In order to select multifunctional powerful antagonistic biocontrol agent against red-pepper rotting fungi Phytophthora capsici, we isolated an indigenous antagonistic bacterium which produces antifungal substances and siderophores from a local soil of Kyongju, Korea. The isolated strain was identified as Pseudomonas fluorescens biotype F. The antibiotic produced from P. fluorescens 2112 inhibited hyphae growth and the zoospore germination of Phytophthora capsici. The favorable carbon, nitrogen source and salts for the production of antibiotic from P. fluorescens 2112 were glycerol, beef extract and LiCi at 1.0%, 0.5% and 5 mM, respectively. And antagonistic activity of P. fluorescens 2112 was confirmed against P. capsici in vivo.
고추 역병균에 대한 Pseudomonas속 및 Bacillus속 길항미생물을 역병균과 동일한 서식처인 근권에서 분리하고자 4지역의 고추재배지에서 건전고추의 근권토양을 채취하여 선택배지를 사용하여 분리하였다. Pseudomonas속 237개 Bacillus속 260개 총 497개 균주중 327개 균주는 역병균에 대해 거의 활성이 없거나 역병균의 균사생장을 20$\%$ 이하로 억제시켰으나, Pseudomonas속 8균주와 Bacillus속 4균주는 50%이상 역병균의 균사생장을 억제시켰다. 이들 균주의 활성은 V-8 juice agar보다 TSA에서 높았으며, TSA에서 역병균의 균사생장을 60$\%$ 이상 억제시키는 균주를 선발하여 API system을 사용하여 P. cepacia (P0704, P1201), B. polymyxa (B1101) 및 B. subtilis (B1901)로 동정하였다. 이들 균주의 배양여액은 고추역병균의 유주자발아 및 균사생장을 억제시켜 항균성물질을 생성분비하는 균주로 판단되었다. 고추 역병발생 억제효과를 조사한 결과 P0704가 46.7$\%$ 로 가장 높았으며, 나머지 균주는 26.7$\%$ 에서 13.4$\%$ 로 나타났다.
고추역병균(疫病菌)인 Phytophthora capsici에 대한 생물학적(生物學的) 방제(防除)를 위하여 Pseudomonas sp. A-183균주(菌株)의 배양액(培養液)으로 부터 3가지 화합물(化合物)을 분리(分離) 정제(精製)한 후(後) 항균활성(抗菌活性)을 조사(調査)하여 미생물농약(微生物農藥)의 개발(開發)에 대한 가능성(可能性)을 검정(檢定)하였다. 배양여액(培養濾液)을 pH 2로 조정하여 ethyl acetate로 추출(抽出)한 경우에 항균활성(抗菌活性)이 가장 높았으며, 조추출물(粗抽出物) $50mgkg^{-1}$의 농도(濃度)에서도 P. capsici의 생육(生育)을 완전히 억제(抑制)시켰다. 배양여액(培養濾液)으로 부터 백색분말상(白色粉末狀)의 A물질(物質), sticky oil상狀(의) B물질(物質) 및 황색(黃色) 분말상(粉末狀)의 C물질(物質)을 분리(分離) 정제(精製)하였다. A, B 및 C물질(物質)의 P. capsici에 대한 항균력(抗菌力)의 최소저해농도(最小沮害濃度)는 각각(各各) $1mgkg^{-1}$, $5mgkg^{-1}$ 및 $5mgkg^{-1}$으로 나타났다. 세가지 물질(物質) 모두 pot시험(試驗)에서 P. capsici에 의한 고추역병(疫病)을 효과적(效果的)으로 방제(防除)하였다.
