• Journal of Embryo Transfer
• /
• v.7 no.2
• /
• pp.97-110
• /
• 1992

돼지난포란의 안정된 체외배양 체계를 위하여 도살장에서 재취된 난소로부터 난포 및 난자난구세포체의 혀태적인 선정기준을 설정하고 이의 이론적 배경을 확립하였다. 난소를 난포상태 및 분포나 황체 존재 여부에 따라 A,B 및 C 의 세 가지 형태로 분류하고 각 type의 난소에서 직경 3-5mm인 난포로부터 난포란을 회수하였다. 회수된 난포란을 난구세포 부착상태에 따라 Good, Fair 및 Poor 의 세 가지 형태로 분류하여 각각을 호르몬이 첨가된 M16+FCS 배양액으로 35시간 동안 체외배양하여 성숙율을 비교 검토 하였다. 난소의 형태에 따라 회수된 난포란 중 Good 또는 Fair 형태는 Type A 및 C 난소에서 85%를 차지한 반면, Type B 난소에서는 53%에 불과하였다. 또한 이들 난포란을 체외배양한 결과 Type A 및 C 에서 회수된 난포란은 90 및 85%의 높은 성숙율을 보인 반면, Type C 의 난포란은 33%의 저조한 성숙을 나타냈다. 한편 핵형 분석 및 조직학적 분석에서도 Type C 난소의 경우 난포란의 핵형이 대부분 GVBD 및 퇴화 형태를 보였으며, 폐쇄포난포의 비율도 Type A 난소의 53%에 비해 월등히 높은 85%를 나타내어 성숙율 비교실험의 결과와 일치되는 경향을 나타내었다. 따라서 본 실험의 선별기준에 의한 돼지 난소 및 난포란의 형태적 분류 작업에 의해 난포란의 체외배양 성적 향상 및 안정된 배양체계의 확립이 가능하였다.

• Journal of Veterinary Clinics
• /
• v.7 no.2
• /
• pp.517-519
• /
• 1990

In vitro maturation and fertilization of oocytes collected from slaughtered bovine ovaries were investigated. Immature bovine extrafollicular oocytes were cultured for 24 hrs. in TCM 199 supplemented with fetal calf serum in a humidified CO$_2$ incubator. Fertilization in vitro was performed using frozen-awed bull semen which was treated by Ca Ionophore A23187. Fourty percentage of oocytes cultured had matured to the metaphase II ; There were-no effects of the concentration of fetal calf serum and of the addition of HEPES on the maturation rate. The mean proportions of in vitro fertilized eggs and of cleaved eggs were 23.1％ and 14.4％, respectively.

• Proceedings of the Korean Aquaculture Society Conference
• /
• 2003.10a
• /
• pp.51-51
• /
• 2003

대농갱이는 체형이 동자개와 비슷하나 지금까지 인공부화는 물론 산란습성에 관해서도 잘 알려져 있지 않은 미개발 어종으로 양식품종의 다양화 및 경쟁력 있는 새로운 품종 개발을 위하여 인공종묘생산 시험을 시도하였다. 본 연구에 사용한 대농갱이 친어는 금강 중류역에서 서식하고 있는 자연산 친어로 암컷 210마리, 수컷 148마리를 사용하였다. 호르몬주사에 의한 인공 배란효과 조사를 위해 암컷 한 마리당 HCG 1,000 IU 주사군(75마리)과 2,000 IU 주사군(135마리)으로 나누어 배란율을 조사하였으며, 수컷은 주사하지 않고 정소를 적출하여 막자사발에 갈아서 등조액과 혼합하여 사용했다. 수정 방법은 난을 착출하면서 정자 등조액을 동시에 흘리는 방법, 난을 그릇에 받은 후 정자 등조액을 혼합 수정하는 방법, 채란용기에 정자 등조액을 미리 넣고 암컷의 난을 짜 넣어 수정시키는 방법 등 3가지 방법을 사용하였다. 부화된 자어는 초기먹이로 알테미아(3일 급이), 실지렁이(6일 급이), 배합사료 순으로 급이하였으며 수온 25~28$^{\circ}C$에 유지관리하면서 성장도 시험을 실시하였다. 호르몬 주사에 의한 배란효과는 HCG 2,000 IU 주사군(채란율 88.9%)이 1,000 IU 주사군(37.3%)에 비해 월등히 높았으며 난의 성숙상태도 좋았다. 수정방법에 있어서는 채란과 동시에 정자 등조액을 흘려 수정시키는 방법과 채란용기에 미리 정자 등조액을 넣고 암컷의 난을 한 마리씩 짜서 수정한 후 바로 부화지로 이동하여 고르게 뿌려 준 경우가 수정율 및 부화율이 좋았다. 부화수온은 23$\pm$1$^{\circ}C$에서 96시간, 26$\pm$1$^{\circ}C$에서는 72시간만에 부화되었으며 부화여건이 좋으면 단시간에 부화할 수 있도록 하는 것이 수생균 발생을 억제할 수 있어서 효과적이었다. 자치어의 성장도 실험에서는 사육수온 25~28$^{\circ}C$에서 직선식으로 나타낼 수 있어서 평균체장은 Y=0.9943X+0.7867, 평균체중은 Y=0.8800-0.6800로 각각 표시되었다.

