경골어류의 질병진행과정에 따른 임파조혈조직내 대식세포의 분포변화 특성을 밝히고자 Edwardsiella tarda균과 그 분비독소인 Extracellula products(ECP)를 각각 진골어류의 일종인 틸라피아에 복강 주사한 후, 임상증상을 발현하지 않은 개체에 대하여 비장 및 두신의 병리조직학적 변화를 경시적으로 조사하였다. E. tarda 생균을 주사 1주일후, 비장에서는 주로 유초동맥을 중심으로, 두신에서는 조혈 조직전반에 걸쳐 대식세포 집단이 출현하였다. 또한 이 집단들은 시간이 경과함에 따라 MMC와 유사한 밀집구조를 이루었고, 1주째에는 이들 응집체가 더욱 치밀해지면서 주위의 실질은 어느 정도 회복경향을 보였다. 대식세포 집단은 2주째가 되면서 대부분 사라졌고, 거의 정상적 조직배열상을 보였다. ECP주사에 의한 비장과 두신의 경시적 조직학적 변화는 생균주사의 경우와 매우 유사하였으나 생균주사의 경우에 비해 대식세포의 응집이 더욱 빠르게 일어났을 뿐 아니라, 주사 후 1시간째의 비장 및 두신조직에서도 유초동맥의 증식비후(비장) 또는 대식세포 집단의 출현(두신)이 인정되었다. 따라서 E. tarda 생균 또는 그 ECP를 틸라피아에 주사했을 경우, 임파조혈조직내의 이와 같은 대식세포 행동특성은 에드워드증(Edwardsiellosis) 또는 기타 감염증의 조기진단을 위한 중요한 병리조직학적 정보로 활용될 수 있을 것으로 사료되었다.
미역 물 추출물의 염증 억제 활성을 알아보기 위하여 nitric oxide(NO) 분비량, tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$), interleukin-6 (IL-6) 및 IL-$1{\beta}$ cytokine 분비량, RAW 264.7 세포의 증식능을 측정하였다. Lipopolysaccharide (LPS)로 염증이 유도된 대식세포의 NO 분비능에 미치는 미역 물 추출물의 영향을 알아보기 위해 대식세포 배양액의 $NO_2{^-}$ 농도를 측정한 결과 NO 분비량이 미역 추출물 농도에 의존적으로 유의적인 감소 경향을 나타내는 것을 확인하였으며, 모든 첨가 농도에서 TNF-${\alpha}$, IL-6 및 IL-$1{\beta}$ cytokine 분비량이 감소하는 것을 확인하였다. 특히 IL-6 cytokine의 경우 첨가물 농도에 의존적으로 유의적인 감소를 보였다. 미역 물 추출물 첨가에 의한 TNF-${\alpha}$, IL-6 및 IL-$1{\beta}$ cytokine 및 NO 분비량의 감소가 세포 사멸에 의한 영향인지를 알아보기 위해 마우스 복강 대식세포에 대하여 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay를 실시하였다. 그 결과 모든 첨가 농도에서 대식세포 증식능이 control에 비해 유의적으로 증가하였다. 따라서 미역 물추출물은 세포사멸에 의해 cytokine 분비량이 감소한 것이 아님을 확인하였으며, 대식세포 증식능을 증가시켜 면역세포를 활성화 시키는 것으로 사료되어진다.
전통발효식초에 속하는 사과식초로부터 에탄올 및 증류수를 이용, 다당체를 분리하여 새로운 면역활성 물질을 확인하고자 하였다. 사과식초를 농축하고, 80% 에탄올을 가하여 침전물을 얻었으며 소량에 물에 용해하여 투석 및 동결건조를 거쳐 조다당 KAV-0를 얻었다. 구성당 분석 결과, KAV-0는 주로 mannose 38.2%, galactose 19.1% 및 glucose 14.3%로 구성되어있음을 확인하였고, 정상세포주(RAW 264.7 세포 및 대식세포) 및 종양세포주(B16-BL6 melanoma 세포)에 대해 세포독성 측정 결과, 직접적인 세포독성을 나타내지 않았다. 대식세포 유래 세포주인 RAW 264.7 세포 자극에 대한 사이토카인 및 산화질소 생산능을 측정한 결과, IL-6, $TNF-{\alpha}$ 및 산화질소 모두 농도 의존적으로 분비능이 증가하고 저농도에서도 우수한 활성을 나타냈으며, 마우스 복강유래 대식세포 자극에 대한 사이토카인 및 산화질소 생산능에서도 동일한 양상의 결과를 보여 사과식초 유래 조다당 KAV-0가 높은 대식세포 활성능을 소유함을 확인할 수 있었다. 한편, KAV-0의 정맥투여에 따른 NK 세포 활성화를 측정한 결과(ex vivo), 시료에 의해 활성화된 NK 세포는 Yac-1 종양 세포주에 대한 치사활성을 농도 의존적으로 증진시켰으며, $1,000{\mu}g/mouse$에서 월등히 우수한 NK 세포 활성능을 유도하였다. 또한, B16-BL6 melanoma를 이용한 폐암전이모델에서 KAV-0를 정맥투여한 뒤 항전이 활성을 측정한 결과, 농도 의존적으로 암 저해 효과가 나타났으며, 특히 $1,000{\mu}g/mouse$에서는 약 53%의 우수한 암전이 억제 활성을 나타냈다. 이상의 결과로부터 사과식초 유래 조다당 KAV-0는 인체의 면역계를 자극하여 우수한 면역활성 및 항전이 효과를 나타낼 수 있음이 확인되었고 건강 기능성 소재로의 활용 가능성이 충분할 것으로 최종 판단되었다.
