전통발효식초에 속하는 사과식초로부터 에탄올 및 증류수를 이용, 다당체를 분리하여 새로운 면역활성 물질을 확인하고자 하였다. 사과식초를 농축하고, 80% 에탄올을 가하여 침전물을 얻었으며 소량에 물에 용해하여 투석 및 동결건조를 거쳐 조다당 KAV-0를 얻었다. 구성당 분석 결과, KAV-0는 주로 mannose 38.2%, galactose 19.1% 및 glucose 14.3%로 구성되어있음을 확인하였고, 정상세포주(RAW 264.7 세포 및 대식세포) 및 종양세포주(B16-BL6 melanoma 세포)에 대해 세포독성 측정 결과, 직접적인 세포독성을 나타내지 않았다. 대식세포 유래 세포주인 RAW 264.7 세포 자극에 대한 사이토카인 및 산화질소 생산능을 측정한 결과, IL-6, $TNF-{\alpha}$ 및 산화질소 모두 농도 의존적으로 분비능이 증가하고 저농도에서도 우수한 활성을 나타냈으며, 마우스 복강유래 대식세포 자극에 대한 사이토카인 및 산화질소 생산능에서도 동일한 양상의 결과를 보여 사과식초 유래 조다당 KAV-0가 높은 대식세포 활성능을 소유함을 확인할 수 있었다. 한편, KAV-0의 정맥투여에 따른 NK 세포 활성화를 측정한 결과(ex vivo), 시료에 의해 활성화된 NK 세포는 Yac-1 종양 세포주에 대한 치사활성을 농도 의존적으로 증진시켰으며, $1,000{\mu}g/mouse$에서 월등히 우수한 NK 세포 활성능을 유도하였다. 또한, B16-BL6 melanoma를 이용한 폐암전이모델에서 KAV-0를 정맥투여한 뒤 항전이 활성을 측정한 결과, 농도 의존적으로 암 저해 효과가 나타났으며, 특히 $1,000{\mu}g/mouse$에서는 약 53%의 우수한 암전이 억제 활성을 나타냈다. 이상의 결과로부터 사과식초 유래 조다당 KAV-0는 인체의 면역계를 자극하여 우수한 면역활성 및 항전이 효과를 나타낼 수 있음이 확인되었고 건강 기능성 소재로의 활용 가능성이 충분할 것으로 최종 판단되었다.
연구배경 :결핵은 세포 매개성 면역반응이 병태생리에 중요한 역할을 하는 감염성 질환이다. 결핵균 항원으로 T 림프구가 활성화되면 여러 종류의 cytokine을 분비하며 T 림프구의 분화와 증식, 대식세포의 활성화를 촉진한다. 본 연구에서는 결핵의 중증도, 숙주의 면역상태 및 예후를 반영하는 지표로서 활성화된 T 림프구에서 만들어지는 IL-2의 수용성 수용체인 sIL-2R와 IFN-$\gamma$를 측정하였고 활성화된 대식세포에서 분비되는 neopterin을 측정하여 임상적 유용성을 판정하고자 하였다. 대상 및 방법 :활동성 폐결핵 환자 39명, 결핵성 림프절염 환자 6명의 치료전과 정상 대조군 10명에서 혈청 sIL-2R, neopterin, IFN-$\gamma$를 측정하였고, 결핵성 흉막염 환자 22명에서 치료전 혈청과 흉막액에서 각각 sIL-2R, ADA, neopterin을 측정하였다. 폐결핵 환자 39명을 ATS guidelines에 따라 중증도를 분류하였고, 사망한 1명과 결핵요양소로 전원된 2명을 제외한 36명에서 초치료 2개월 후 혈청 sIL-2R, neopterin과 IFN-$\gamma$를 측정하였다. 결 과 : 1) sIL-2R과 IFN-$\gamma$는 결핵환자에서 대조군에 비하여 증가된 경향을 보였다(p>0.05). Neopterin은 대조군 $4949{\pm}1242.l$ pg/ml, 폐결핵 $29.67{\pm}2132.8$ pg/ml, 결핵성 림프절엽 $3013{\pm}1877.3$ pg/ml, 결핵성 흉막염이 $2035{\pm}1216.4$ pg/ml로 결핵환자에서 대조군에 비하여 감소되는 경향을 보였으며, 폐결핵군과 결핵성 흉막염군에서는 통계적으로 유의하게 감소되어 있었다(p<0.05). 2) 폐결핵의 중증도가 심할수록 sIL-2R와 IFN-$\gamma$는 증가하였고, neopterin은 감소하였다(p<0.01). 