침강조의 중앙에 깔대기 모양의 판을 설치하고 방해판 아래 다시 공기 방울과 CO2 가스의 별도 배출구를 설치하여 상부로의 난류를 방지하므로 침강 효율이 그게 향상되도록 settler를 고안하였다. 이 settler를 설치한 탑형 발효조에서 응집성효모 S.uvarum의 에탄올 생산성을 검토한 결과 방해판을 설치하지 않은 단순한 원통형 settler에 비하여 1.5배 증대되었다. 또한 탑형 발효조에서 살펴본 균체 순환율이 에탄올 생산성에 미치는 영향을 살펴본 결과 균체 순환울 1-5 사이에서는 에탄올 생산성의 변화가 거의 없었으나 6 이상에서는 균체가 유출되므로 에탄올 생산성이 감소하였다.
Pseudomonas sp. CH-414를 이용하여 통기속도 빛 pH 변화에 대한 균체량 벚 인지질 생산 변화에 대한 실험을 수행하였다. pH를 7.0에서 8.0으로 변 화시켰을 때는 인지질의 생산량뿐만 아니라 균체량 이 동시에 급격하게 감소하였으나, pH를 7.0에서 6 6.0으로 낮추어 주였을 경우 pH 7.0과 비교하여 인 지질이 약 20% 정도 증가하였으며 균체량의 변화는 없었다. 통기속도가 증가할수록 균체량은 증가하였으나 인지질의 생산은 변화가 심하였으며 3vvm에서는 인지질 농도의 급격한 감소를 보였다. 이상의 결과를 토대로 배양 30시간까지는 pH 7.0, 3vvm으로 배양한 후 그 이후부터는 pH 6.0, 1 vvm 으로 변화를 주어 배양하였을 때 균체량은 약 18.5g d dry cell weight/$$\ell$ 이었고 인지 질의 양은 약 $0.83g/\ell$(45mg/g cell)이였다.
L-라이신 생산성의 향상을 목적으로 생체반응기를 이용한 연속발효시스템의 개발을 시도하였다. 먼저, Corynebacterium glutamicum ATCC 21514균체의 고정화조건에 대하여 검토하였는데 균체를 4% k-carrageenan에 포괄하였을 때 76.2%의 고정화율을 나타내었고, 겔강도는 4.0kg이었다. 이 고정화균체를 사용하여 생체반응기를 제작하여 L-라이신의 연속생산에 응용하였으며, 최적조건하에서 얻은 결과를 회분식의 결과와 비교하였다. 14일간의 연속발표에서 얻는 실험결과 공급당의 L-라이신으로의 전환율은 36.7%이었고, L-라이신의 생산성은 4.96mg/ml/mg-dry cell weight/hr로서 생균체나 고정화균체에 의한 회분식발효의 경우에 비하여 각각 2.5배와 4.1배 높았다.
알콜 발효 증진을 위해 5L 배양조에서 혐기적으로 회분 배양 시 건지황 착즙액을 농도별로 첨가하며 알콜 발효 및 균체 생육을 측정한 결과 균체 생육 및 알콜 생산 수율 모두 착즙액 첨가량이 증가함에 따라 일반 발효에 비해 증가했으며, 30% (v/v) 첨가 시 11.8 (g/L)의 최대 균체양, 0.092 (%/hr)의 최대 알콜 생산성과 같은 최대치를 나타냈다. 하지만 40% 이상 첨가 시는 균체 생육 및 알콜 생산 두 경우 다 감소하는 경향을 보였으며 50% 에서는 심각한 생육 저해 현상이 나타났다. 또한 알콜 생산성 증진을 위해 30% 착즙액을 첨가해 유가식 배양을 실시 한 결과 회분 배양보다 월등히 높은 균체 생육 및 알콜 생산성을 보였다. 이 같은 생산성은 일반 알콜 발효에서 얻을 수 있는 수율보다 약 30-40% 이상 높은 것으로 건지황 착즙액이 알콜 발효에 직접적인 영향을 주는 것이 입증되었다. 이는 알콜 발효 시 건지황의 유용 성분의 활용과 함께 알콜 생산 수율 증진에도 이용이 가능한 지황의 이중적 활용도가 있음을 입증한 것으로 평가된다.