톡소포자충(RH strain) tachyzoltes를 감마선에 조사하여 인체 백혈병 세포인 HL-60 세포와 정상 마우스의 복강 대식세포에 감염시킨 다음 충체 증식 능력에 어떠한 변화가 오는지 $^3H-uracil$ 흡수시험을 통하여 알아보았다 감마선 조사량은 30, 70, 100및 300 Gy로 하였고 tachyzoite감염은 시켰으나 감마선을 조사하지 않은 비조사군(NI군)과 tachyzoites를 넣지 않고 숙주세포만을 배양한 비감염군을 각각 두었다. 3H-uracil 흡수시험 결과 12-24시간 후 대식세포의 NI 군은 2,190-4,787(countperminute. 이하 같음), HL-60세포의 NI 군은 2,967-8,254의 높은 흡수량을 보였으나. 감마선 조사군은 대식세포 감염시 381-703(100 Gy조사군) 및 218-408(300 Gy조사군), HL-60 세포 감염시 1,911-2,618(30 Gy), 1,253-1,384(70 Gy), 1,013-1,090(100 Gy) 및 483-588(300 Gy)의 흡수량을 각각 보였다. 충체 증식에 대한 억제율은 300 Gy 조사시 12-24시간에 대식세포의 경우 90-92%. HL-60 세포의 경우 80-94%이었다. 이상과 같이 톡소포자충 RH tachyzoites가 감마선 조사 후 세포내 분열증식 능력에 치명적인 영향을 받는다는 것을 uracil 흡수 시험법으로 확인하였다.
본 연구는 Paraquat에 의한 폐상해와 colchicine이 paraquat에 의한 폐 섬유화에 미치는 영향을 규명하기 위해 Sprague-Dawley 흰쥐에 10 mg/kg의 paraquat을 2일 간격으로 2회 복강내 투여하였고 다른 군은 2회 투여한 후 1주일에 한번씩 10 mg/kg의 colchicine 을 복강내에 투여하였다. 각 군은 paraquat을 처음 투여한 후 1, 2 및 4 주에 폐를 적출하여 광학 및 전자현미경으로 관찰하였다. 광학현미경 소견은 paraquat 투여 후 1주일 이후에는 폐포벽 및 폐포강에 호중구, 대식세포 및 림프구가 침윤하였다. 그리고 폐포벽에는 시간이 지날수록 세포수가 증식하였다. 그러나 colchicine을 같이 투여한 군에서는 폐포벽의 세포증식이 현저하지 않았다. 전자현미경 소견은 paraquat투여 후 I형 폐포세포와 폐포모세혈관 내피세포의 심한 종창과 탈락이 일어났고 폐포벽에는 호중구, 대식세포 및 단구, 림프구의 침윤이 일어났다. 이러한 소견은 시간이 경과하여도 지속되었다. 섬유아세포의 증식과 교원섬유의 축적은 Paraquat 투여 후 4주 째에 가장 현저하였다. colchicine을 같이 투여한 군에서는 섬유화가 일어났으나 paraquat 단독 투여군보다 심하지는 않았다. 이상의 소견으로 보아 paraquat에 의한 폐상해는 I형 폐포세포와 폐포모세혈관 내피세포가 가장 상해를 잘 받으며 colchicine은 paraquat에 의한 폐섬유화를 억제하는 효과가 있음이 인정된다.
