우리는 황련에서 분리된 베르베린의 화장품소재로의 활성을 평가하기 위해 항산화와 항주름 효능을 분석하였다. 시료의 독성을 평가하기 위해 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) assay를 수행하였으며 항산화와 항주름 활성평가를 위해 ROS 생성능, hyaluronic acid 생성능, MMP-2, -9, TIMP-1,-2, $TNF-{\alpha}$의 발현을 각각 측정하였다. 베르베린에 대한 자외선의 세포 독성은 CCD-986sk 섬유아세포를 이용하여 MTT 분석으로 측정되었고, 세포 독성이 $25{\mu}g/mL$의 농도 미만에서 관찰되지 않았다. 또한 베르베린이 ROS 생산을 농도 의존적으로 감소시키고 히알루론산의 합성을 촉진한다는 것을 발견했다. 베르베린은 주름 형성과 관련된 MMP-2 및 MMP-9의 protein 단계 및 mRNA 발현을 감소시키고 TIMP-1 및 TIMP-2의 발현을 증가시켰다. 프로 pro-inflammatory cytokine 으로 알려진 $TNF-{\alpha}$에 대한 베르베린의 억제효능을 실험한 결과, 농도의존적으로 $TNF-{\alpha}$ 유전자를 억제하는 효과를 나타내었다. 이러한 결과를 통해 베르베린은 활성산소종의 억제와 TIMP-1과 -2의 발현 조절에 의한 MMP-2,-9의 감소로 항산화 및 항주름에 효과가 있는 화장품 소재로서의 가치를 가진다고 사료된다.
종양 억제 유전자 p53은 인간 간암세포 Hep3B에서는 불활성화되어 있다. 베르베린(berberine)은 암세포의 증식을 억제하는 것으로 보고되어 있다. 우리는 베르베린을 처리한 Hep3B 세포에서 세포사멸이 유도되는지를 조사하였고 이 세포사멸이 p53과 DNA methyltransferase의 발현과 연관되어 있는지를 관찰하였다. MTT 분석을 통하여 세포 생존력을 측정하였다. 세포사멸은 각각 Annexin V flow 세포 분석을 사용하여 측정하였다. 베르베린이 처리된 세포에서 DNMT 효소 활성, mRNA 발현, 단백질 발현 정도가 검사되었으며, p53 단백질 발현은 웨스턴 블롯 분석에 의해 검사되었다. 베르베린 처리는 시간 및 용량 의존적으로 Hep3B세포의 세포사멸을 증가시켰다. 베르베린 처리 시 DNMT3b의 활성 정도, mRNA 발현 그리고 단백질 발현 정도가 모두 감소되었다. 이와는 대조적으로, Hep3B에서는 비활성인 p53 단백질의 발현은 DNMT3b의 감소와 동시에 증가했다. ERK의 발현은 변화가 없었으나, P-ERK의 발현은 농도 의존적으로 감소하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 Hep3B 세포에 베르베린의 처리는 DNMT3b의 발현을 감소시켜서 종양 억제 유전자인 p53의 증가를 유도할 수 있고, 이를 통해서 세포사멸을 증가 시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 이는 베르베린이 간암 세포의 증식 억제에 효과적으로 작용할 수 있음을 보여준다.
한국에서 전통적으로 사용되고 있는 생약제제 중 베르베린, 계피산 및 글리시리진의 정량을 위한 간단하고, 정확하고, 재현성 있는 모세관 전기이동법을 개발하였다. 이 성분들의 분리는 25$^{\circ}C$, 20 mM 인산완충액(pH 7.5)에서 실리카 캐필러리($57 cm{\times}75 {\mu}m$ i.d.)를 사용하여 수행하였다. 350 V/cm의 전기장으로 베르베린, 계피산 및 글리시리진의 동시 정량을 13분내에 할 수 있었다. 검정곡선은 베르베린에 대해서는 1~100 ${\mu}g/mL$, 계피산은 0.3~100 ${\mu}g/mL$, 글리시리진은 2.5~100 ${\mu}g/mL$의 농도 범위 안에서 좋은 직선성을 보여 주었다. 이 성분들에 대한 상대 표준편차(n=5)의 범위는 0.96∼2.35%이었다. 베르베린, 계피산 및 글리시리진에 대한 검출한계(S/N=3)는 각각 0.5, 0.1 및 2.0 ${\mu}g/mL$이었다. 이론단수는 181,000(베르베린), 88,000(계피산) 및 169,000(글리시리진)이었다. HPLC에서는 3,100~4,800이었다.