• Journal of Embryo Transfer
• /
• v.19 no.3
• /
• pp.275-282
• /
• 2004

This study was carried out to examine the effects of development media and those change on in vitro development (IVD) of porcine oocytes matured and fertilized in vitro. Putative embryos, which were matured in vitro in modified NCSU-23 (mNCSU-23) supplemented with 10％ porcine follicular fluid (pFF) and were fertilized in mTBM, were developed in vitro as the experimental scheme. The results are as follows. When porcine putative embryos were cultured in vitro in NCSU-23 or CZB/Pig-MEM, the percentage of oocytes cleaved was not different between two systems, but the percentage of blastocysts in NCSU-23 was significantly higher than in CZB/Pig-MEM (P<0.05). And when porcine putative embryos were cultured in vitro in NCSU-23 during 7 days with or without changing media at day 5, which was supplement with or without 10％ fetal bovine serum(FBS), the percentage of oocytes cleaved, blastocysts at day 6, and the cell number of ICM, TE and total of blastocysts at day 7 were not different among three treatments. As a result of this study, it is supposed that NCSU-23 be more favorable, to develop porcine embryos derived from IVM/IVF, than CZB/Pig-MEM, but that demonstration on the effects of changing medium with fresh one stand in need of the more experiments.

• Development and Reproduction
• /
• v.3 no.1
• /
• pp.39-44
• /
• 1999

In the present study, we investigated the effect of maturity and motility of spermatozoa on the formation of pronuc-leus and subsequent developmental capacity of the human embryo in vitro. The fertilization was performed by means of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) in HEPES-buffered m-TCM-199 medium. In the first part of the experiment, motile or im-motile human spermatozoa ejaculated were injected into cumulus-enclosed human oocytes matured in vivo. Significantly (p<0.002) higher proportion of oocytes that was injected with motile spermatozoa formed 2 pronuclei than the oocytes injected with immotile spermatozoa (79.8% vs 51.7%). In the second part of the experiment, cumulus-enclosed human oocytes matured in vivo were injected with motile or immotile spermatozoa collected from testes. There was no difference between motile and immotile spermatozoa. In the third part of the experiment, using modified Tyrode's medium containing 10.0 mM lactate, 0.5 mM pyruvate, 0.2 mM taurine, 1.0 mM glutamine, 2.22 mM MEM amino acids, vitamin and 10% human follicular fluid, we found that the development of oocytes that formed 2 pronuclei were able to develop to 9-16 cells regardless of maturity and motility of spermatozoa.

• Korean Journal of Environment and Ecology
• /
• v.35 no.3
• /
• pp.285-293
• /
• 2021

This study was conducted to elucidate spawning period characteristics and early life development of eight barbel loach, Lefua costata (Balitoridae) at the Jusucheon stream, Okgye-myeon, Gangneung-si, Gangwon-do, Korea between January and December in 2018. The spawning period was estimated to be from May to August, considering the change in the gonad-somatic index, the appearance of young fry, and frequency distribution in egg diameter. It was a multi-spawning type. The gender ratio was 1:0.79 with 1,117 females and 879 males collected. The egg size was 0.24-0.93 mm, with mature and immature eggs found during the spawning period. The size of mature eggs was 0.71±0.02 mm, and the average number of fecundity was 1,786±818 (n=31). Observation of the egg development showed that the fertilized eggs were the sticky, gray, segregated, and demersal type with 0.76±0.03 mm in diameter. The hatching of the embryos began at about 34 hours (hatching rate 50%) after fertilization underwater temperature of 25℃. The average length of the newly hatched pre-larvae was 2.7±0.11 mm. The average length of pre-larvae at 4 days after hatching was 4.5±0.16 mm, and the yolk sac was completely absorbed and entered the post-larvae stage. At 20 days after hatching, the average length of post-larvae was 11.5±0.67 mm, and their fin rays were formed before they transitioned to the juvenile stage. At 100 days after hatching, the average length reached 49.8±2.60 mm, and the appearance and the lateral sideband patterns were similar to those of the adult fish.