Interferon-${\gamma}$ (IFN-${\gamma}$)의 주된 생산세포는 림프구이며 주로 Interleukin-18(IL-18)에 의해 생산이 된다. IP-10은 IFN-${\gamma}$에 의해 유도, 생산되는 대표적인 케모카인이다. 따라서 본 연구는 마우스 복강내 대식세포에서의 IL-18에 의한 IP-10의 생산 여부를 관찰하고자하였다. IL-18은 마우스 복강내 대식세포에서 IP-10의 발현을 직접적으로 유도 하지는 않았다. 그러나 대식세포에 지다당질을 처리하기 전 IL-18을 전 처리 시킨 결과 지다당질에 의해 유도된 IP-10의 발현이 항진되어 나타남을 확인하였다. 이러한 항진 효과는 IL-18 전처리 16시간에 나타났으며, 이때 NF-${\kappa}B$의 활성이 IP-10의 발현 항진과 일치함을 확인하였다. 비록 IL-18이 IP-10을 직접적으로 발현시키지는 못하나 NF-${\kappa}B$의 활성을 통하여 IL-18의 적정시간에 따른 전 처리시 IP-10 발현의 항진은 케모카인 발현에있어 IL-18의 작용기전을 이해하는데 유용한 자료가 될 것이다.
본 연구에서는 천연자원 식용 해조류인 톳으로부터 톳의 면역 증강효과를 알아보고자 마우스를 이용한 생체 내(in vivo) 실험 연구를 수행하였다. 톳 열수 추출물을 4주간 격일로 0, 50, 500 mg/kg b.w.의 농도로 마우스에 경구투여한 후 비장세포 증식능과 복강 대식세포에서 분비하는 사이토카인(IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$) 분비량에 미치는 영향을 검색한 결과 두 농도 모두 Con A나 LPS로 자극 시 대조군에 비해 높은 비장세포 증식능을 보였고, 특히 50 mg/kg b.w. 농도로 투여한 군에서 비장세포 증식능이 최대를 나타내는 것을 알 수 있었다. 또한 복강 대식세포에 의한 사이토카인 분비량을 측정한 결과 LPS 첨가 시 IL-$1{\beta}$의 분비량은 500 mg/kg b.w.의 농도군에서 가장 높은 생성량이 관찰되었다. 이는 LPS를 투여한 군과 투여하지 않은 군에서 모두 동일한 경향을 보였다. IL-6 분비량은 LPS 첨가 시 50 mg/kg b.w.의 농도 투여군에서 가장 높은 생성을 나타냈다. TNF-${\alpha}$의 경우는 50 mg/kg b.w.의 농도로 투여한 군에서 대조군보다 유의적으로 높은 수준의 TNF-${\alpha}$가 분비되었다. 이상의 본 연구에서는 50 mg/kg b.w. 톳 열수 추출물 투여군에서 비장세포 증식능과 IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$의 분비량을 상승시키는 것을 알 수 있었다. 이처럼 톳 열수 추출물은 마우스 면역계의 조절기전에 작용하여 면역세포 활성을 직접적으로 촉진시키거나 또는 이와 관련된 다른 면역반응에 영향을 미침으로써 면역활성에 효과적으로 작용할 수 있으리라 사료된다. 앞으로 인체에 대한 유용한 검색이 중요한 의의가 있다고 생각되며, 톳에 존재하는 면역활성물질의 순수 분리 및 동정이 계속적으로 이루어져야 할 필요가 있고 작용 기전과 이용에 대한 상세한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
소양인(少陽人) 인동등지골피탕(忍冬藤地骨皮湯)이 중소(中消) 합병증(合倂症)에 미치는 영향(影響)을 살펴보고자 하였고 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 장관운동(腸管運動)을 억제(抑制)하였다. 2. Acetic acid에 의한 writhing syndrome을 억제(抑制)하였다. 3. Evans blue에 의한 모세혈관투과성(毛細血管透過性)을 억제(抑制)하였다. 4. Histamine에 의한 급성족부종(急性足浮腫)을 억제(抑制)하였다. 5. Cotton pellet에 의한 육아종(肉芽腫) 형성(形成)을 억제(抑制)하였다. 6. 흉선세포(胸線細胞) 및 비장세포(脾臟細胞)의 세포생존율(細胞生存率)을 증가(增加)시켰다. 7. 흉선세포(胸線細胞)로부터 ${\gamma}-IFN$ 및 IL-2의 분비(分泌)를 억제(抑制)하였다. 8. 비장세포(脾臟細胞)로부터 IL-4의 분비(分泌)는 증가(增加)시켰으나, $TNF-{\alpha}$ 및 $IL-1{\beta}$의 분비(分泌)는 억제(抑制)하였다. 9. 복강(腹腔) 대식세포(大食細胞)로부터 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ 및 nitric oxide의 분비(分泌)를 억제(抑制)하였다. 10. 복강(腹腔) 대식세포(大食細胞)의 lucigenin chemiluminescence 및 FITC-conjugated E. cole engulfment를 촉진(促進)하였다. 이상의 실험(實驗) 결과(結果) IJTE는 장관운동(腸管運動)을 억제(抑制)하였으며, 진통(鎭痛) 및 항염작용(抗炎作用)을 나타냈고, 이들 작용은 면역세포(免疫細胞)로부터 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ 및 nitric oxide의 생성(生成)을 억제(抑制)하기 때문인 것으로 추정된다. 따라서 이러한 기전(機轉)에 의하여 인동등지골피탕(忍冬藤地骨皮湯)은 중소(中消) 합병증(合倂症)의 하나인 염증(炎症)을 억제(抑制)하는데 유효(有效)한 것으로 사료(思料)된다.
