본 연구에서는 Serratia marcescens ATCC 27117 균주로부터 키나아제 유전자를 대장균으로 클로닝 하고 발현시켰다. pUC 19 플라스미드를 이용하여 S.marcescens의 genomic library를 만들고 팽화된 키틴이 포함된 한천배지에서 키티나아제 활성을 가지는 클론을 선별하였다. 약 1x10 transformant들 중에서 키티나아제 활성을 보이는 하나의 클론을 선발하였으며 이것은 pUC 19 플라스미드속에 8.9Kb 염색체 DNA 삽입단편을 가지고 있었다.
세포외 phospholipase D (PLD)를 과량 생산하는 균주 JE-11을 토양으로부터 분리하였다. 16S rDNA에 의한 분석과 형태적, 생리적 특성을 조사한 결과 이 균은 Streptomyces somaliensis로 동정되었다. 선발한 S. somaliensis로 부터 PLD를 암호화하는 유전자(sspld) 분리하고 염기서열을 조사하였다. Open reading frame을 분석한 결과 33개의 아미노산으로 이루어진 분비 signal peptide와 505개의 아미노산으로 구성된 PLD단백질을 암호화하는 것으로 예상되었다. 또한, sspld의 염기 서열로부터 유추된 단백질 서열은 기존에 보고된 다른 Streptomyces PLD들과 70-88%의 서열 유사성을 보였다. 이 PLD는 96-98%(㏖/㏖)의 수율로서, Phosphatidylcholine을 glycerol과 serine을 기질로 하여 각각 phosphatidylglycerol 과phosphatidylserine으로 전환을 하였으나, 알코올 공여체인 inositol과 ethanolamine과는 반응하지 않았다.
This study was focused on the optimum culture condition in CMCase, FPase and xylanase activities of two fungal strains that secret extracellular enzymes for using enzymatic deinking agent to old newsprint. The results of this study were as follows. When Fusarium pallidoroseum was grown on the medium, containing of rice bran+xylan $2.0\%,\;peptone\;0.6\%,\;KH_2PO_4\;0.075\%\;and\;MnSO_4\;0.06\%\;with\;pH\;9.0,\;at\;29^{\circ}C$ for 6 days, the quantitative degree of extracellular enzyme production was the highest. Optimum culture condition for Aspergillus niger was pH 5.0, $27^{\circ}C$ incubating temperature and 7 days incubation period on liquid medium, containing of CMC+xylan $2.5\%,\;yeast\;extract\;0.4\%,\;K_3PO_4\;0.05\%\;and\;CaCl_2+FeSO_4\;0.08\%$. Aspergillus niger was fairly higher FPase and xylanase activities than Trichoderma reesei ATCC 28217.
홍삼제품 제조 과정중의 부산물인 홍삼박의 활용 가능성을 조사하기 위하여 여러 가지 담자균의 배양에 홍삼박 추출물을 첨가하여 배양한 후 균체 증식량, 단백질 및 amino acid함량 등을 조사하였으며 그 결과를 보고하는 바이다. 수집 된 담자균 중 G. lucidum과 P. ostreatus가 액체배양에서 균체증식이 양호한 균주로 선발되었으며, 홍삼박 추출물을 0.2% 첨가하였을 때 균체증식량이 가장 많았으며 단백질 함량은 0.5% 첨가하였을 때 l-3%가 증가하였다. Amino acid함량은 인삼박 추출물을 0.2% 첨가하였을 때는 거의 변화가 없었으나 0.5% 첨가하였을 때에는 G. lucidum, P. ostreatus 모두 상당히 증가하였으며 그 증가폭 중 cysteine이 가장 컸다.
This study was carried out to obtain basic data on mycelial growth characteristics for an artificial cultivation of Volvariella volvacea. Twelve URP primers were used to assess genetic relationship of V. volvacea and its result was divided into two groups. But there was nothing different in morphological characteristics in V. volvacea. Among five kinds of mushroom media, MCM medium was selected as the favorable culture medium. The optimal range of temperature and pH for mycelial growth on V. volvacea were 35oC and pH 6~8, respectively. Carbon sources had not an effect on 10 strains of V. volvacea, and nitrogen source for the optimum mycelial growth was yeast extract. Also, we selected GMVV 79004 as a superior strain of 10 strains V. volvacea based on the mycelial growth and yield.
Clinically isolated methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains were exposed to subinhibitory concentration of DW286, DW-224a, gemifloxacin, trovafloxacin, sparfloxacin and ciprofloxacin during 26- to 39-days period. Subculturing led to resistance development, and most of the selected mutants were above susceptible breakpoints. Selected mutants had broad cross resistance to other quinolone antibiotics and only one mutant was completely susceptible to all fluoroquinolones. Twenty five among 42 mutants revealed mutations on DNA gyrase and topoisomerase IV by sequencing. Also 16 mutants had fluoroquinolones MICs that were 4-32 times lower in the presence of reserpine. In conclusion, alterations in DNA gyrase or topoisomerase IV and action of efflux pumping out system are the resistance mechanisms of DW-224a.
