식품과 사료에서 곰팡이독소 오염은 세계적으로 중요한 문제이다. 곰팡이독소는 곰팡이의 이차대사산물로서 인축중독증을 야기하며 경제적인 손실을 초래한다. Aflatoxin, ergot alkaloid, fumonisin, ochratoxin, tremorgenic toxin, trichothecene 및 zearalenone 등이 식품과 사료에서 흘러 발생하는 곰팡이독소이다. 어떤 곰팡이는 하나 이상의 곰팡이독소를 생산하고, 또 어떤 곰팡이독소는 여러 종의 곰팡이에서 생성되기 때문에 여러 곰팡이독소가 함께 발견된다. 곰팡이독소의 발생에 영향을 끼치는 요인으로는 인위적으로 조절할 수 있는 보관과 환경적 조건도 포함된다. 기후와 같은 비본질적인 요인, 진균류의 계통 특이성 및 계통 변이와 같은 본질적인 요인 및 독소발생의 불안정성은 조절하기 어렵다. 곰팡이독소는 한 종의 동물에 있어서의 감수성과 종에 의존하며 인간에게 갖가지의 만성적 또는 급성적인 영향을 미친다. 그러나 반추동물은 곰팡이독소에 저항력을 가지고 있으며, 이는 반추동물의 위에 존재하는 미생물들이 곰팡이독소의 활성을 억제할 수 있기 때문이다. 곰팡이독소 피해의 경제적인 파급효과는 인축의 수명 단축, 축산물 생산감소, 오염된 식량과 사료의 처리 및 곰팡이독소의 문제점 해결을 위한 연구비용 등을 포함한다. 곰팡이독소 피해감소를 위한 국제적인 노력이 계속 진행되고 있지만 최근에 World Trade Organization이 발효되면서 동 식물이 지역간 자유로운 이동으로 곰팡이독소 피해 경감대책뿐만 아니라 피해측정이 어려워지고 있다.
'곰팡이 독소에 있어서는 안전 한계치란 허용될 수 없다. 각국별로 곰팡이독소 오염 한계치를 설정해놓고 있고 우리나라도 원료곡물에 50ppb, 사료에 20ppb로 설정되어 있지만 이는 원료곡물의 수입상의 문제점 등에 의해 설정된 최대허용치이지 절대 안전 영역은 아니다. 곰팡이독소에 대한 공통된 잘못된 인식은 사료에 항곰팡이제를 첨가함으로써 곰팡이독소 문제가 막아질 수 있다는 생각이다. 일단 한번 형성된 독소들은 독소흡착제거제의 사용을 제외하고는 현재 이용가능한 방법들로는 곰팡이독소를 파괴하거나 무독화시킬 수가 없다. 곰팡이독소 오염과 대응방법에 대한 인식의 제고가 절실하다.'
본 연구에서는 곡류 중 트리코테센류 곰팡이독소인 T-2 독소 및 HT-2 독소의 LC-MS/MS 분석방법을 검증하고 국내 유통 곡류 중 T-2 독소 및 HT-2 독소의 오염실태를 파악하였다. 곡류 중의 T-2 독소 및 HT-2 독소를 분석하기 위해, 염화나트륨을 포함한 90% 메탄올 용액으로 추출, 원심분리, 여과, 4% 염화나트륨용액으로 희석하고, 원심분리한 후, 여과한 후 면역친화성칼럼에 의해 정제한 시료를 LC-MS/MS 동시정량 분석하였다. T-2 독소 및 HT-2 독소의 검출한계 및 정량한계는 각각 $0.5{\mu}g/kg$ 및 $1.5{\mu}g/kg$ 얻었다. matrix-matched 표준 검량식에서 상관계수 0.99 이상의 직선성을 얻었으며, T-2독소와 HT-2 독소 2배에서 10배의 정량한계로 표준용액을 첨가한 시료에서 회수율은 T-2독소와 HT-2 독소 각각 $100.6{\pm}7.2%$, $96.8{\pm}9.4%$로 EU 가이드라인에서 제시하는 유효성 기준을 만족하였다. LC-MS/MS 정량법을 이용하여 국내 곡류 9품목 115건에 대해 T-2 독소와 HT-2 독소의 오염도를 조사하여 본 결과, 전체 곡류 115건 중에서 T-2 독소는 83건, HT-2 독소는 93건 검출되었으며 오염도는 T-2 독소는 N.D~37.1 ug/kg, HT-2 독소는 N.D~5.4 ug/kg 으로 낮은 수준이었으며, 오염도는 유럽기준치($100{\mu}g/kg$)이내 이었다. 본 연구에서 개발된 곡류 중 T-2 독소 및 HT-2 독소에 대한 분석법은 향후 우리나라 곡류 중 곰팡이독소 안전관리를 위한 시험법으로 활용가능하며, 오염도 자료는 안전성 평가의 기초자료로 활용이 가능할 것으로 사료된다.
