전통 대두발효식품으로부터 색소 생성능과 protease 활성이 가장 강한 균을 선별하여 Bacillus sp. CS-l7로 동정하였다. CS-17 균의 균체증식은 배양 24시간, protease 활성은 배양 48시간, 그리고 색소 생성은 배양 72시간 후 최대에 달하였다. Bacillus sp. CS-17은 대두분말을 1.0% 첨가한 색소 생성용 기본배지에서 가장 높은 색소 생성능을 가지는 것으로 나타났다. 배양조건이 Bacillus sp. CS-17의 색소 생성에 미치는 효과를 조사한 결과, pH 8.5에서 $37^{\circ}C$, 72시간 배양하였을 때 최적의 색소 생성을 보였다. NaCl의 첨가는 색소 생성능을 억제하는 것으로 나타났다. 이상의 결과로 Bacillus sp. CS-17의 색소 생성 최적조건은 $37^{\circ}C$, pH 8.5에서 72시간동안 배양하였을 때로 추정되었다. 그람 양성균 5주 및 그람 음성균 6주에 대하여 색소 농축액의 항균활성을 paper disc법으로 조사한 결과, B. subtilis, P. aeruginosa, S. typhimurium, E. aerogenes, B. cereus, A. hydrophila의 성장에 대한 항균효과가 인정되었으나 그 활성은 전반적으로 미약하였다.
Kluyveromyces fragilis No.351을 이용하여 이눌라아제 생산을 최대로 할수있는 배지 조성 및 배양 조건을 조사하였다. 탄소원 및 inducer로는 돼지감자 추출액을 이용하였으며 전체 중량 3.5%가 가장 적합하였다. 일반적으로 많이 이용되는 유기 질소원인 yeast extract보다 bactocasitone이 더 좋았고 2.0%에서 효소 생성이 최대로 되었다. 초기 pH 5.5 및 $30^{\circ}C$가 알맞은 배양조건이었으며, $NH_4H_2PO_4$ 0.5% 첨가로 효소 생성이 증가되었다. 이눌라아제의 생성은 통기를 높여감에 따라 더욱 많이 생성되었고 intracellular inulase의 생성은 균체증식에 비례하여 증가되었다. Ultrafiltration과 에탄올 침전법을 이용하여 효소를 회수한 결과 72%의 수율을 얻을 수 있었다.
Saccharomycopsis lipolytica의 isocitrate lyase에 대한 온도감수성 변이의 특성과 이 효소의 생화학적성질을 조사하기 위한 기초연구로서 isocitrate lyase 결손변이 균주인 MX9-11(Icl-)로부터 온도감수성을 나타내는 복귀 변이균주를 3균주 분리하고 그중 활성의 회복이 가장 높은 MX9-11RX8 균주의 성질을 조사하였다. MX9-11RX8 복귀 변이균주는 탄소원으로서 초산을 사용하였을 때 온도의 증가에 따라서 isocitrate lyase의 생성량과 비생성 속도가 감소하여 33$^{\circ}C$에서는 거의 효소를 합성하지 않았으며, 온도를 23$^{\circ}C$에서 33$^{\circ}C$로 올렸을 때 효소의 합성은 바로 정지하였지만 균체증식은 계속되었다. 한편 n-hexadecane을 탄소원으로 사용하였을 때에도 온도감수성을 나타내었으며, 온도의 shift up 후에도 isocitric acid 생산은 거의 변화가 없었다.
