The three yolk polypeptides have been isolated and partially characterized. Their molecular weights of YPI, YP2, and YP3 were 48, 000, 47, 000, and 46, 000, respectivelv, as judged by SDS-polyacrvlamide gel electrophoresis. They have different digestion products upon in situ peptide mapping by limited proteolysis. Two-dimensional gel electrophoresis showed that their isoelectric points were heterogeneous from 5.92 to 6.54. And thew showed three different antigen-antibody reactions when each polvpeptides is reacted with antisera made to a mixture of all of three. These data reported here indicate that the yolk proteins are consisted of distinctive polypeptides in Drosophlla sp. (robusta species group).
20-hydroxvecdysone (20-HE) seems to be related in the regulation of vitellogenesis in Drosophifa sp. (robwta species sroup). Although yolk proteins (YPs) synthesis does not occur at a high rate in fat body cells of one daw-old female after eclosion, application of 20-HE to isolated abdomens deprived of anterior endocrine glands stimulated the synthesis and secretion of YPs into the hemolvmph. An injection of 0.3 $\mul$ of a 10-s M 20-HE was sufficient topromote synthesis and secretion of YPs in isolated abdomens. The response of isolated automens to hormones was first detected between 2 hr and 3 hr after treaDent of 10-s M 20-HE. Transcript analysis showed that the effect of 20-HE on yolk protein synthesis was mediated at the level of transcription.
난황에 포함된 IgY는 포유동물에 있는 바이러스나 항원에 반응하는 항체와 같은 역할을 한다. IgY 분리를 위해 난황을 전처리한 후 3-zone SMB를 이용하여 지질단백질들로 부터 분리하는 전산모사연구를 수행하였다. 회분식 크로마토그래피와 pulse input method(PIM) 실험을 이용하여 전산모사 매개변수와 흡착 등온식을 얻었다. Aspen simulator를 이용하여 전산모사를 수행하여 IgY를 분리할 수 있는 SMB 운전조건을 다음과 같이 제시할 수 있었다. 삼각형 이론의 $m_2$와 $m_3$ 값은 각각 0.18, 1.0이고 스위칭 타임은 419 초이었다. 전산모사 결과 raffinate의 IgY 순도가 98.39%이고 두번째 싸이클에서 순도가 정상상태에 도달하였다.
Edwardsiella tarda로 면역한 닭의 난황항체 (IgY) 정제 방법을 비교하였다. Anti-E. tarda IgY의 정제는 PEG법, chloroform-PEG법, ammonium sulfate법과 정제 kit를 사용한 4가지 다른 방법으로 실시하였다. 정제된 IgY는 64 kDa의 heavy chain과 27 kDa의 light chain을 나타내었다. E. tarda로 면역된 IgY는 면역되지 않은 대조 IgY 보다 높은 ELISA가와 응집항체가를 나타내었으며, 정제된 IgY는 western blotting에서 anti-E. tarda 토끼혈청과 유사한 E.tarda 단백질을 인식하였다. PEG법과 ammonium sulfate법에 의해 정제된 IgY는 응집항체가가 1:512, chloroform-PEG법과 정제 kit에 의해 정제된 IgY는 1:128을 나타내었으며, PEG법이 IgY를 정제하기 위한 가장 빠른 방법이었다. 이 연구의 결과로 PEG법이 IgY의 생물학적 활성을 유지함과 더불어 신속하고 효과적인 정제방법임을 알 수 있었다.