T-2와 HT-2 독소는 type A trichothecene계 곰팡이독소에 속하는 식품 오염물질이나, 국내의 경우 기준치 설정과 분석법의 확립이 요구되고 있다. 본 연구에서는 T-2와 HT-2 독소의 분석법 확립에 도움이 되고자 옥수수와 현미 시료에 존재하는 carboxylesterase에 의한 T-2 독소의 탈아세틸화가 GC 및 HPLC에 의한 T-2와 HT-2 독소 분석치에 미치는 영향을 살펴보았다. 옥수수와 현미 시료로부터 제조된 carboxylesterase 조효소원에 의한 T-2 독소의 HT-2 독소로의 전환 정도를 살펴본 결과, 15분 이내에 84-86%의 HT-2 독소가 급격히 형성되었고, 30분 이후에는 93-95%로 증가한 후 일정하게 유지되었다. 시료에 존재하는 효소의 불활성화 여부가 분석치에 미치는 영향을 살펴보면, 효소를 불활성화 시킨 시료에서는 T-2 독소가 60-107% 검출되었고 HT-2 독소가 검출되지 않은 반면, 효소를 불활성화 시키지 않은 시료에서는 T-2 독소가 0-9% 검출되었고 HT-2 독소가 77-121% 생성되었다. 추출용매 및 추출방법에 따른 T-2 독소의 탈아세틸화를 살펴본 결과, methanol/water 80:20으로 추출한 경우에는 T-2 독소가 84-108% 검출되었다. 곰팡이독소의 동시분석을 위해 PBS로 1차 추출한 다음 methanol로 추출할 때, 효소를 불활성화 시킨 시료에서는 T-2 독소가 60-87% 검출되었고 HT-2 독소가 검출되지 않았다. 반면, 효소를 불활성화 시키지 않은 시료에서는 T-2 독소가 검출되지 않았고 HT-2 독소가 37-66% 생성되었다. 이러한 결과는 옥수수와 현미 시료에 존재하는 carboxylesterase에 의해 T-2 독소가 탈아세틸화되어 T-2와 HT-2 독소를 각각 정량분석할 때 분석치에 영향을 미칠 수 있다는 것을 시사한다.
우리나라의 사료관리법 상에서 곰팡이독소(Mycotoxins)의 규제 현황을 보면 이전에는 아플라톡신만을 유해물질 규제 대상으로 하다가, 오크라톡신을 추가하여 현재까지 규제 대상독소로 규정하고 있다. 그러나, 이미 사료공장과 관련 업체에서는 현행의 사료관리법에서 유해물질로서 규제하는 곰팡이독소보다도 규제대상이 아닌 후모니신이나 T-2독소 및 제아레나론을 비롯한 곰팡이독소가 중국산 곡물원료에서 더 문제가 된다는 사실을 외국기관에 직접 분석 의뢰한 샘플에서 나온 사실과 각종 정보경로를 통해서 알고 현재는 항곰팡이제와 더불어서 곰파이독소흡착제거제(Mycotoxin binders)를 병용해서 사용하는 것이 일반화되고 있다.
배경: 보툴리눔 독소 A형은 강직성 질환을 비롯한 여러 질환의 치료제로 널리 사용되고 있다. 최근에 보툴리눔 독소 A형은 근육비대를 치료하기 위해 널리 이용되고 있다. 하지만 보툴리눔 독소의 근육비대의 치료효과에 대해서 알려진 바가 거의 없다. 본 연구는 토끼 정강뼈 근육에 보툴리눔 A, B형을 주입 후 시간경과에 따른 근육의 위축을 확인하여 근육비대의 치료에 보툴리눔 B형이 효과적인지 확인하고자 하였다. 방법: 36마리의 토끼를 4그룹으로 분류하였다(1 그룹: 생리식염수 주사: 2 그룹: 보툴리눔 독소 A, B - 2U, 3 그룹: 보툴리눔 독소 A, B - 5U, 4 그룹: 보툴리눔 독소 A, B - 10U). 정강뼈근육에 보툴리눔 독소 A, B형을 주입 후 1, 2, 4주에 정강뼈 근육의 부피를 측정하였다. 신경자극기를 이용하여 독소 주입 후 1, 2, 4주의 근육의 단일 수축을 확인하여 근육기능의 변화여부를 확인하였다. 결과: 보툴리눔 독소 B형을 주입시 통계적으로 유의하지 않지만 A형에 비해 근육 부피의 감소가 관찰되었다(P>0.05). 반면, 근육의 단일 수축은 보툴리눔의 용량에 관계없이 B형을 주입한 근육에서 더 높게 관찰 되었다. 결론: 보툴리눔 독소 B형을 주입한 경우 근육 기능의 회복속도는 빠른 반면 근육의 위축은 A형에 비해 더 오랫동안 지속되었다. 따라서 근육비대의 치료에 있어 보툴리눔 독소 B형이 A형보다 보다 더 효과적이라고 사료된다.