정상 BALB/c 마우스의 복강에서 분리한 대식세포를 조제 림포카인 및 재조합 림포카인 (rGM-CSF, rIL-2, rIL-4, $rIFN-{\gamma}$)으로 18 시간 반응시켜 활성화시키고 대식세포 $1{\times}10^5$ 개와 $methyl-[^3H]-thymidine$으로 표지된 질트리코모나스 $1{\times}10^4$ 개를 10:1 비율로 넣고 18 시간 동안 $37^{\circ}C$, 5% $CO^2$ 항온항습기에서 반응시킨 다음 상청액 $100{\;}{\mu}l$씩을 scintillation cocktail 2ml에 넣어 방사능을 측정하여 세포독성을 관찰하고 nitrite 생산량을 측정하였다. rIL-2 40U/m1나 $rIFN-{\gamma}$ 100U/ml로 활성화시킨 대식세포는 대조군 보다 높은 세포독성을 보였으나 2개의 림포카인을 촌합시켰을때 낮은 세포독성을 보였다. rIL-4를 rGM-CSF, rIL-2 및 $rIFN-{\gamma}$와 각각 혼합시켰을 때 각 림포카인에 의한 대식세포의 세포독성은 감소되었다. 조제 림포 카인에서 IL-2에 대한 항체는 세포독성을 현저히 감소시켰다. Nitrite 생산량은 $rIFN-{\gamma}$ 및 rIL-4 각각으로 대식세포를 활성화시켰을 때 세포독성 정도와 비례되었고, rIL-2와 $rIFN-{\gamma}$을 혼합 시켰을 때 nitrite 생산량이 높고 증식이 억제되었으나 세포독성은 낮았다. 이러한 결과로 보아 rIL-2 및 $rIFN-{\gamma}$는 각각 단독으로도 대식세포를 활성화시켜 질트리모나스에 세포독성을 나타내며 rIL-4 는 세포독성을 억제시키는 것으로 생각되며, nitrite 생산량은 세포독성과 반드시 비례하지 않으나 nitric oxide가 질트리코모나스의 증식을 억제하는 것으로 생각된다.
생체 내 (ex vivo) 실험에서 더덕의 물 추출물을 4주간 격일로 마우스 체중 kg 당 0, 50, 500 mg/kg B.W.의 농도로 마우스에 경구 투여한 후 비장세포 증식능, LPS에 의해 활성화된 복강 대식세포가 분비하는 염증성 사이토카인 (IL-1 ${\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$) 의 생성량을 측정하였다. 그 결과 더덕 물 추출물은 ConA나 LPS로 자극하지 않은 경우 500mg/kg B.W. 농도에서 대조군에 비해 유의적으로 높은 비장 증식능을 보였다. LPS에 의해 활성화된 복강 대식세포의 사이토카인 분비량을 측정한 결과에서도 IL-1 ${\beta}$, TNF-${\alpha}$의 분비량은 마우스 체중 kg 당 500 mg/kg B.W. 농도의 투여군에서 유의적으로 높은 생성량을 보여주었으며, 50 mg/kg B.W.의 농도 투여군에서는 대조군에 비해 유의적인 차이를 보이지 않았다. IL-6의 경우 50 mg/kg B.W.과 500 mg/kg B.W. 두 농도 모두에서 유의적으로 높은 분비능을 보였다. 이상의 결과에 따르면 더덕 추출물의 비장세포 증식능과 사이토카인 분비 효과는 500 mg/kg B.W. 농도 투여시 가장 효과적으로 면역 세포와 면역 기관의 주요기능을 증진시킬 가능성이 있을 것으로 사료된다. 이러한 연구결과를 토대로 앞으로 더덕을 이용한 기능성 식품 개발에 기초 연구 자료로 활용되기를 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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