1. Ascorbic acid는 병B 배자까지는 점차적으로 증가하고 그 후에는 감소함을 알 수 있었다. 2. Triglyceride 및 total cholesterol은 병A 배자까지 증가하고 그 후는 감소함을 알 수 있었다. 3. Phospholipid는 병A 배자에서 감소하고 병B 배자에서 증가 다시 감소하였다가 점청기배자에서 부화직전까지 증가함을 알 수 있었다. 4. Free Fatty acid는 병A 배자에서 감소하고 병B 배자와 기A 배자에서 증가를 나타내고 다시 감소하였다가 부화직전에 증가하는 것을 알 수 있었다.
조류는 발생학적 특성상 수정과 초기 배발생을 제외한 거의 대부분의 개체 발생 과정이 난각 속에서 진행된다. 또한 배자가 발생하는 동안 배자의 뼈를 구성하는 석회성분의 거의 대부분은 난각에서 유래한다. 난각 석회성분은 배자유래의 융모성 뇨막(chorioallantoic membrane; CAM)의 모세혈관을 통하여 배자로 이동하다. 배자 발생후기로 가면 융모성 뇨막은 전체 난각과 거의 대부분 밀착하여 배자 발생 후기에 필요한 많은 양의 석회성분을 난각에서 배자로 공급하게 된다. 그러므로 한 개의 난각 속에서 두 개의 배자가 정상적으로 발생되기란 거의 불가능하다. (중략)
누에알의 배자발율 단계별 가용성 단백질과 불용성 단백질에 대한 native-PAGE와 SDS-PAGE 분석을 하였다. 가용성 단백질의 대부분은 ESP, vitellin, 30K 단백질로 구성되어 있었고 배자발육 시기별 난황단백질의 변화는 native-PAGE와 SDS-PAGE에서 일치하였다. 배자발생의 후기에는 난황단백질의 분해산물로 보이는 수개의 peptides가 검출되었고 침산처리 후 1일된 알에서 1개의 특이한 단백질이 출현하였다. 누에알 마쇄물의 원심침전물에 대한 SDS-FAGE 분석결과 수종의 peptides가 배자발육의 진전과 함께 새로이 검출되었다.
짚시나방(Lymantria dispar)의 배자 발생에 미치는 유약호르몬의 영향을 조사하기 위하여 유약호르몬 유사체인 methoprene을 알에 도포처리(topical treatments)하여 부화율, 부화 유충의 생체량 및 알의 단백질과 탄수화물 함량 변화를 조사하였다. Methoprene 농도별 처리는 부화율에 영향을 미쳐 methoprene 처리군이 대조군(78.5%)에 비해 낮은 부화율을 나타 냈으며 5.0$\mul$ 처리군에서 가장 낮은율(42.5%)을 보여 주었다. 부화 직후 1령 유충의 생체량은 대조군이 0.7525mg으로 가장 높았으며 methoprene 농도 처리 순으로 감소하다가 5.0${\mu}\ell$ 처리군에서 0.6487mg으로 최하치를 나타냈다. 처리군별로는 대조군과 0.5$\mul$ 처리군이, 1.0$\mul$와 2.0$\mul$ 처리군의 생체량이 유사하였다. 배자 발생중 알의 단백질 함량 변화에서 0.5$\mul$ 처리군은 2, 4일째 대조군과 뚜렷한 차이를 나타냈으며, 탄수화물도 대조군에 비해 처리군이 낮은 함량을 유지하였다.
본 연구는 누에 배자 발생 초기 특이 발현 유전자 프로모터를 개발하기 위한 연구의 일환으로 추진하였다. 누에 초기 및 후기 배자로 부터 분리한 mRNA를 사용하여 subtractive hybridization 분석법으로 누에 배자 발생 초기 특이 발현 유전자 4종을 선발할 수 있었다. 선발된 4종 유전자는 각각 BmNanos protein mRNA, BmNanos-P protein mRNA, BmNanos-O protein mRNA 및 BmVasa protein mRNA 유전자와 매우 높은 상동성을 보였다. 또한, 본 연구에서는 Northern hybridization 분석 및 real time PCR 분석을 통하여 배자 초기에 특이적으로 고발현하는 BmNanos-like 등 4개 선발 유전자의 발현 특성을 확인하였다. 이러한 결과는 추후 추진 할 누에 형질전환용 전이벡터의 효율성 제고를 위한 연구에 활용될 것으로 기대된다.