• Journal of Aquaculture
• /
• v.8 no.1
• /
• pp.1-19
• /
• 1995

In red seabream, Pagrus major the female specific protein in the vitellogenic female serum was identified by Ouchterlony's immunodiffusion test and immunoelectrophoresis. The female specific serum protein might be vitellogenin based on the results of the immunological analysis for the male and vitellogenic female sera and crude egg extracts. Also, it was identified by the immunodiffusion test that the purified yolk protein from ovarian egg extracts has antigenic identities shared with the female specific serum protein. To study the relationship between the maturational stages of gonad and plasma levels of vitellogenin, these were measured from the late resting period (January) to the vitellogenic preiod (April) by the modified enzymeimmunoassay (EIA) using antiserum against yolk protein. The level of plasma vitellogenin began to increase in February (previtellogenesis stage) and continuously increased with the ovarian growth during the vitellogenesis period (March to April). The plasma vitellogenin levels were significantly different between the females and the males in February. Validation for the modified EIA system. was tested .The absorbance curve of serial dilutions of serum from the vitellogenic female was paralleled to the standard curve of yolk protein; $109\pm5.6\%$ recovery was achieved by the modified EIA. And the intraassay coefficients of variation were less than 10% within the concentration ranging from 31.3 ng/ml to 1,000 ng/ml. These findings suggest that the sex determination in adult red seabreams could be possible by using the modified EIA as early as in February.

• Korean Journal of Ichthyology
• /
• v.25 no.1
• /
• pp.9-16
• /
• 2013

Egg development and early life history of the endangered species, Gobiobotia naktongensis were investigated to provide basic information regarding biological characteristics and restoration. Eggs were obtained from the females with Ovaprim (0.5 mL/kg) injecting and then fertilized using the dry method in the laboratory. Number of spawned eggs were $1,015{\pm}199$. Spawned eggs were strongly adhesive, opaque and grayish and measured $0.74{\pm}0.08mm$ (mean${\pm}$SD) in diameter. Fertilized egg size continuously increase until $2.94{\pm}0.10mm$ for 9 h 30 min at $23^{\circ}C$. Fertilized eggs hatched 26 h after fertilization, and newly hatched larvae an average were $3.4{\pm}0.07mm$(TL). The yolk sacs of the larvae were of most absorbed of 3 days after hatching and $4.4{\pm}0.1mm$ (TL). About at 13 days after hatching, they became to juvenile stage and reached $16.8{\pm}0.50mm$ (TL). At 80 days after hatching, the band patterns and external form of juveniles were similar to those of adults, and they averaged $27.7{\pm}2.32mm$(TL).

• Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
• /
• v.31 no.3
• /
• pp.223-228
• /
• 2011

The present study was conducted to determine the optimum in vitro culture condition for callus induction and plant regeneration from mature seeds of bermudagrass (Cynodon dactylon cv. Common). It was revealed that mature seeds cultured on MS medium supplemented with 2 mg/L 2,4-D, 0.5 g/L proline, 0.5 g/L casamino acid and 3 g/L Gelrite under light condition produced the highest percentage of callus formation (39.2%). The most suitable medium for plant regeneration from dehydrated calli was MS agar medium supplemented with 0.5 mg/L 2,4-D, 2 mg/L BA, 0.5 g/L proline, 0.5 g/L casamino acid 3 g/L Gelrite which induced the highest percentage of calli forming shoots (57.7%). The frequency of callus induction and plant regeneration were the highest on sucrose, followed by maltose. The shoots were rooted at the highest rate (100%) when transferred onto 1/2 MS medium. Regenerated plants were morphologically uniform with normal growth pattern.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
• /
• 2003.10a
• /
• pp.117-117
• /
• 2003

