단세포단백질의 국내생산을 목적으로 전국 각지의 토양을 비롯한 기타 시료 357 종에서 900 여주의 탄화수소 자화균주를 분리하였고, 그중에서 비교적 수율이 좋은 효모 7주에 대한 균학적 성질을 조사한 결과 Candida tropicalis(5주), Candida lypolitica (1주), Torulopsis sp (1주)로 동정되었다. 선정된 효모균주의 mass doubling time은 $2.9{\sim}4.5$ hr., 수율은 $6.5{\sim}16.3g/l$, 경유 및 등유의 균체로의 전환율은 $7.8{\sim}19.3%$이고 ,건조효모의 조단백질함량은 $48.8{\sim}59.8%$이었다.
본 연구에서는 RSIV의 수온에 따른 병원성을 규명하기 위한 연구의 일환으로 수온별로 RSIV를 인위적으로 감염시킨 돌돔의 누적폐사를 관찰하고, 다른 온도에서 사육된 돌돔의 온도 스트레스 단백질인 HSP이 관여하는지를 확인하고자, 돌돔의 HSP 유전자의 염기서열 일부를 밝혔다. 각온도별 감염실험에서 17°C와 20°C의 경우 폐사가 발생하지 않았으나, 25°C 및 27°C 수조에서는 각각 90%와 80%의 누적 폐사율을 보였다. 돌돔에서 확인된 HSP 유전자의 일부는 넙치에서 확인된 HSP70와 97%의 homology를 나타내 돌돔의 HSP70으로 판단되었다.
이질아메바 병원성 분리주에서 특이적으로 발현되는 mRNA를 동정하고자 differential display reverse transcription-polymerase chain reaction(DDRT-PCR)을 수행하여 병원성 특이 증폭산물을 확인하였다. 한국인에서 검출한 이질아메바 병원성 분리주 YS-27과 Entamoeba dispar분리주인 S 16으로부터 정제한 mRAN를 주형으로 11개의 arbitrary primer와 3개의 one base anchored $oligo-dT_{11}M$(M: A, C 또는 G)의 조합을 이용, DDRT-PCR을 실시한 결과 31개의 분획이 YS-27주에서만 증폭된 것으로 확인되었다. 이 331개 DNA 중 21개는 cysteine proteinase 유전자와 상동성을 나타내었다. YS-27주로부터 제작된 cDNA library를 나머지 DNA를 탐침으로 사용, 검색하여 최종 4개의 clone을 얻었다. 이 4개의 clone을 이용, immunoscreening을 수행한 결과, 이 clone들은 이질아메바 감염자 혈청과 양성반응을 나타내고 있었다.
충남 대둔산의 토양으로부터 분리한 점액세균을 ARJ라 명명하고 그 특성을 알아보았다. CT 배지에서 swarming을 하며 성장한 이 균주는 slime을 형성하였고, 액체 및 고체배지 상에서 황록색의 색소를 방출하였으며 swarming 부분을 파장이 366 nm인 자외선으로 조사하였을 때 초록색의 형광을 띄었다. 또한 이 균주는 영양분이 고갈되었을 때 fruiting body를 형성하는 것으로 보아 Myxobacteria라고 생각되었으며 주사전자 현미경 관찰 결과 이 균주가 형성한 fruiting body는 stalk이 없었고 naked myxospore를 가지고 있었다. Myxobacteria의 분류에 있어서 가장 중요한 이러한 형태학적 특성들로 볼때 이 균주는 Myxococcus virescens와 가장 유사한 것으로 밝혀졌다. 한편 이 균주는 특히 gram 양성 세균에 대해 antimicrobial activity가 있는 것으로 나타났는데, 여과한 배양 여액에서도 이렇ㄴ activity가 있었지만 비변성 polyacrylamide 전기영동을 하여 본 결과 이 물질이 단백질은 아닌 것으로 밝혀졌다. 또한 이 배양 여액은 상당한 proteolytic activity가 있었으며 최소한 2개의 proteolytic enzyme이 있는 것으로 비변성 polyacrylamide 전기영동을 통하여 밝혀졌다.
본 연구는 곤충으로부터 새로운 항 진균 단백질을 발굴하기 하기 위한 목적으로 누에를 대상으로 Aspergillus niger의 감염을 유도하였을 때 발현되는 유전자의 특성을 분석한 것이다. Annealing control primer 법에 기초한 GeneFishing Kit를 사용하여 A. niger를 약 $6{\times}10^8$ colony per unit로 5령기 누에 유충의 체강에 감염시킨 후, 6시간 경과한 다음에 유도 발현되는 유전자(differentially expressed genes, DEGs)를 분석 한 결과, 10개의 유도 발현되는 유전자를 분리하였고 RT-PCR을 통해서 lysozyme, enbocin 그리고 한 개의 기능이 알려지지 않는 유전자등 3개의 유전자가 A. niger의 감염에 의해서 유의하게 과 발현된다는 것을 검증하였다. 일반적으로 그람 음성 및 양성 세균의 감염에 의해 유도된다고 알려진 enbocin 유전자가 A. niger의 감염에서도 과 발현이 유도되는 본 연구의 결과는 앞으로 enbocin 유전자의 항 진균 활성 연구에 중요한 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다.
