커들란과 활성탄의 조성을 몇 가지로 나누어서 실험한 결과 커들란 30 g/L과 활성탄 6 g/L의 비로 제조하여 Autoclave ($121^{\circ}C$, 1 atm, 15 min)에서 가열한 담체의 물성이 다공성 특성 및 세포의 고정화 측면에서 우수함을 보였다. 충전층 반응기를 설치하여 담체를 고정시킨 후 미생물 부착능력을 실험한 결과, 철 산화 세균에 의하여 시간이 증가할수록 철 산화 속도가 빨라지고, 이 과정을 주사전자현미경으로 촬영한 결과 시간이 증가할수록 담체에 부착되는 미생물의 농도가 증가함을 확인할 수 있었다. 그리고 본 실험에서 사용된 담체는 환경 친화적인 고분자로 2차적으로 발생할 수 있는 환경문제를 해결 할 수 있으며 기존의 담체에 비교하여 비표면적이 넓고, 인체에 해가 없는 생물고분자 담체이므로 식품용도의 흡착제 등으로도 유용하게 사용될 수 있다.
국내에서 구입 가능한 주요 식이 소재로부터 장내의 대표적인 유해균인 Clostridium perfringens의 생육을 억제시키는 소재를 탐색한 결과 감자즙에서 강력한 항균활성을 발견하였다. 감자즙 중 70% 황산암모늄용액에서 침전되는 단백질성 물질이 항균활성을 나타낸 것으로 밝혀졌으며, 이 감자단백질은 pH 4~10 사이에서는 안정하나 $60^{\circ}C$에서 10분간의 열처리로 그 활성이 소실되었다.
강원도를 비롯한 전국에서 발효식품 44점으로부터 유해균에 대한 생육억제 활성이 우수한 고초균주를 분리 및 동정하였으며, 생육억제 활성이 가장 우수하였던 Bacillus amyloliquefaciens MBE1283로 명명된 균주의 유해균에 대한 생육억제 활성, 전분분해 효소활성 및 생육특성을 조사하였다. Escherichia coli O157:H7 KCCM40406을 비롯한 8종류의 유해균에 대한 생육억제 활성을 평가한 결과, 막걸리에서 분리된 B. amyloliquefaciens MBE1283 균주는 다른 B. amyloliquefaciens 균주들에 비해 유의적으로 높은 유해균 생육억제 활성을 나타내었다. B. amyloliquefaciens MBE1283 균주의 ${\alpha}$-amylase 효소활성은 대조구 균주들과 비교하였을 때 현저히 낮았으나 glucoamylase 효소활성은 대조구로 사용한 균주와 유사한 수준이었다. B. amyloliquefaciens MBE1283 균주의 최적 생육온도는 $45^{\circ}C$로서 대조구 균주보다 온도에 대한 내성이 있는 것으로 판단되었으며, 균체 성장에 적합한 최적 배지는 pH 6이었다. 본 연구를 통하여 막걸리로부터 분리된 B. amyloliquefaciens MBE1283 균주는 여러 종류의 유해균에 항균활성을 지니며 높은 온도와 낮은 pH에 대하여 내성을 지닌 것을 알 수 있었다.
강한 항진균 활성을 나타내며, 낮은 적혈구 용혈활성을 갖는 새로운 합성 펩티드를 얻기 위하여 cecropin A(1-8)-magainin 2(1-12) 및 이들의 유사체들을 설계하고 이들을 고상법에 의하여 합성하였다. 합성 펩티드의 항진균 활성은 Trichosporon beigelii에 대한 성장억제능에 의하여 측정하였으며, 세포독성은 인간의 적혈구 세포에 대한 용혈활성에 의하여 측정하였다. 펩티드의 양쪽 친매성의 증가는 항진균활성보다는 적혈구 용혈황성에 큰 영향을 미쳤다. Cecropin A(1-8)-magainin 2(1-12)의 12번 아미노산이 Lys을 Ala으로 치환시킨 유사체 펩티드(A2)는 가장 강한 항진균활성(minimum inhibitory concentration : 2.5.$\mu$g/ml)을 나타내며 비교적 낮은 적혈구 용혈활성(200.$\mu$g/ml의 펩티드 농도에서 0.5% hemolysis를 나타냄)을 나타내었다. 따라서 A2의 펩티드는 세포독성을 갖지 않으며 강한 항진균 활성을 가지는 모델로서 유용하게 사용될 것이다.
복분자(Rubus coreanus Miquel)는 anthocyanin, phenolic acid, tannin, flavonoid, stilbenoid와 같은 생리활성물질이 풍부하게 존재하는 것으로 보고되었으며 항염증, 항암활성, 항산화효과 등 다양한 생리활성에 대한 효능이 있어 건강식품으로써 애용되고 있을 뿐만 아니라 약용성 건강보조식품 등으로 각광받고 있다. 생물전환(Bioconversion)은 미생물 또는 효소의 생물학적 촉매 기반 천연소재의 생리활성 물질기능성, 생체이용률, 안전성을 증대시키기 위한 방안으로 많은 연구가 진행되고 있으며 아울러 식품, 의약품, 화장품 등 다양한 분야에서 활성화 되고 있다. 본 연구는 불가사리 발효액으로부터 유산균을 분리하였으며, 유전학적 특성을 확인하기 위하여 16S rDNA 염기서열을 분석하였다. 전북 고창에서 수확된 복분자를 분말상태로 유산균과 발효공정을 수행하였으며, 복분자의 최적 추출조건 선정과 발효공정 전 후의 활성을 관찰하였다. 발효공정 후 추출물의 기능성 평가를 진행하기 위하여 DPPH radical scavenging activity, total polyphenol 함량을 확인하여 항산화 효능 및 유효성분 함량을 평가하였다. 또한 대식세포인 Raw 264.7을 사용하여 MTT assay, Nitric oxide (NO) 생성 억제 효능을 확인하여 세포독성 및 항염증 활성을 평가하였다. 실험결과, 발효기간이 다른 불가사리 비료발효액으로부터 16 종의 다양한 균주를 확보하였으며, 생물전환 공정에 유용 균주를 선정하기 위하여 복분자 분말의 발효공정을 실시한 결과 3 종의 유산균 처리군에서 무처리군 대비 DPPH radical 소거능 및 polyphenol 함량이 증가됨을 확인하였다. 그 중 가장 우수한 활성을 나타내는 균주를 16S rDNA 염기서열 분석한 결과 Lactobacillus coryniformis A6-4로 확인되었으며, 발효공정 후 항산화 활성은 무처리군 대비 약 115%, polyphenol의 함량은 무처리군 대비 약 121%로 증가됨을 확인되었다. 또한 발효공정 후 독성활성이 감소되는 경향을 확인되었으며, 항염증 활성이 유의적으로 증가됨을 확인하였다.
