Motierella alpina DSA-12 의 회 분식 발효에서 $MnSO_4$ 첨가로 작은 pellet을 형성하게 하여 유가식 배양으로의 적용 가능성을 보았으나, $KH_2PO_4_4$의 경우에는 균체증식에는 효과가 있었지만, 균체가 풀어져 자라 점도가 증가하여 ARA 의 합성이 억제되었다. 유가식 배양에 14 % 암모니아 용액을 사용할 때 균체증식과 총지질의 함량에 영향이 있음을 확인했으며, 62.1 g/L의 균체량에 60% 이상의 지질 함량으로 12.0 g/L 의 아라키돈산을 생산할 수 있었다.
값싼 전분질 원료로부터 직접 균체생산을 목적으로 화성군 반월면 근교의 퇴비 및 토양 등 전분질 시료에서 전분을 직접 자화하여 균체를 상당량 생산하는 전분 이용성 효모 1주를 분리하고 동정하였다. 이 효모의 형태적 배양적 및 생리적 특성을 구명한 결과 Sporobolomyces holsaticus로 동정되었다. 이 효모는 가용성 전분이나 이눌린 같은 다당류에서 이당류나 단당류에서보다 최대 균체량 및 비성장속도가 컸으며 균체성분은 조단백 45.2%, 조지방 15.9%, 회분 9.2%이었다.
당밀로부터 ethanol을 생산하기 위한 균체순환식 연속발효를 실시하였다. 균주는 Saccharomyces uvarum ATCC 26602를 사용 하였으며 발효온도는 35$^{\circ}C$였다. 발효중 ethanol에 의한 저해를 줄이기 위하여 이단계발효를 시행하였는데, 첫번째 단계에서 공기는 0.12vvm으로 공급하였고 두번째 단계에서는 혐기적상태로 발효를 진행하였다. 당농도를 14%로 희석했을 때 다른 무기물을 추가하지 않아도 ethanol 발효가 진행되었으며 단지 균체증식이 목적일 때는 phosphorus 첨가가 필요하였다. 균체순환식 연속발효로 14%의 당을 함유한 당밀희석액을 발효시키는데 14.5 시간이 소요되었다. 이때의 최종 ethanol 농도는 8.4~9.0%(v/v)로서 ethanol 생산비율은 이론식의 88.1~94.4% 이었다.
Chemically defined medium을 사용하여 Bacillus sp. $T_2-3$으로 균체외단백질을 생산한 후 이들의 각종 물리화학적 성질을 조사 하였다. 균체외단백질은 전기영동과 gel 여과 결과로 분자량이 약 49,000이 되는 비슷한 2종의 단백질로 구성되어 있었다. 최대흡수파장은 230nm 부근이었으며 aspartic acid를 가장 많이 함유하고 있었다. 또한 균체외단백질의 물에대한 용해도는 55.8%, 0.4% NaOH에 대한 용해도는 28.4%로 albumin과 glutelin계통의 단백질로 생각되었다.
전분이용성 세포융합 효모를 이용하여 단세포단백질 생산을 위한 기초실험을 행하였다. 전분배지에서 균체생성이 우수한 fusant12 균주의 배양조건은 최적질소원 (NH$_4$)$_2$SO$_4$ 0.1%, 최적 soluble starch 농도 7%, 최적 초기pH5.6이었다. Fusant12균체의 자기소화에 의한 가용성 단백질의 추출은 효모현탁액에 ethyl acetate를 5%(v/ v)되게 첨가하여 30min간 액화전처리과정을 행하므로 효과적으로 얻을 수 있었다. 전분이용성 효모인 fusant 12균주와 비전분이용성 효모인 Torulopsis candida의 혼합배양으로 균체생성량을 증가시킬 수 있었으며, 혼합배양시 종균접종혼합비는 6대4일 때 효과적이었다. Fusant 12균주 단독 및 Torulopsis candida와의 혼합배양시 tapioca 배지에서의 균체생성량은 soluble starch 배지에서 보다 약 2.5배 증가하였다. 건조균체의 조단백질함량은 39%, 핵산함량은 5.8%이고 균체단백질은 FAO 표준단백질과 비교하여 필수아미노산중 methionine 함량이 낮으며, Iysine 함량은 높았다.
Neurospora crassa는 성장이 끝나고 분화되는 과정에서 tyrosinase를 생산하며 아미노산류의 기질유사체, 반대사물질, 단백질 생합성 저해제 등에 의해 효소생산이 유도된다. 미생물 균체를 배양시키며 여러가지 유도물질을 사용하여 효소의 생합성을 유도시킨 결과 가장 적합한 유도물질은 cycloheximide였다. 이는 균체의 성장을 크게 저해하는 항생제의 일종이므로 효소 생합성을 최대화시키기 위한 최적의 농도가 존재하였으며, 유도물질의 농도가 일정한 경우에 효소 생산에 최적인 유도시간이 존재하였다.