3) 폐결핵 환자 36명에서 치료 후 측정한 sIL-2R는 $1071{\pm}l139.4$ U/ml에서 $1023{\pm}1920.9$ U/ml로(p>0.05), IFN-$\gamma$는 $41{\pm}52.8$ pg/ml에서 $22{\pm}23.9$ pg/ml로 각각 감소하였고 (p<0.05), neopterin은 $3158{\pm}2272.6$ pg/ml에서 $3737{\pm}2307.5$ pg/ml로 증가하였다(p>0.05). 이러한 결과는 경증군과 중등증군에 비해 중증군에서 현저한 변화를 보였고 임상적 경과와 상관성을 보였다. 4) 결핵성 흉막염 환자 22명에서 sIL-2R와 ADA는 혈청에 비하여 흉막액에서 유의하게 높은 값을 보였으나(p<0.01), neopterin은 차이가 없었다(p>0.05). 결 론 : 이상의 결과를 바탕으로 특히 중증군에서 치료 후에 sIL-2R, IFN-$\gamma$와 neopterin을 추적 관찰하면 숙주의 면역반응상태, 임상적 중증도 및 치료 반응성을 예측하는데 도움이 될 것으로 생각된다. 또한 결핵성 흉막염 환자에서는 국소적인 변역반웅의 활성화로 흉막액내의 면역학적 지표의 측정이 혈청 검사보다 특이적이며, 흉막액의 sIL-2R의 측정이 결핵성 흉막염의 진단에 유용할 것으로 생각된다.
다이옥신의 독성은 체중의 감소, 간 대사효소의 증가, 면역억제, 정자 수의 감소, 발암 촉진 등 매우 다양한 양상을 나타내고 있다. 그러나 아직도 다이옥신이 어떻게 다양한 독성을 나타내는지에 대한 설명은 미비한 상태이다. 다만 다이옥신에 의해 증가되는 싸이토크롬 P450 lAl (CYPlAl) 효소 유전자의 전사활성화 기전연구를 통하여 다이옥신의 작용은 생체 내에 존재하는 다이옥신 수용체에 의하여 매개된다는 사실을 알게 되었다. (중략)
C. parvum은 면역학적(免疫學的) 연구(硏究)에 immunomodulating agent로서 광범위(廣範圍)하게 이용(利用)되고 있기 때문에 C. parvum이 SRBC에 대(對)한 면역반응(免疫反應)에 미치는 영향(影響) 및 그 기전(機轉)을 알아보고자 본(本) 실험(實驗)을 실시(實施)한 결과(結果) 다음과 같은 성적(成績)을 얻었다. C. parvum이 SRBC에 대(對)한 DTH에 미치는 영향(影響)은 C. parvum 투여시기(投與時期)에 따라 상이(相異)한 결과(結果)를 나타내었는데 C. parvum을 SRBC로 면역전(免疫前)에 정맥내(靜脈內)로 투여(投與)했을 때 유의(有意)있는 지연성(遲延性) 과민반응(過敏反應)(DTH)의 감소(減少)를 보였으며 이러한 현상(現象)은 cyclophosphamide로 처리(處理)했을 때 완전(完全)히 소실(消失)되었다. 또한 C. parvum은 S. typhimurium의 증식(增殖)을 억제(抑制)하고 비장(脾臟) 및 간장종대(肝臟腫大)를 야기(惹起)시켰는데 이러한 사실(事實)로 미루어 C. Parvum의 DTH 감소현상(減少現象)은 suppressor T 세포(細胞) 또는 활성화(活性化)된 대식세포(大食細胞)의 중개(仲介)에 의한 것으로 사료(思料)되었다. C. parvum은 SRBC에 대(對)한 항체가(抗體價)에 유의(有意)있는 영향(影響)을 미치지 못하였다.
질경이 열수 추출물 첨가가 마이스의 면역세포 증식 미치는 영향에 대한 연구 결과, 음의 대조군에 비해 질경이 열수추출물을 첨가한 경우 모든 농도에서 비장세포 활성이 높게 나타났으며, 특히 $250{\sim}500{\mu}g/mL$ 농도에서 유의적으로 증가하였다(p<0.05). 한편, 대식세포 활성화로 유도된 cytokine 분비량 $IFN-{\gamma}$, IL-2, $TNF-{\alpha}$ cytokine측정 결과, IL-2는 유의성을 보이지 않았으나, $IFN-{\gamma}$, $TNF-{\alpha}$ 모두 $250{\sim}500{\mu}g/mL$ 농도에서 유의적인 차이를 보였다(p<0.05). 이상의 나타난 결과로 질경이 열수 추출물이 마이스 비장세포 생성을 유도하고, cytokine 분비량에도 영향을 줄 것으로 보여 진다. 따라서 질경이 물 추출물이 면역 기관과 면역세포를 자극하여 면역능 증가에 기여할 것으로 사료된다.