본 연구에서는 생물학적 탄산가스 고정화에 사용되는 Euglena를 사료자원으로 이용하고, Euglena의 DHA를 강화시켜 산란계의 사료에 첨가하여 그 이용성과 난황내 지방산 조성에 미치는 영향에 대해 알아보고자 실시하였다. 시험 1에서는 32주령의 산란계(ISA-Brown) 280수를 7처리로 나누어 처리당 4반복으로 반복당 10수씩 배치하였다. 처리구는 에너지함량과 조단백질함량이 2,750 kcal/kg과$17\%$인 대조구 사료에 EG(Euglena gracilis Z.)를 0.25, 0.50, $1.0\%$ 첨가한구와 EGBD(Euglena gracilis B bleached and DHA enriched)를 0.5, 1.0, $2.0\%$ 첨가한 구의 7처리구로 하였다. 시험 2에서는 84주령의 산란계 300수를 5처리로 나누어 처리당 5반복으로 반복당 12수씩 배치하였다. 처리구는 대조구사료에 EGBD를 $0.5\%$ 첨가한 구와 EGD(Euglena gracilis Z. DHA enriched)를 0.5, 1.0, $2.0\%$ 첨가한 구의 5처리구로 하였다. 두시험 모두 사양시험은 4주간 실시하였고, 시험기간동안 물과 사료는 자유로이 섭취케 하고 정상적인 점등관리를 실시하였다. 시험 1의 결과를 보면,c일계산란율과 산란지수 모두 유의한 차이를 보이지 않았고, 난중은 시험사료 급여결과 $1.0\%$의 EG 첨가구가 가장 무거웠으며, 대조구가 가장 가벼웠다. 난황색은 모든 처리구가 대조구보다 유의하게 높았으며, EG를 첨가한 구들의 난황색이 높은 경향을 나타냈다. 지방산 조성을 보면 $2.0\%$ EGBD 첨가구의 DHA와 EPA의 수준이 유의적으로 가장 높았으며, arachidonic acid의 수준은 가장 낮았다. 시험 2에서도 일계 산란율과 산란지수 모두 유의한 차이를 보이지 않았고, 난중은 $0.5\%$의 EGD를 첨가한 구가 유의적으로 가장 높았으며, 대조구를 포함한 다른 처리구들에 비해 EGD를 첨가한 구들이 높은 경향이 있었다. 지방산 조성의 결과를 보면 $2.0\%$ EGD 첨가구의 myristic acid, myristoleic acid와 pentadecanoic acid가 모두 유의적으로 가장 높았다. DHA는 $0.5\%$%의 EGBD 첨가구가 유의적으로 가장 높았으며, EGD를 첨가한 구들이 대조구에 비해 유의하게 높았다. 결론적으로, Euglena의 첨가는 산란계의 생산성에는 크게 영향을 미치지 못했지만, EG의 첨가가 난황색의 개선에 효과가 있었고, EG, EGD 그리고 ECBD 모두가 난중을 높여주는 경향이 있었다. 또한, Euglena의 DHA를 강화시킨, EGD나 특히 EGBD의 첨가는 난황내의 DHA를 비롯한 $\omega%-3 계열의 지방산의 수준을 높이는데 효과적이라고 사료되어진다.
본 연구는 클로렐라 건조분말을 산란계의 사료에 첨가해서 계란의 품질과 난황의 지방산 조성에 미치는 영향에 대해서 분석하였다. 시험에 사용한 유기 산란계 사료의 수분함량은 약 12.8%, 회분함량은 10.8%, 조단백질함량은 18.0%, 조지방 함량은 2.5%이었다. 사료에 첨가한 클로렐라분말의 수분함량은 약 1.54%, 회분함량은 6.53%, 조단백질은 54.56%, 조지방 함량은 2.45%이었다. 계란 난각의 색깔은 클로렐라를 급여한 후, 시간의 경과에 따라 대조구에 비해 유의적으로 진해졌다. 파각강도는 클로렐라를 급여한 후, 10일까지 증가하였으며 대조구에 비해 유의적으로 강하였다. 계란 난각의 두께도 클로렐라를 급여한 것이 대조구에 비해 유의적으로 두꺼웠다. 클로렐라 급여한 계란 난백의 높이는 대조구에 비해 높았다. 계란 난백의 품질 기준이 되는 호유닛은 클로렐라를 급여한지 10일 후, 92.0 HU로 대조구(84.8 HU)에 비해 유의적으로 높았다. 클로렐라를 급여한 계란 난황의 황색도도 대조구에 비해 유의적으로 진한 황색을 나타내었다. 클로렐라를 급여한 계란의 무게는 급여 15일 후, 대조구에 비해 7.5% 증가하였으며, 단백질함량은 급여 10일과 15일 후, 대조구에 비해 각각 11.9%, 10.7% 증가하였다. 클로렐라 급여에 따른 계란 노른자의 지방산 함량의 변화를 조사한 바, 난황의 주요 지방산 조성은 oleic acid, trans-linoleic acid, palmitic acid, ${\alpha}$-linolenic acid, stearic acid, DHA, EPA, palmitoleic acid, heptadecanoic acid 순으로 나타났다. Palmitoleic acid는 클로렐라를 급여한 처리구가 대조구에 비해 감소하였다. 포화지방산은 클로렐라를 급여한 계란보다 대조구에서 높게 나타났고, 불포화지방산은 대조구보다 클로렐라를 급여한 계란에서 유의적으로 높게 나타났다. 불포화지방산과 포화지방산의 비율은 대조구보다 클로렐라를 급여한 계란이 높았다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 클로렐라 생균분말을 산란계의 사료에 첨가해서 급여할 경우 계란의 품질 향상과 난황의 불포화지방산 함량을 높이는데 긍정적인 영향을 미치는 것으로 판단된다.