여과막 생물반응기를 이용하여 $60^{\circ}C$에서 혐기 세균 복합체가 포도당으로부터 수소를 생산할 수 있는 최적조건을 연구하였다. 여과막 생물반응기는 연속교반 탱크반응기와 외부에 장착된 PVDF (polyvinylidene fluoride) 중공사막 여과장치로 구성되었다. 접종슬러지는 하수처리장 소화 슬러지조에서 얻었고, 포자형성 수소생산 미생물을 얻기 위해 $90^{\circ}C$에서 20분 간 열처리하였다. 16S rRNA PCR-DGGE(polymer chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis) 분석을 통해 열처리 전후의 미생물상 변화를 조사하였다. 열처리 후 DGGE 밴드의 수는 감소하였고, 주요 밴드는 Clostridium perfringens와 유사한 염기서열을 나타내었다. 운전 기간 동안 바이오가스 내 수소함량은 60%(v/v)를 유지하였고, 메탄은 검출되지 않았다. 연속교반 탱크반응기를 여과막 없이 수력학적 체류 4시간에서 운전하였을 때 공급된 포도당의 95.0%가 제거되었고, 이때 균체농도 및 수소생산속도는 각각 1.35 g cell/L 및 7.4 L $H_2$/L/day이었다. 동일한 체류시간에서 PVDF중공사막 여과장치를 장착하여 연속교반 탱크반응기를 운전하였을 때, 균체농도는 1.62 g cel/L로 증가하였고 높은 포도당 제거율(99.5%) 및 수소생산속도(8.8 L $H_2$/L/day)가 관찰되었다. 40 nm 및 100 nm의 공극크기를 가진 여과막은 균체농도 및 수소생산 측면에서 유사한 성능을 나타내었다. 여과막 생물반응기는 여과막의 반복적인 세척을 통해 30일 이상 안정적으로 운전될 수 있었다.
5'-GMP(5'-Guanylic acid) 생산 융합균조 fusant RC102를 고정화하여 5'-GMP을 연속적으로 생산하고자 하였다. 균체 고정화용 담체로서 k-carrageenan, polyacrylamide, Ca-alginate 및 agar 등 4가지 담체에 고정화한 결과 최적 담체로서 3% k-carrageenan을 선정하였으며, 이담체에 고정화한 균체를 이용하여 5'-GMP 연속적으로 생산하였다. 고정화 균체에 의한 5'-GMP 생산의 최적 온도 및 pH은 $32^{\circ}C$, pH 8.0, 미량온소로서 $Mn^{2+}과\;Zn^{2+}$의 농도는 각각 $30\mu\textrm{g}/L,\;1{\times}10^{-6}%$이었다. $Mn^{2+}$이 풍부하고 값싼 CSL(Corn Steep Liquor)을 배지로서 사용하기 위해서 penicillin G와 D-cycloserine 및 POSEA(polyoxyethylene stearylamine) 농도 최적 농도는 각각 0.8unit/ml, 0.8unit/ml, 그리고 5mg/ml으로 나타났으며, 항생물질 보다 계면활성제가 효과적이었다. 이상의 최적 조건에서 고정화 fusant RC102는 15일간 안정되게 5'-GMP를 생산하였다.
홍색유황세균, Thiocapsa roseopersicina가 광합성 종속영양상태에서 수소를 생산하기 위한 여러 가지 인자 중에서 광원, 광세기, 배양온도의 영향을 실험하였다. 또한 균체의 성장곡선과 아울러 수소 생산과 소비에 영향을 주는 효소 역가의 변화를 측정하였다. 할로겐등과 형광등을 사용하여 균체성장과 수소생산을 관찰한 결과 배양 48시간 만에 균체성장은 할로겐등과 형광등을 $7.5{\sim}10$ klux로 조사할 때 각각 1.38 및 1.41 g-DCW/L로 가장 높은 균체 성장을 보였고, 수소생산성은 할로겐등과 형광등 10 klux일 때 각각 0.90 및 0.48 $ml-H_2/mg$-dcw를 보여 할로겐등 10 klux일 때 가장 높은 수소생산성을 보였다. 최적 수소생산 온도는 $26^{\circ}C$이었고, $30^{\circ}C$ 이상에서는 수소생산이 감소하였다. $30^{\circ}C$에서 할로겐 램프로 $8{\sim}9$ klux를 조사하면서 photoheterotrophic 조건으로 배양할 때 T. roseopersicina NCIB 8347 세대시간은 약 4.2시간이었다. 수소는 성장대수기 중간인 18시간부터 발생하여 succinate가 모두 소비되는 45시간까지 발생하였고, 그 이후는 더 이상 생산되지 않았다. 그러나 배양시간이 연장되면서 발생한 수소는 시간이 경과함에 따라 감소하였다. 또한 본 배양 조건에서 발생한 수소생산은 nitrogenase에 의한 것으로 사료되었다.
본 연구는 효모의 세포벽에 존재하는 본 연구는 효모의 세포벽에 존재하는 ${\beta}-Glucan$을 대량생산하기 위해 Saccharomyces cerevisiae JUL3의 균체량을 증가시키기 위한 연구를 수행하였다. S. cerevisiae JUL3의 배양학적 특성을 알아보기 위해 kinetic parameter를 조사하였을 때 specific growth rate (${\mu}$)는 $0.145\;h^{-1}$, yield ($Y_{x/s}$)는 0.332 g/g, glucose 소모속도($q_{s}$)는 $0.437\;h^{-1}$이며 productivity (P)는 $0.4827\;g/{\ell}{\cdot}h$을 나타내었다. 균체량이 가장 높게 나타난 탄소원과 질소원은 고과당 (high fructose syrup)과 yeast extract이었다. 효모균체 대량생산 및 scale up을 위하여 반응표면 분석법을 통하여 고과당과 yeast extract에 대한 최적농도를 조사하였다. 균체량이 가장 많이 생산되어질 수 있는 조건으로 제시된 고과당과 yeast extract의 최적 농도는 각각 8.0 %와 5.2 %였으며, 이 때 예측되는 균체량은 $16.95\;g/{\ell}$ 이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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