항진균 활성균주를 선발하는 과정에서 DM3 균주를 대천 바닷가에서 수집된 진흙 시료로부터 분리하였으며 API 50CHB kit를 이용하여 동정한 결과 Bacillus licheniformis로 동정되었다. 이 균주는 12종의 식물병원성 진균에 대해 항균활성을 나타내었다. 감마선($^{60}Co$)을 조사하여 항진균 활성 결핍 돌연변이체(mDMB)를 유도한 후, 이차원전기영동으로 단백질을 분석한 결과 DM3와 mDM3에만 존재하는 각각 4종과 3종의 단 단백질을 확인할 수 있었다. 2-DE 결과 B. licheniformis DM3에서 spot 1은 serine hydroxymethyltransferase(45.0kDa), spot 2는 hypothetical protein(40.7 kDa), spot 3는 NifU protein homolog(15.4 kDa), 그리고 spot 4는 resolvase(12.5 kDa)와 상동성을 지닌 단백질로 동정되었고 B. licheniformis mDM3에서만 발현된 spot 5는 lysozyme(18.1 kDa)과 spot 6, 7은 alkyl hydroperoxide reductase(15.6 kDa)으로 동정되었다. B. licheniformis DM3에서 이들 단백질들의 항진균 활성 관련 여부를 규명하기 위해서 더 연구가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
유기물이 많고 작물생육이 양호한 시설 및 논토양에서 우점하는 광합성 세균을 분리하여 대두박 등의 유기물질과 혼합하여 혼합유기질 비료를 개발하였고 상추에 대한 시용효과를 검토하였다. 광합성 세균은 시설 및 논토양에서 형태적으로 가장 분포도가 많은 균주를 선정하고 이를 SA16 균주로 명명하였다. 선발된 균주는 폭 $0.5{\sim}1.2{\mu}m$, 길이 $2{\sim}2.5{\mu}m$의 간균 혹은 구균에 가까운 형태로 관찰되었으며 16S rDNA 분석으로 1.3 kb DNA 단편을 얻어 염기서열을 분석한 결과 Rhodobacter sp.와 가장 유사한 것으로 나타났다. 질소기준으로 토양 검정시비 처리구와 동량인 혼합유기질비료 0.90 Mg $ha^{-1}$ 처리구는 대조구 보다 주당 엽수는 2장 정도 많았고 뿌리길이도 2 cm 정도 길었다. 혼합유기질 비료 시용량별 수확량은 $0.90{\geqq}0.45>1.35Mg\;ha^{-1}$ 순으로 많았으며 5% 수준에서 처리간에 유의성이 인정되었고 최대 수확량을 얻을 수 있는 적정 시용량을 2차 회귀곡선($y=-0.0008x^2+0.1174x+21.332,\;R^2=0.9951$)으로 구한 결과 0.72 Mg $ha^{-1}$로 나타났다. 수확 후 토양 공극율은 혼합유기질 비료1.35 Mg $ha^{-1}$ 처리구가 58.8%로 가장 좋은 것으로 나타났으며 혼합유기질 비료 처리에 따른 토양중 호기성세균의 분포는 혼합유기질 비료 0.90 및 1.35 Mg $ha^{-1}$ 처리구가 12.4, 및 $12.8{\times}10^6CFU\;g^{-1}$로 가장 높았다.
면역 활성능이 높은 균주로 선발된 Streptococcus macedonicus LC743를 이용하여 모짜렐라 치즈를 제조하기 위해 배양온도별($32^{\circ}C$, $35^{\circ}C$), 균주의 접종량 별(1.0%, 2.0%)로 모짜렐라 치즈를 제조하여 일반성분, 균수, 총고형분 및 수율 및 면역 활성을 측정하여 최적조건을 설정하였다. S. macedonicus LC743 균주를 이용하여 치즈 제조 시 2.0% 접종하여 $32^{\circ}C$에서 배양할 경우 가장 제조 시간이 단축되었고, 가공적성 및 면역활성이 우수하였다.
벼 도열병은 벼를 재배하는 지역에서는 가장 중요한 병 중 하나이다. 특히, 벼 도열병균은 기주인 벼와 Gene-for-Gene 상호작용이 적용 가능한 대표적인 모델 식물병원성 곰팡이다. 우리나라는 1980년 이래로 벼 도열병균의 레이스를 분석하기 위해 8개의 판별 품종을 이용한 시스템을 구축하여 분류하였다. 그러나 이 판별 품종이 어떤 저항성 유전자를 가지고 있는지에 관해 명확한 정보가 없어 새로운 레이스의 출현이나 병 저항성 붕괴 등에 대하여 과학적인 분석이 어려웠다. 최근 병원균의 레이스와 벼의 저항성 유전자의 상호작용 이해를 돕기 위해 LTH 품종에 단인자 저항성 계통을 각각 다르게 도입한 판별시스템이 개발되었다. 본 연구에서는 우리나라의 1995년부터 2015년까지 분리된 4개의 다른 레이스 KI101, KI201, KI401 및 KJ101로부터 총 50개 균주를 선발하여 LTH 품종에 기반한 단인자 저항성 계통에 접종하여 그 결과를 이전 레이스와 비교 분석해 보았다. 그 결과 한국형 판별시스템으로 분류된 동일 레이스내의 균주들이 단인자 계통에서 서로 다른 반응을 보였다. 이 결과 동일 레이스에 속하는 균주들이 서로 다른 비병원성 유전자를 지닌 것을 의미하며, 더 나아가 새로운 저항성 벼 품종 육종에 유용한 정보를 제공하기 어려울 것으로 추정되었다. 이 연구 결과 현재의 판별시스템과 더불어 단인자 저항성 품종을 통한 판별시스템 도입이 요구되었다. 이 연구 결과는 향후 한국의 판별시스템 개발에 기초 자료로 활용 될 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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