Cancer-testis (CT) antigen은 다양한 종양과 정상 고환에서 제한적으로 발현되고, 암환자에서 체액성 면역과 세포성 면역반응을 일으키는 종양항원이다. 지금까지 MAGE, NY-ESO-1, GAGE, BAGE, LAGE, SSX2, NY-SAR-35를 포함하여 100개 이상의 CT antigen들이 동정되었고, 이러한 CT antigen들은 백신을 이용한 면역치료에 있어서 중요한 요소로 작용할 것으로 사료된다. CT antigen은 여러 가지 방법들을 통해 확인할 수 있고, X 염색체에 암호화 되어있는 CT-X gene과 X 염색체에 암호화 되어있지 않은 non-X CT gene으로 나눌 수 있다. 또한 몇몇의 종양에서 비정상적으로 활성화되지 않거나 발현되지 않는 CT antigen도 존재한다. 생식세포 조직과 종양에서 CT-X gene의 생물학적 역할이 아직 명확하게 규명되지 않았지만, 현재 여러 종류의 CT antigen을 이용한 암백신 치료법이 시도되고 있다. 본 논문은 암의 면역치료를 위한 CT antigen의 최근 연구동향과 앞으로의 연구방향에 대해 서술하고자 한다.
고등균류 균사체에 대한 면역조절기능과 항알레르기성 물질을 탐색하기 위해서 우선 단백다당류를 추출 회수해서 몇 가지 관련된 실험을 수행하였다. 면역감수성이 우수한 BALB/C 마우스를 통해서 적혈구 응집과 용혈반응, 항체생산능을 확인하기 위해서 PFC와 RFC실험, 마크로파아지와 임파구 세포들의 탐식능력 실험을 수행한바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 탐식능의 결과는 상황버섯(Phellinus igniarius), 장수버섯(Fomitella fraxinea), 버들송이(Agrocybe cylindracea), 균사다당체 모두가 복강탐식세포, 말초임파구, 비장의 식세포에 대해서 유의성 있는 식작용을 확인했다 상황은 복강식세포, 버들송이는 비장식세포에 대해서 식작용을 활성화시키는 결과를 나타냈다. 2. PFC와 RFC의 실험결과에서도 대조군에 비해 시료를 투여한 실험군에서 면역세포가 상황 130%, 장수 90%, 버들송이 70% 정도로 증강된 활성을 보였다. 3. 용혈소가와 응집소가는 전반적으로 대조군에 비해 균사단백다당체가 $2{\sim}3$배의 높은 값을 보였다.
본 연구팀에서는 방사선에 의한 면역조혈계 및 위장관계 손상에 대한 방호를 위하여 당귀, 천궁, 작약 혼합물의 열수 추출물로부터 그 다당체 함량을 강화한 생약조성물 Hemo HIM을 개발한 바 있다. 본 연구에서는 열수 추출물에 기반을 두어 제조된 HemoHIM에 비하여 지용성 폴리페놀 성분을 강화함으로써 더 뛰어난 생리활성을 갖는 생약조성물을 개발하고자 30% 에탄올 추출과 열수 추출을 함께 시행하여 얻은 추출물을 기반으로 생약조성물 MH-30을 제조하였다. MH-30과 HemoHIM의 에탄올 분획 내의 성분을 HPLC로 비교 분석한 결과 수용성 성분에는 큰 차이가 없었으나 여러가지 지용성 성분이 MH-30에서 크게 증가하는 것을 확인하였으며, 특히 decursin의 함량은 8.7배로 크게 증가하였다. 다음으로 MH-30의 시험관 내 항산화 및 면역세포 활성화 효과와 방사선 조사 마우스에서 면역조혈계 및 재생조직의 방호 효과를 HemoHIM과 비교하여 관찰하였다. 항산화 활성을 비교하기 위한 시험관 내 hydroxyl radical 및 superoxide anion 소거 활성 평가에서 MH-30이 HemoHIM보다 높은 항산화 활성을 보였다. 림프구 증식능을 이용한 시험관 내 면역세포 활성화 시험에서는 MH-30과 Hemo HIM은 거의 비슷한 활성을 나타내었다. 방사선 조사 마우스에서 MH-30은 내재성 비장 조혈세포 집락수를 증가시키고 골수조직 내 세포사멸을 줄였으며, 위장관 재생조직인 소장움의 생존율을 증가시키는 등 방사선에 의한 면역조혈계와 재생조직 손상을 방호하는 효과를 보여주었다. 또한, 종합적인 방사선 방호 효과를 평가하는 지표인 방사선 조사 마우스의 30일 생존율도 MH-30 투여로 유의하게 증가함을 확인하였다. 특히 상기한 모든 마우스 실험에서 MH-30은 Hemo HIM보다 더 뛰어난 방호 효과가 있음을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과들은 새롭게 개발한 생약조성물 MH-30이 면역 조혈계와 재생조직의 방사선 손상을 줄여주는 효과가 있으며 기존에 개발된 HemoHIM에 비해 더 뛰어난 활성을 갖고 있음을 보여주었다. 따라서 MH-30은 방사선 사고 또는 암환자의 방사선치료 시 발생할 수 있는 면역조혈계 및 재생조직의 손상을 경감시킬 수 있는 방사선 방호 물질로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 생각한다.