사람에게 병을 일으키는 수 많은 세균이 분비하는 다수의 외독소중, 이곳에서는 Corynebacterium diphtheriae의 외독소인 디프테리아 독소와 Vibrio cholerae가 분비하는 콜레라 장내 독소에 관해 주로 논하기로 하며, 디프테리아 독소와 생화학적 병인성 기전이 비슷한 Pseudomonas aeruginosa가 분비하는 pseudomnas외독소와 콜레라 장내독소와 병인성기전이 유사한 Escherichia coli의 장내독소에 관하여는 간략하게 언급하고져 한다.
곰팡이독소는 곰팡이의 2차 대사산물로 동물용 원료사료 중에서 특히 곡물 및 곡물부산물에서 가장 흔하게 발생한다. 돼지는 곰팡이독소에 대한 감수성이 다른 동물에 비해 높은 것으로 알려져 있다. 아플라톡신, 디옥시니발레놀 및 제랄레논은 동물용 원료사료에서 가장 흔하게 발생하는 곰팡이독소이며, 국내 외에서 허용기준을 설정하여 관리하고 있다. 곰팡이독소는 종류에 따라 서로 다른 독성작용을 가지지만 모두 면역체계를 표적으로 하며, 최종적으로 돼지의 성장저하를 초래한다. 따라서 곰팡이독소에 의한 피해를 최소화하기 위한 다양한 대책이 필요하다. 일반적으로 곰팡이독소에 오염된 사료를 섭취한 돼지는 사료섭취량이 감소하며, 그 결과 증체량 저하가 발생한다. 사료섭취량 감소로 인한 필수영양소의 불충분한 공급은 영양소함량을 강화시킨 사료를 급여함으로써 증체량 감소를 최소화할 수 있다. 또한 곰팡이독소 저감제를 이용하여 곰팡이독소에 의한 피해를 저감시킬 수 있으나, 곰팡이독소의 종류 및 농도, 환경적 요인, 저감제의 종류 등에 따라 저감제 사용 효과에 대한 변이가 존재한다.
Vibrio vulnificus가 생산하는 용혈독소의 단백화학적, 면역화학적 연구에 이용할 목적으로 이 균의 용혈독소에 대한 항혈청을 간편하게 만드는 방법을 실험한 결과는 다음과 같다. Vibrio vulnificus가 생산하는 조용혈독소를 인위적으로 만든 liposome (cholesterol-phos-phatidyl-liposome)에 혼합하여 반응시킨 결과 분자량 50kD의 단백질인 용혈독소만 선택적으로 liposome에 결합되었다. 그러므로 liposome에 결합시킨 조용혈독소를 면역원으로 하고 이 면역원을 토끼의 등근육에 주사하여 항혈청을 간편하게 만들 수 있었으며 이 항혈청은 용혈독소에 대한 특이성이 높았다. 환자와 환경에서 분리된 Vibrio vulnificus의 용혈독소와 liposome를 이용하여 제조한 항혈청을 gel 내 침강반응으로 확인한 결과 단일 침강선을 형성하였다.
곤충병원세균인 Bacillus thuringiensis (비티)는 포자 형성과 더불어 살충성 Cry 독소단백질을 생산한다. Cry 독소단백질은 대상 곤충의 중장에 위치한 수용체와 특이적으로 결합하며 살충작용을 발휘하기에 비티의 적용해 충범위가 비교적 좁다. 본 연구는 비티의 적용해충범위와 살충력을 증가시키기 위한 일환으로 실시되었다. 서로 다른 네 가지 비티 균주에서 분리된 Cry 독소단백질은 각각 좁은 적용해충범위를 나타냈다. 이들 Cry 독소단백질을 혼합한 결과 적용범위가 현격하게 증가했다. 벡큘로바이러스가 비티의 적용범위를 증가시키는 지 알아보기 위해 Cry1Ac 또는 Cry1Ca 독소단백질을 각각 발현시키는 재조합바이러스로 검정한 결과 벡큘로바이러스는 Cry 독소단백질의 적용범위를 증가시키는 데 유효하지 않았다. Xenorhabdus nematophila (Xn) 세균 배양액은 조사된 모든 곤충의 세포성 면역을 억제하고 Cry 독소단백질의 살충력을 증가시켰다. 이 Xn 세균배양액을 혼합 Cry 독소단백질에 추가한 결과 적용해충범위와 살충력을 모두 증가시켰다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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