식물성 황색계 천연염재인 황벽, 황련 성분은 이소퀴놀린 유도체이며 베르베린을 함유하고 있는 염기성 염료에 속한다. 황련(Barberry root)은 지역에 따라 깽깽이풀, 왕련, 수련, 지련, 천련이라는 이명이 있다. 우리나라 전국의 산에 야생하고, 일본, 중국에 분포하고 있으며, 미나리아재비과(Ranunculaceae)의 여러해살이풀이다. (중략)
This study examined the degradation behavior of SB(standard berberine) dye and SB dyed silk using HPLC-MS instrument after degradation in the hydrogen peroxide/ultraviolet ray radiation/oxygen system up to 9 days and 40 hours respectively. In the degraded samples, berberine was detected at 5.2 min in the SB dye and 5.3 min in the SB dyed silk with its molecular ion=336 and the UV spectra of quaternary alkaloid. Degradation product 3(m/z=102) newly appeared after 5 day degradation treatment with continued increase till the end of degradation treatment. The amount of berberine in the degraded dye decreased with degradation progression. In the silk dyeings, berberine was detected only up to 21 hour degradation sample. The amount of berberine decreased dramatically during the first 6 hours of degradation treatment. The CIELAB color measurement of the silk dyeings showed dramatic change in the b* value, near zero in the 40 hour degraded silk. CIELAB and Munsell color measurements were in agreement with the HPLC-MS results of the dyed silk in the change of berberine content that the degraded silk became white and lost yellow color.
To be dyed with cationic Berberine, the cotton fiber was modified with reactive anionic agent. The Berberine, a natural cationic colorant of pure yellow, is the major component of Amur Cork tree extract and also can be employed as a natural antimicrobial agent due to its characteristic of cationic quaternary ammonium salt. By LC/MS analysis, it became obvious that the Berberine was contained in Amur Cork tree extract as a major color component. The adsorption of the Berberine on the cotton fabrics pretreated with the anionic agent was greatly increased comparing to that of untreated fabric. Because the anionic agent was colorless, it did not cause unintended color change of the dyeings. The dyed fabric with the Berberine has strong antimicrobial activity showing 99.5% of reduction of bacteria against Staphylococcu aureus.
In order to measure the bioavailability of Coptidis Rhizoma preparations, berberine was extracted by the mixture (1:1 v/v) of methanol and water from Coptidis Rhizoma and formulated into pills with some excipients. Disintegration time, dissolution rate, intestinal absorption rate, antibacterial effect, and serum concentration were measured. All pills were disintegrated about 60 minutes in gastric and intestinal juices and disintegration time did not change upon storage at $40^{\circ}C$ for 30 days. The pills manufactured using the extract which was extracted with the solvent containing dilute sulfuric acid showed faster dissolution and absorption from the small intestine than the other samples. It also showed not only the largest area under the serum concentration time curve and relative bioavailability, but also more potent antibacterial effect against gram-positive and gram-negative bacterias than the other samples. The correlation of the dissolution rate with absorption rate constant or $t_{max}$ showed a significant linear relationship.
A multi-layer of the dye, natural colorant Berberine, was successfully developed by the self-assembly deposition from water-soluble cationic dye(Berberine chloride) and anionic polyelectrolyte PSS(Polysodium 4-styrenesulfonate) in aqueous solution via electrostatic attraction. The corresponding results on multi-layer were characterized by UV-Vis absorbance measurements. The growth of multi-layer formed by the sequential interaction was also determined. The findings measured by UV-Vis spectrophotometer showed that the bilayer deposition characteristic was linear and highly reproducible from layer to layer.
The interaction between berberine and tannin in aqueous solution was investigated spectrophotometerically. The dyeing mechanism of silk fabrics (control and tannin treated silk fabrics) with berberine was based on thermodynamic parameters obtained from equilibrium adsorption experiments. In adsorption spectra of aqueous solution of berberine and tannin mixture two isosbestic points (328nm, 357nm) were found and the mole fraction of reaction of components was 1:1. Initial dyeing rates were increased and the diffusion of dye was more effective by tannin treatment. Without regard to tannin treatment the adsorption isotherm of berberine was the langmuir type except high temperature, 80℃. By tannin treatment the saturation dye uptake was increased, the increase of dye uptake appeared to be a result of entropy change rather than enthalpy change. All these results can be interpreted by the hydrophobic interaction between berberine and silk treated with tannin and it is reasonable to conclude that not only the ionic force, but also the hydrophobic interaction contributes to the binding of berberine and tannin treated silk treated with tannin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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