77-AG-567 균주는 Pyricularia oryzae와 Sphasrotheca fuliginea에 대한 항균활성을 나타냈다. 활성 물질을 정제해 가는 과정에서 이 균주는 blasticidin S와 또 다른 항생물질을 동시에 생산한다는 사실을 알았다. 이 화합물은 UV 및 $^1$H NMR 스펙트럼에 의해 E-73이라고도 일컬어지는 acetoxycycloheximide로 밝혀졌다. 균주를 동정해본 결과 77-AG-567균주는 Streptomyces atbutus로 판단되며 지금까지 blasticidin S와 acetoxycycloheximide를 동시에 생산하는 것으로 알려져 온 S. albulus와는 다른 특성을 나타냈다. 특히 주목할만한 차이점은 포자의 표면이였다. 또한 acetoxycycloheximide는 지금까지 효모와 종양세포에만 생리활성을 나타내는 것으로 알려져 왔으나 본 실험결과 Pyricularia oryzae와 Sphasrotheca fuliginea에도 항균활성을 가진다는 사실을 알았다.
Bacillus licheniforntis에서 분비된 단백질 추출물에서 ammonium sulfate fractionation과 Sephadex G-75젤 여과 크로마토그라피를 사용하여 부분 정제된 2개의 서로 다른 활성을 갖는 단백질 분해 효소를 얻었다. 단백질 분해 효소 type l은 카제인에 대해 비교적 높은 활성을 보이며 organotluoride와 EOTA에 의한 억제에 매우 민감했다 이 효소의 최적 pH는 7.5였으며 $75^{\circ}C$에서 빠르게 변성되었다. 단백질 분해효소 type II는 type I에 비해 낮은 카제인 분해 활성을 보이며 ImM PMSF와 10mM EOTA용액과 함께 $37^{\circ}C$에서 30분 간 반응시키면 역사 활성이 억제되었다 한편 이 효소 는 pH 8.0에서 최대 활성을 나타내고 $71^{\circ}C$ 에서 상대적으로 늦게 불환성화 되었다.
본 연구에서는 간염치료제로 효과가 있는 민간제제(NS-P)의 성분 분석 및 항균 활성과 항산화 활성을 연구하였다. 이 NP-S는 그람 양성균인 Staphylococcus aureus와 그람 음성균인 Salmonella typhimurium 그리고 진균인 Candida albcans에 항균 활성을 보여 주었을 뿐만 아니라, 지질의 과산화를 억제하는 항산화 활성을 나타냈다. 이러한 NP-S는 C/H/N/S의 원소비가 15.5/4.8/11/10으로 황(S)이 상당히 많이 존재하고 있으며, 휘발성 물질인 암모니아를 2.11M 함유하고 있었다. 이 외에도 6.7의 펩타이드, 0.3의 유리 아미노산, 0.1의 무기 인산염을 함유하고 있으며, 미량 원소로서 Cl, Si, Mg, Zn도 함유하고 있다.
토양으로부터 pretease활성이 우수한 균주를 선별하여 형태학적, 생화학적 동정과정 및 16 rRNA염기서열 분석 등의 방법을 이용하여 Bacillus sp. DS-1으로 동정하였다. Bacillus sp. DS-1은 초기 배지의 pH가 7.0인 조건에서 정지기에서 가장 높은 활성을 나타내었다. Bacillus sp. DS-1으로부터 protease를 생산하기 위해 탄소원으로는 1% glucose, 질소원으로는 1% yeast extract를 첨가할 때 대조구와 비교하여 각각 20%와 30% 더 효과적인 것으로 나타났다. Bacillus sp. DS-1이 생산하는 protease의 최적활성은 55$^{\circ}C$와 pH 7.0이었다. 1 mM의 EDTA첨가에 의해 protease활성이 84%실활 되었고 이 결과로부터 Bacillus sp. DS-1의 상등액에 존재하는 주된 protease 활성은 metalloprotease임을 알 수 있었다.
Penicillium verruculosum 섬유소 분해효소의 유도물질인 KC-flock 및 cellobiose octaacetate(COA)를 유일한 탄소원으로 포함하는 배지에서 21일간 배양하면서 배양여액 중의 섬유소 분해효소 각 성분의 활성도와 전기영동상의 단백질 양상을 검토하였다. 배양여액의 중의 총단백질 생성 및 섬유소 분해활성의 유도 효과는 COA 배지가 다른 두 배지의 3배 이상이었다. 배양기간의 증가에 따라 배양여액 중의 총단백질량이 증가되었는데 CMC 분해활성이나 $\beta$-glucosidase 활성의 증가보다는 avicel 분해활성도의 증가가 총단백질량의 증가와 유사하다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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