가잠의 난황주요단백질인 vitellogenin에 관한 연구의 일환으로 상엽육잠과 인공사육잠의 발육시기에 따른 저장단백질 SP1, SP2 및 vitellogenin의 변동상, JHA가 이들 단백질에 미치는 영향과 vitellogenin의 최종산물이 vitellin의 subunit의 분자량 추정을 행한 바, 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 저장단백질 SP1은 자특이성이 있으며, 그 특성의 출현시기는 상엽육잠은 5령 5일, 인공사료육잠은 5령 4일이었으며, 토사 2일까지 그 특성이 유지되었다. 2. 저장단백질 SP2는 성특이성이 전혀 없는 단백질이었고, 체액 중의 소멸시기는 상엽육잠이 화용 1일, 인공사료육잠이 화용 2일이었다. 3. 화용 1일째부터 자특이성이 있는 vitellogenin이 상엽육잠 및 인공사육잠에서 다같이 출현하였으며, 발육이 진전됨에 따라 그 합성량이 점증하였다. 4. 난 vitellogenin의 subunit(vitellin-heavy chain ; VTL-H, vitellin-light chani ; VTL-L)의 분자량은 상엽육잠 및 인공사료육잠 다같이 차이가 없었으며, vitellin의 H$(VTL-H)가 186,000, vitellin의 L$(VTL-L)가 41,000이었다. 5. 상엽육잠 및 인공사료육잠에서 JHA는 5령 누에의 체액중의 SP1, 단백질량을 크게 증가시켰으며, 특히 5$\mu\textrm{g}$처리구가 가장 많이 증가되었다.
Tryptophan 또는 serotonin을 계란에 투여하고 배양하였을 때의 초기 계배의 뇌형성에 미치는 영향을 관찰한 결과, 뇌의 신경세포는 핵막의 불규칙하고 핵응축현상이 심하며 염색질이 핵막에 응집되고 인도 분해되었으며 핵막이 팽출되어 생긴 수포가 형성되었다. 그리고 조면소포체와 골지체는 심하게 확장되어 있었고, 미토콘드리아는 팽윤화된 것이 많았으며 신경세관의 발달이 매우 미비하였다. 즉 이와 같은 현상은 특히 초기 1-2일간 배양 계배에서 극심하였다. Tryptophan 또는 serotonin을 투여한 후 18시간 배양한 배반엽의 간충 세포는 대조군에 비하여 세포질이 미숙하였고, 세포내 소기관이 크게 손상되어 있었으며 난황과립의 분해가 대조군에 비하여 지연되고 있음을 알 수 있었으며, 24-72시간 배양한 배반엽의 암대의 미세융모는 대조군에 비하여 현저하게 길이가 짧고 발달이 미비하였다. 또한 Tryptophan 또는 serotonin을 투여한 계배의 경우 배반엽의 크기, 투명대 및 배의 크기가 대조군에 비하여 작았으며, serotonin 처리군의 경우가 더욱 작았다. 또한 단백질 및 핵산 함량이 대조군에 비하여 훨씬 낮았고 tubulin 합성량도 크게 저하되었음이 확인되었다. 위와 같은 실험결과는 과량의 tryptophan 또는 serotonin이 난황과립 분해를 지연시켜 결과적으로 단백질 합성을 억제함으로서 tubulin합성이 저하되고, 이로 인하여 미세소관의 형성과 미세융모의 발달과 기능이 부진하여 형태형성에 이상을 초래하는 것으로 사료된다.