키조개 부산물로 부터 향미제로 응용하기 위하여 제조한 가수분해물의 유리아미노산 및 휘발성 향기성분을 분석한 결과, 유리아미노산의 경우 가수분해물이 생시료에 비해 3배 이상 증가하였으며 taurine의 함량이 가장 많았다. 그리고 생시료와 가수분해물의 휘발성 향기성분을 분석한 결과 총 109종의 화합물이 동정되었는데 이중에서 생시료는 88종, 가수분해물은 65종이 검출되었다. 그리고 이들은 주로 알데히드류(16종), 케톤류(17종), 알콜류(31종), 함질소화합물류(16종), 방향족화합물류(8종), 에스테르류(3종) 및 기타 화합물류(17종)으로 구성되어 있었다. 특히 생시료에서의 산화취 성분인 알데히드류 및 방향족화합물은 가수분해물에서 상당량 감소되었으며 반면에 고소한 향기성분인 heterocyclic 화합물이 상당량 검출되었다.
Aldosterone, mineralocorticoid hormone, has important functions related to the regulation of blood pressure and balance of fluids and electrolytes in the distal region of the nephron. By genomic and non-genomic action of aldosterone, the physiological kidney functions are modulated. However, many of them except several kind of sodium channel have not been identified and analyzed yet. In this study, proteomic technologies with two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) gel using aldosterone rat model were applied to analyze and identify the aldosterone dependently expressed proteins in rat kidney cortex. As a result, the established aldosterone rat model exhibited the normal physiological responses to aldosterone and modulated proteins were identified, which included 15 increased and 3 decreased proteins on 2-DE analysis. Among them, 11 proteins were identified as changed proteins by LC-MS/MS analysis. These proteins identified as aldosterone induced proteins were involved in several cellular pathways such as cytoskeleton remodeling, energy metabolism, amino acid metabolism, and chaperone process. In conclusion, our data could provide the insights into the new mechanism underlying regulation of kidney functions by aldosterone.
전통 발효식품인 된장으로부터 mannanase의 생산균으로 분리된 WL-8 균주는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA의 염기서열에 근거하여 Bacillus subtilis로 동정되었다. B. subtilis WL-8은 locust bean gum 보다는 밀기울이 첨가된 LB 배지에서 mannanase 생산성이 높았으며, 24시간 배양하였을 때 약 20 U/ml에 이르렀다. 분리균 WL-8의 mannanase 유전자를 클로닝하여 그 염기서열을 결정한 결과 mannanase 유전자는 362 아미노산으로 구성된 단백질을 코드하며 1,086 뉴클레오티드로 이루어졌다. 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 WL-8의 mannanase는 GH family 26에 속하며 B. subtilis의 mannanases와 매우 상동성이 높았다. B. subtilis WL-8의 mannanase 유전자를 함유한 재조합 대장균의 배양상등액과 균체파쇄상등액을 사용하여 반응특성을 조사한 결과 pH 5.5와 $60^{\circ}C$에서 최대 반응활성을 보였으며, $60^{\circ}C$보다 높은 온도에서 배양상등액보다는 균체파쇄상등액에 존재하는 mannanase가 더 높은 활성을 보였다.
섬유소로부터 섬유소이용성 단세포단백질을 생산(生産)하기 위하여 전국에서 수집한 95점의 시료(試料)로부터 163주(株)의 섬유소자화세균(資化細菌)을 분리하고 이들 중 섬유소자화력(資化力)이 강한 1주(株)를 선정(選定)하고 Sporocytophaga congregata A-7으로 동정(同定)하였다. 최적 균생산(菌生産) 및 효소생산의 조건은 온도 $30^{\circ}C$, 초기 pH 6.0이었으며 효소반응의 최적조건은 온도 $50^{\circ}C$, pH 7.0이었고 효소의 열안정성은 $55^{\circ}C$이었다. 선발된 섬유소자화세균(資化細菌)과의 결합배양(結合培養)에 적합한 효모로는 Candida guilliermondii var. guilliermondii가 선정(選定)되었으며 혼합배양시(混合培養時) specific growth rate는 효모의 경우 $0.08hr^{-1}$이고 세균(細菌)의 경우는 $0.063hr^{-1}$로서 세균(細菌) 단독배양시의 $0.034hr^{-1}$에 비해 2배로 증가하였으며 48시간 배양후의 균체조건량은 약 $4{\sim}5g/l$ 정도이었다.
비교적 효율적으로 이용되고 있지 않는 섬유성물질의 이용성을 높이고 섬유소 자화세균에 의한 섬유소 단세포단백을 생산할 목적으로 전보에서 분리, 동정한 Collulomonas flavigena GFB 24-1의 몇 가지 균학적 성질을 통한 이용성을 검토한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 섬유질 자화세균 생육배지에서 배양한 결과 pH 7.0에서 50시간 배양하였을 때 균체증식이 가장 좋았고, 배양시 유리되는 단백질은 배양중 시간이 경과됨에 따라 증가하였다. 2. Cellulolytic activity는 pH 5~7에서 40~50시간, 배양하였을 때 가장 좋았다. 4. 생육배지에서 배양시 기질의 농도의 증가에 따라 6%까지는 균체증식이 직선적으로 증가하였으며 8%까지는 완만하게 증가하다가 9~10%농도에서는 감소하였다. 5. NaOH 처리한 볏짚은 기질로 하여 진탕 flask에서 배양한 결과 48기산 배양하였을 때 균체증식이 10.6mg/ml로써 가장좋았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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