본 연구에서는 산양유 발효유(F-GM)의 급여가 면역 활성과 체력증진에 미치는 영향을 조사하였다. F-GM을 경구 투여한 마우스의 비장세포는 림프구 유사분열 촉진인자인 ConA와 LPS에 대한 증식반응의 상승을 나타내었다. ConA를 처리한 비장세포로부터 분비되는 cytokine을 ELISA법에 의해 정량한 결과 F-GM 투여에 의해 IL-2와 IFN-${\gamma}$의 생성은 유의하게 증가하였으나, IL-4 및 IL-10의 생성은 별다른 변화를 보이지 않았다. 또한 RT-PCR을 이용한 이들 cytokine mRNA의 정량실험에서도 F-GM 투여로 IL-2와 IFN-${\gamma}$의 mRNA가 증가하는 것을 확인하였다. 한편 KLH(20 mg/mouse)를 정상 대조군 마우스 혹은 F-GM을 급이한 마우스에 각각 면역하고 5주째에 KLH에 대한 항체가를 측정한 결과 F-GM을 급이한 마우스에서 항체가가 유의하게 상승하는 것으로 나타났다. KLH에 대한 항체의 isotype을 조사한 실험에서는 KLH에 대한 IgG1, IgG2a 그리고 IgM 특이항체의 상승이 관찰되었다. F-GM 경구 투여가 세포성 면역에 미치는 영향을 측정하기 위하여 면역개시 7주째의 마우스를 이용하여 KLH에 대한 지연형 과민반응(DTH)을 측정하였다. 그 결과 F-GM을 경구 투여한 마우스에서 DTH의 유의한 상승효과가 확인되었다. 한편 수영시험을 통해 F-GM의 경구 투여가 체력증강에 미치는 영향을 측정한 결과 F-GM을 투여한 마우스에서 매우 유의한 수영시간의 연장 효과가 관찰되었다. 이들 결과로부터 F-GM은 면역세포의 활성화를 통한 면역력 강화는 물론 체력을 증가시키는 생리활성을 갖는 것으로 확인되었다.
본 연구에서는 구기자의 투여가 나일틸라피아의 면역 반응에 미치는 영향을 알기 위하여, 나일틸라피아에 구기자 3% 첨가 사료를 14주일간 투여하면서 어병 세균인 Edwardsiella tarda 유래의 FKC와 ECP를 복강 주사 또는 침지법으로 FKC와 ECP를 단독 또는 혼합 처리하였을 때의 비특이적 및 특이적 면역 반응에 대하여 조사하였다. 비특이적 면역 반응의 지표로서 보체의 용혈능과 lysozyme의 활성을, 특이적 면역 반응의 지표로서 로젯 형성 세포 수의 변화와 응집 항체가를 조사하었으며, 어병 세균인 E. tanla로 생균 공격 실험하여 상대 생존률을 구하였다. 구기자 첨가 사료를 투여하였을 때, 조사한 모든 비특이적 면역 반응 지표들이 활성화되었으며, 백신 처리 후에도 무첨가 사료 투여구에 비하여 높은 면역 활성을 보였다. 백신 처리구의 응집 항체가는 FKC와 ECP의 혼합 처리구가 가장 높았고 FKC 주사구, FKC 침지구의 순으로 응집 항체가가 낫게 나타났으며, 로젯 형성 세포 수도 같은 경향을 보였다. E. tarda로 생균 공격 실험한 결과, 구기자 투여만으로도 방어력이 증가되었다. 그리고 백신 처리하였을 때에는 혼합 처리구가 가장 높은 방어력을 보였으므로, 본 실험에서 사용한 구기라는 기존의 adjuvant와 같이 면역 반응의 증강 효과가 있는 것으로 판단되며, FKC와 ECP로 혼합 백신 처리하는 방법은 효과가 기대되는 백신 방법으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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