본 연구에서는 산란계의 in vivo실험을 통하여 난황 레시틴추출 부산물이 산란계의 뼈의 Ca 침착과 성장에 도움을 줄 수 있다는 결과를 얻었다. 산란계 전기 사료에 Ca의 수준을 0%, 0.2%, 0.4%, 0.6%로 조절하여 실험한 결과 증체량에서 0%, 0.2% Ca을 첨가한 그룹의 증체량은 유의적으로 감소하였으나 0.4%, 0.6% 첨가 그룹에서는 정상적인 성장율을 확인하였다. 반면에 0.4% Ca을 첨가한 그룹에 레시틴 추출 부산물을 0.2%, 0.4% 첨가한 그룹에서 각각 1.5%, 7.1%로 증가하여 농도의존적으로 증가하는 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다. 실제 산란계의 경골을 적출하여 중량, 회분, Ca의 함량을 조사한 결과 경골 중량에서는 0.4% Ca 첨가그룹에 비해 레시틴 추출 부산물을 추가로 첨가한 그룹에서 각각 8.4%, 13.4%로 증가하는 경향을 확인하였다. 회분량에서도 0.4% 첨가 그룹에 비해 레시틴 추출 부산물 첨가그룹에서 증가하였지만, 유의한 차이는 없었다. 경골내의 Ca 함량을 조사한 결과는 0.4% Ca 첨가그룹에 비해 레시틴 추출 부산물이 4.3%, 5.9%가 각각 유의한 경향으로 증가하였다. 경골에 실제로 Ca이 흡수되었는가를 확인하기 위하여 lateral femoral joint 부분을 von Kossa's stain을 실행한 결과 Ca 결핍 그룹에서 Ca 축적이 현저히 감소한 것을 확인한 반면, 그 외 그룹에서는 Ca이 충분히 침착되어 있었으며 산란계 사료내의 적정 Ca 함량이 0.4%라는 것을 다시 한번 확인하였다. 본 연구에서는 계란 난황의 레시틴 추출 부산물의 단백질 분획 소재를 이용하여 뼈 성장 촉진 인자 및 Ca 흡수촉진 보조제로서의 가능성을 보여줬으며, 그 기대를 높이기 위해 혈액분석, 측정항목의 세분화 등 반복적인 연구가 수반되어야 하겠다.
棲管 갯지렁이 Schizobranchia insignis Bush의 卵子에서 일어나는 變化의 形態學的 및 生化學的 관계를 규명코자 卵子形成中 細胞學的인 變化와 卵子의 年中 分布에 대하여 연구하였다. 卵原細胞分裂 직후 난자는 卵巢에서 離脫하여 體腔囊에서 最大의 크기인 직경 6180$\\mu$ 까지 성장한다. 난자형성은 年中 계속 일어나고 있으며, 産卵期間은 1월에서 3월간이다. 난자가 最大의 크기에 달하면 그 후로는 크기에 변화가 없으며 體腔囊에 축적된다. 核仁은 직경 5-10$\\mu$의 난자에서 처음으로 나타나며 난자형성 초기단계에서 크기의 증가를 보여 직경 100-120$\\mu$의 난자에서 가장 크고, 직경 120-180$\\mu$의 기간동안 크기의 변화가 거의 없다. 仁은 최초에는 단일구획 이지만 난황물질형성 직전에 이중구획으로 나뉘어진다. 세 종류의 난황물질이 난자형성 기간중 서로 다른 시기에 형성된다. 脂質顆粒과 성분이 불확실한 타원형의 顆粒은 초기에 나타나지만, 대부분이 직경 80$\\mu$이상의 난자에서 형성된다. 단백질 난황과 皮質顆粒은 반드시 직경 80$\\mu$이상의 난자에서만 형성된다. 미세융털이 직경 80$\\mu$의 난자에서는 卵黃膜에 다량 존재하지만 직경 180$\\mu$의 난자에서는 거의 찾아 볼 수 없다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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