알콜증류 폐액에 빵효모를 배양하는 중에 포도당, 암모늄 및 인산을 자동 첨가하여 균체량을 효율적으로 증가시킴으로써 폐액의 재이용성을 향상시키고자 하였다. 포도당은 DO를 제어파라미터로 하는 제어방법을 사용하여 자동 첨가함으로서 그 농도를 300 mg/L 이하로 유지하였다. 암모늄은 pH-stat 방법을 사용하여 N $H_4$OH로서 자동 첨가함으로서 12.6~17.4mM의 낮은 농도범위로 유지하였다. 인산의 경우에는 분석방법으로써 ascorbic acid법을 채택한 자동화 FIA sysetm을 제작하여 사용하였다. 이 system으로 배양 19.4 시간 후부터 배양액을 자동분석하고 제어한 결과 배양액의 P $O_4$-P 농도를 23.3~43.4 mg/L 의 낮은 농도범위로 유지할 수 있었다. 세가지 영양성분을 자동첨가하면서 배양한 결과 증식의 정체없이 균체량을 33.0배 더 증가시킬 수 있었다. 비증식속도는 0.19 $hr^{-l}$였다.
김치의 가수분해효소로서 발효원으로 사용되고 균체증식에 필수적인 아미노산 생산에 관여하는 단백질분해호소를 생성하는 균주를 분리하여 동정하였다. 시판되는 풀무원 김치의 5종(전라도김치, 숙성김치, 열무김치, 포기김치, 맛김치)에서 단백질분해효소 활성을 지닌 균주 중 곰팡이와 효모를 제외하고 총 9주를 분리하여 whole cell protein pattern 및 API kit 으로 동정하여 각각의 균주들을 Lactobacillus sp. 1종, Leuconostoc sp. 1종, Bacillus sp. 6종, Brevibacillus sp. 1종으로 판정되었다. 분리된 9종과 단백질 분해효소 활성이 높은 표준균주인 Bacillus subtilis KCCM 12248와 Bacillus licheniformis KCCM 11851에 대해 단백질분해활성을 비교한 결과 김치에서 분리되는 K-2(Brevibacillus속)가 0.11 unit/mg으로 가장 높은 값을 보였다.
고함량 RMh 효모인 Saccharomyces cerevisiae MTY62를 당밀과 com steep liquor를 공급하는 유가배양에서, 세포농도는 45g-DCW/L 이하, RNA 함량은 140mg/g-cell 로 얻어졌다. 이는 균체증식과 RMh축적에 당밀 내에 존재하는 저해물질 때문으로 생각되어 이를 제거하기 위해 다양한 당밀 전처리제의 효과를 조사하였다. 당밀로부터 금속이온 제거 효과는 Na2HPO4와 EDTA를 혼합 처리했을 때 $Ca^{++}$ 는 90% 이상 $Cu^{++}$ 는 약 80% 제거하는 결과를 나타내었고, Na2HPO4와 EDTA, IonClear BigBead 등의 3가지를 혼합 처리했을 때는 $Ca^{++}$ , $Cu^{++}$ 둘 다 90% 이상 제거되는 결과를 나타내었다. Na2HPO4+EDTA처리 당밀의 경우세포내 invertase활성을 크게 증가시켰다. 전처리 당밀로 회분배양한 결과, 세포농도는 18.6g-DCW/L, RNA농도는 3127mg/l, 최대비증식속도($\mu_{max}$ )는 0.459 $h^{-1}$ , 환원당 비소모속도(g-sugar/g-cell$.$h)는 1.28로,대조구에 비해 각각 10%, 17%, 47%, 36%로 증가한 값을 보였다.
