14%). 3. 난구세포의 분산을 유도하는데 필요한 최소의 자극기간을 조사해 본 결과 HCG는 2분, FSH와 forskilin은 15-30분, IBMX는 2시간이었다. 위 결과로 부터 생쥐 난구세포에서 cAMP의 농도를 높이는데 adenylate cyclase 와 phosphodiesterase의 두 효소가 모두 중요한 기여를 하며 난구세포는 단 기간에 생긴 cAMP의 peak로서 분산이 유도될 수 있으나 난자의 성숙억제 과정에서는 지속적인 cAMP의 존재가 필요하다는 것을 알았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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