누에유전자원의 장기 안전보존 기술 개발의 일환으로 우선 보존 중인 300여 계통에 대한 2년간 냉장에 의한 장기보존시험을 하였다. 보호 온도 별 냉장일수 및 중간처리 횟수를 달리한 6개 시험구로 잠종보호기간을 2000년 7월1일부터 2002년 5월1일까지 680일로 하였다. 시험구 별 배자검사 결과, 잠종보호기간 400일의 경우 시험구 별, 원산지 별로 배자발육 차이는 나타나지 않았으며 전체 배자발육 정도는 을A 수준이었다. 잠종보호기간 500일의 경우, 원산지 별, 시험구 별 차이를 보이며 전체 배자발육 정도는 을B 수준이었으며 잠란 상태는 양호하였다. 잠종보호기간 650일의 경우, 원산지 별, 시험구별 차이를 보이며 전체 배자발육 정도는 병A수준이었으며 잠란 상태는 양호하였다. 원산지 별로 보면 유럽종>옅대종, 한국종>일본종, 중국종 순으로 유럽종이 발육경과가 빨랐으며 시험구 별로 보면 대조구(A구)와 C구 2 시험구가 기타 시험구보다 발육정도가 빨랐으며 전체 시험구에서 D구와 F구가 개체 별로 발육정도가 안정된 상태였다. 최청기간 중 잠란의 외형적 성상조사 및 배자검사 결과, 계대보존 가능성(예상 부화비율)이 전체 6개 시험구 평균 61%로 높게 나타났다. 그러나 실제 부화된 계통은 시험구A, B는 전무하였고 시험구C 3계통, 시험구D 48계통, 시험구E 1계통, 시험구F 29계통으로 배자발육이 늦고 배자상태가 안정적이었던 D구와 F구가 가능성 높은 시험구로 나타났다. A~F 6개 시험구 중 D,F 2개 시험구의 성적이 우수하였는데 시험구 D, F의 $-2.5^{\circ}C$ 보호기간은 각 235일과 310일로 타 시험구보다 $-2.5^{\circ}C$ 접촉기간이 길었다. D, F 2개 시험구의 부화된 계통수는 각 48계통, 29계통으로 전체 조사계통의 15.6%, 9.4%를 차지하였다. D, F시험구의 평균부화비율은 각 54.5%, 71.6%였으며 평균사란비율은 각 33.0%, 25.0%였다 이상의 시험 결과를 보면 D, F 두 시험구 모두 최청사란비율이 일반계통보다 높게 나타나 월년잠종의 2년간 냉장보존을 위해서는 최청사란비율에 직접적으로 작용하는 최청 조건의 재검토가 우선적으로 필요함을 알 수 있었다.
초파리 돌연변이를 이용한 신경연접에서의 신경충격의 전달을 알아보기 위하여 배양한 초파리 배자 신경세포의 신경연접 미세구조를 관찰하여 분석하였다. 배양된 Wild-type 초파리 배자 신경세포의 신경연접(synapse)은 신경연접간극(synaptic cleft)에 의해 구분되면서 평행하게 뻗어있는 신경연접전 돌기(presynaptic area)의 세포막과 신경연접후 세포(postsynaptic cell)의 세포막 구조에 의해서 확인하였다. Presynaptic active zones과 postsynaptic densities는 각 세포막부분의 전자밀도에 의해 구분하였다. 특히 두 개의 세포막이 서로 근접하여 있으면서, 하나 또는 그 이상의 전자밀도가 높은 presynaptc densities 를 가지고 있고 그 주위에 투명한 신경연접소포들(clear core synaptic vesicles)이 모여있을 경우 이를 신경연접전 돌기로 보았다. 신경연접전 돌기에는 평균 $35.1{\pm}1.44$ nm 직경의 작고 투명한 신경연접소포들이 모여있었다. 신경연접소포들 중 일부는 세포막이나 세포막의 전자밀도가 높은 부분에 직접 접촉하고 있었는데 이를 신경전달물질이 방출되기 직전인 morphologically docked vesicles로 보았다. 이외에도 신경연접전 돌기에서는 내부가 전자밀도가 높은 물질로 채워져 있고 직경이 큰 dense core 신경연접소포들도 관찰할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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