체외에서 한우 난포란의 감수분열과 배발달 능력의 획득에는 단백질 합성이 수반되어야 한다. 그러나 이러한 변화와 관련된 연구 보고는 거의 전무한 실정이다. 본 실험은 난자의 핵성숙과 관련된 세포질내 단백질 변화를 파악하기 위하여, 체외성숙 시간에 다른 배발달율과 세포질내 단백질을 비교하여 배발달능력 획득과 관련 있는 단백질을 규명하고자 실시하였다. 한우 난소에서 2-8mm의 가시난포로부터 난포란을 회수하였다. 회수된 난포란은 10% FBS와 호르몬이 첨가된 TCM199 용액에서 18시간 또는 24시간 체외성숙을 실시하였다. 난자 세포질내 단백질 변화는 2D gel electrophoresis를 이용하였고, 유의적인 변화를 나타낸 spot은 peptide mass fingerprinting을 통하여 단백질 동정을 실시하였다. 체외수정은 fer-TALP 용액을, 체외배양은 CR1aa 용액을 배양 3일째까지는 0.3% BSA, 그 이후에는 10% FBS와 난관상피세포를 첨가하여 사용하였다. 통계분석은 t-test를 이용하였다. 난자의 세포질에 대한 이차원전기영동 결과 29개의 단백질 spot들을 확인하였다. 한편 체외성숙 18시간째에 PB가 출현된 난자는 PB가 출현되지 않은 난자에 비하여 15개의 spot에서 유의적인 변화를 나타냈다. 이들 중 4개의 단백질 spot은 낮았고, 11개 spot의 수준은 높은 경향이었다. 체외성숙 18시간째와 24시간째의 배발달율을 조사한 결과 18시간째에서 유의적으로 높은 배반포 발달율을 나타냈다. 그리고 체외성숙 18시간과 24시간째 난자의 세포질내 단백질 spot들의 변화를 비교한 결과 PB가 출현된 난자 세포질에서 단백질의 변화와 유사한 경향이었다. 그러나 2개의 단백질 spot은 상반된 경향을 나타냈다. 따라서 본 실험에서 난자의 핵성숙과 관련 있는 15개의 spot을 확인하였고, 이들 단백질 spot중에서 2개가 배발달 능력과 관련이 있을 것으로 사료된다.보다는 육질등급에 많은 영향을 받는 것으로 판단된다. 한편 육질 1등급에서 배발달율이 낮은 이유는 육질 향상을 목적으로 암소를 비육 하는 경우 발생하는 번식장애와 밀접한 관계가 있는 것으로 사료된다.각각 가장 높았다. 배양 8일째 배반포의 세포수에 있어서 총세포수와 TE 세포수는 차이가 없었으나, ICM 세포수가 l0mg 첨가군에서 가장 높았다. 본 실험 결과에서 체외성숙 배지에 NEAA와 EAA 첨가가 배발달율에는 효과가 없었지만, 첨가농도의 증가에 따라 ICM 세포수가 증가하였다. 한편 체외성숙 배지에 LAH 첨가는 첨가 농도가 높을수록 배발달율은 낮았지만 ICM 세포수는 증가하였다.에 Csk가 관여하고 있음을 알 수 있다. 결론적으로 성적 성숙에 따른 생쥐 정소 내 Src-Csk loop의 발현과 Src kinase 활성의 변동은 정소 내 간충조직, 세정관 상피의 증식 및 기능적 분화 과정을 매개하는 생리적 활성분자 수용체 하위의 신호전달 과정에 Src-Csk loop에 의한 조절가능성을 확인할 수 있었다.rugrene의 향기성분이 주요 성분군으로 확인되었다. 2. 생강나무에서 생강의 향기를 발산하는 성분으로는 $\beta$-myrcene, o-terpinolene, phellandrone, ι-limonene, $\beta$-eudesmol, $\delta$-cadinone, elemol, trans-caryophyllene으로 동정되었으며 그 중에서도 phellandrene, $\beta$-eudesmol이 주된 역할을 하는 성분으로 확인하였다. 유의적인 관련성이 나타났고, 복부 비만의 지표인 허리엉덩이둘레비는 GPT, alkaline phosphatase, 공복시 혈당 및 MCV 등 다양한 건강지표와 관련성을 나타내어 향후 비만에 있어 다양한 혈액 성상의 변화 및 역할규명에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 본다.hat