PCBs(polychlorinated biphenyl)는 난분해성 물질로써, 환경호르몬으로 분류된 유독한 화합물이다. 이런 유독한 화합물인 PCBs 화합물이 오염된 토양 및 수계를 회복하기 위해 PCBs의 모체인 biphenyl을 효과적으로 분해하는 미생물을 토양으로부터 분리 선별하여 S. yanoikuyae BK10 (AF406817)와 같이 분해능이 우수한 균주를 분리하였다. 분리된 S. yanoikuyae BK10의 특성을 조사하기 위하여 자연계의 토양 조건인 pH 5.0$\sim$8.0에서 99%이상의 높은 biphenyl 분해효율을 보였다. 또한, 온도를 달리하여 실험 한 결과, 10$\sim$50$^{\circ}C$의 범위에서 모두 70%이상의 높은 분해효율을 보여줌으로써 실제 biphenyl/PCBs로_오염된 토양에서 온도의 영향을 덜 받고 biphenyl을 효과적으로 분해 할 수 있을 것으로 생각된다. S. yanoikuyae BK10는 biphenyl이 500 $\mu$g/ml으로 처리된 mineral salt 배지에서 48시간동안 99% 이상의 biphenyl을 분해하는 높은 분해활성을 보이며, biphenyl을 mineralization 시키는 것으로 판단된다. 또한 biphenyl 분해효소 유도 실험결과는 기질을 biphenyl로 사용하여 증식한 균체가 다른 기질을 사용해서 증식한 균체보다 약 2배가량 biphenyl을 빨리 분해시켰다. 그렇지만, cell-mass를 많이 얻을 수 있는 당을 탄소원으로 사용하여 배양하였을 때에도 단시간 내에 biphenyl분해 효소를 분비하여 biphenyl을 분해하는 것으로 보아, S. yanoikuyae BK10는 실제 biphenyl/PCBs에 오염된 토양 적용 할 경우 안정적으로 균주의 제공이 가능하다고 판단된다. 이상의 결과를 토대로, 토양에서부터 분리한 S. yanoikuyae BK10는 자연계에서 유해화합물인 biphenyl/PCBs을 효과적으로 분해 할 수 있다고 생각되며, 분리균주인 S. yanoikuyae BK10의 분자 생물학적 특성을 조사하여 biphenyl과 PCBs를 분해하는 유전자 탐색에 유용한 정보를 얻을 수 있을 것으로 사료된다.
영지추출물이 효모의 증식과 생리에 미치는 영향을 검토하기 위하여 영지의 용매별 추출물을 0, 0.1, 0.5, 1.0%되게 첨가한 Henneberg 액체배지에 S. cerevisiae를 접종하고, 5일간 발효$(30^{\circ}C)$과정중 균체생산, Alcohol 발효, $CO_2$ 발생 등을 조사하였다. 1. 발효과정중 72시간후 효모 세포수는 증류수추출물(Dw) 1.0% 첨가구>에탄올추출물(Et) 1.0% 첨가구>증류수추출물(Dw) 0.5% 첨가구>에탄올추출물(Et) 0.5%첨가구>증류수추출물(Dw) 0.1% 첨가구>에탄올추출물(Et) 0.1% 첨가구>대조구의 순이고 특히 1.0%구는 대조구보다 5.3배 많았다. 2, 건조균체량은 각 시험구 모두 대조구보다 많았고, Dw 1.0%구와 Et 1.0%구는 120시간 발효 후 대조구에 비해 약 1.7배였다. 3. 알코올 발효과정중 알코올 함량은 영지추출물의 첨가량이 증가함에 따라 많아졌다. 4. 발효과정중 효모의 단위 시간당 $CO_2$ 발생 속도는 영지추출물을 증량할수록 대조구보다 빠르다.
갓 중의 향균성 물질을 검색할 목적으로 에탄올추출물이 미생물의 증식에 미치는 영향과 전자현미경에 의한 세균의 형태변화를 살펴보았다. 갓 에탄올추출물의 농도별 항균활성은 대부분의 그람 양성균에서는 10mg/ml로 강하게 나타났으며, 그람 음성규느이 경우는 20mg/ml에서 나타났다. 그리고 젖산균 및 효모에서는 40mg/ml로 세균에 비하여 항균력이 약하게 나타났따. 갓 에탄올추출물이 미생물의 대수증식기에 미치는 영향은 E. coli와 S. aureus 두 균주 모두 20mg/ml 이상의 첨가시는 4시간 이후부터 균의 생육이 완전히 억제되었다. 갓 에탄올추출물로 처리한 E. colid와 S. aureus 두 균주를 전자현미경으로 관찰한 결과, 그람 음성균인 E. coli의 경우는 균체표면이 불규칙적으로 수축된 형상을 보였고, 그람 양성균인 S. aureus의 경우는 균체가 팽윤되고 타원형으로 변형되어 두 균주 모두 심한 형태학적인 변화가 있음이 관찰되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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