지구상에서 생합성된 천연물은 완급의 차이는 있겠으나 궁극적으로는 CO$_{2}$ H$_{2}$O, NH$_{3}$ 등으로 다시 산화분해된다. 이 분해과정은 미생물의 효소반응으로 이루어지며 생물권의 항상성도 일차적으로는 미생물의 이 산화분해작용으로 유지된다고 볼 수 있다. 미생물이 영위하는 이러한 효소반응을 생리활성물질의 공업적합성에 이용한 초기의 예로는 부현피질호르몬의 합성과정에서 Rhizopus nigricans를 사용한 수산화반응과 ascorbic acid 합성과정에서 Acetobacter xylinum을 사용한 탈수반응이 유명하며 이러한 반응은 아직도 이용되고있다. 특히 지난 십수년간의 응용미생물학의 발전은 대단한 것이며 여러가지 항생물질, 당질, amino산, 핵산관련물질들이 생리활성물질과 함께 발효법으로 생산되고 있다. 그러나 이글에서 다루는 미생반응은 발효과정에서 생산되는 미생물자체의 일차적 대사산물 (primary metabolite)이나 이차적대사산물 (secondary metabolite)를 대상으로 한것이 아니며 어디까지나 외부에서 공급되는 화학물질에 대한 균체의 효소반응산물을 목적물로 하고있다. 또한 근래 활발히 이용되는 균체고정및 효소고정법을 이용한 효소공학적수법도 제외하고 배양과정의 균체 또는 배양후의 군체를 이용한 미생물반응에 한정코저 한다.
방선균에서 항생물질을 발효 생산하기 위해서는 이와 관련된 방선균의 생리학적 및 생화학적 특성을 고찰해 볼 필요가 있다. 우선, 항생물질은 방선균의 2차 대사산물로써 이의 생산은 미생물의 성장과는 거의 연계되어 있지 않다. 즉, 방선균의 발효 과정을 살펴보면, 일반적으로 균체가 성장하는 증식 단계(trophophase)와 항생물질이 생산되는 발효 단계(idiophase)로 구분할 수 있다(2). 다시 말해서, 항생물질과 같은 2차 대사산물은 균체의 성장이 어느 정도 완료되어진 이후에 생합성되어지기 시작하며, 이는 방선균의 생활 주기상의 분화과정과도 밀접한 관계를 갖고 있는 것으로 알려져 있다. 또 하나의 특징은 한 종류의 방선균으로부터 유사한 화학적 골격을 지닌 여러 종의 항생물질들이 동시에 생산되어지는 경우가 많으며, 외부 환경에 따라 그 생산량이 크게 영향을 받는다는 사실이다. 따라서 방선균에서 목적하는 항생물질만을 과량생산하기 위해서는 배지의 조성을 비롯하여 pH, 발효온도, 통기, 점도 등 여러가지 발효 조건들을 잘 조절해 주어야 한다. 이러한 관점에서 방선균을 이용한 항생물질 발효에 있어서 그 생산량을 증대시키기 위해 고려해 주어야 할 사항들을 고찰해 보기로 한다.
우리나라에서 풍부하게 생산될 수 있으면서 흔히 과잉생산되어 문제가 되는 배추를 이용한 단세포단백 생산에 관한 연구를 하였다. Saccharomyces cerevisiae와 Candida utilis 공히 배추즙액에 잘 번식하였으며 $30^{\circ}C$에서 20시간 이내에 번식이 완결되었다. 이들 효모의 최종 건조균체량은 동결시킨 후 해동된 배추를 이용하거나 동결 되지 않은 배추의 즙액을 이용하거나 차이가 없었는데 S. cerevisiae와 C. utilis는 각각 4.3g/l 및 5.1g/l의 건조균체를 생산하였다.
Cellulomonas sp. KL-6 균주의 균체내 외 단백질은 배양 5일째에 $266\;{\mu}g/m{\ell},\;37\;{\mu}g/m{\ell}$로 가장 많이 생산하였다. 본 실험에서 사용한 KL-6 균주는 볏짚을 분쇄 후 1.0% NaOH와 10% $NH_4OH$로 $80^{\circ}C$에서 30분간 처리한 후 $H_3PO_4$로 중화하여 탄소원으로 이용하였을 때 각각 $1.63\;g/{\ell}$ 및 $1.47\;g/{\ell}$의 SCP가 생산되어 처리하지 않은 볏짚의 $0.5\;g/{\ell}$ 보다 균체수율이 증가되었다. KL-6 균주가 생산한 SCP의 필수아미노산의 함량이 FAO 표준단백질에 비해 많아 영양적 가치가 매우 우수하였다. 그러나 실제 동물사육에 이 균체를 이용코저 할 때는 균체의 세포벽을 파쇄후 사용해야 되리라 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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