Trichoderma harzianum 은 식물의 뿌리주변에 살아가는 근권미생물 중의 하나로 여러 가지 식물에 생육을 촉진하며 식물의 병저항성을 증강시킨다. 본 연구로부터 선발된 T. harzianum MPA167은 보리의 근권 등으로부터 분리된 183종의 트라이코데르마 균주로부터 선발되었으며 고추역병균인 Phytophthora capsici에 대한 억제효과가 우수함을 구명하였다. T. harzianum MPA167균주는 23s rDNA ITS sequences 분석 결과 T. harzianum 으로 동정하였다. 본 균주($1{\times}10^6$ spores/ml)의 처리는 고추역병의 방제에 가장 효과적이었으며 이 균주가 생산하는 휘발성 생육촉진물질은 담배 및 애기장대 식물의 생육을 크게 증가 시켰다. 또한 본 균주의 처리로 고추의 생육촉진과 유도저항성이 발현되었다. 이와 같은 결과로 보아 본 선발 균주인 T. harzianum MPA167는 작물의 생육촉진과 생물방제를 위한 친환경 농자재로의 활용이 가능 할것으로 생각된다.
하남성지역의 고추역병 발병포장 건전한 고추뿌리와 근권토양에서 세균 507균주를 분리하였는데, 그중에서 고추역병균에 길항효과가 우수한 G28-6, G28-5, I7-6과 H14-1균주를 선발하였다. In vitro에서 선발된 균주들은 고추역병균의 균사생장, 유주자낭과 유주자 형성, 그리고 피낭포자의 발아를 현저하게 억제하였고, Pot시험에서 선발된 균주 모두 70% 이상의 방제효과를 나타냈고, 포트시험에서 방제효과가 우수하였던 G28-6균주는 고추역병 자연발생 비닐하우스에서 79.4%의 방제가를 보여 공시된 화학농약 80% Mancozeb 보다 훨씬 높은 방제효과를 보였다. 뿐만 아니라 선발된 4균주 모두 in vitro에서 우수한 근권정착능력을 보였다. 고추역병 방제에 우수한 길항세균으로 선발된 G28-6균주의 16S rRNA gene 염기서열분석과 그의 형태적, 생리적 특성들을 Bergey's manual of Systematic Bacteriology를 기준으로 비교하여 Pseudomonas aurantiaca로 동정하였다.
Plasma reactor was used for the inactivation of Phytophthora capsici which is phytophthora blight pathogen in aquiculture. Effects of first voltage, second voltage, air flow rate, pH, incubation water concentration were examined. At the low $1^{st}$ voltage, under 80 V, the lag phase was noticed within 30 sec, however, it was not shown over 100 V. The variation of optimum operation condition was not shown by the variation of microorganisms. However, the inactivation rate was different by the variation of species of microorganisms. The inactivation rate and efficiency were increased by the increase of $2^{nd}$ voltage. The highest initial inactivation rate was shown at pH 3 and the rate was decreased by the increase of pH. The inactivation rate increased by the increase of air flow rate, however, it was shown as similar at the rate of 4 L/min and 5 L/min. The inactivation rate was distinctly decreased at the three times concentration of incubation solution comparing at the distilled water and basic incubation solution.
Phytophthora capsici는 고추에 역병을 일으켜 우리나라뿐만 아니라 전 세계적으로 심각한 피해를 주는 대표적인 식물병원균이다. 최근 환경문제로 화학 농약을 대체하여 유용미생물을 이용한 생물학적 방제가 가장 바람직한 방제 방법으로 대두되고 있다. 본 연구에서는 고추역병에 피해를 보이지 않는 건전한 고추재배지 근권에서 토양시료를 채취하여 토양근권세균을 분리하였다. 총 360여점의 미생물 콜로니를 분리하였으며, 이들 콜로니의 색깔과 모양 등의 형태학적 특징을 기준으로 총 12개의 그룹으로 재분류하였다. 그 중 항균작용을 알아보기 위해 실시한 in vitro 실험에서 고추역병균에 길항효과를 보인 GJ-1, GJ-11, GJ-12 균주를 분리하였으며 길항효과가 없는 균주 2개(GJ-4, GJ-5)를 대조군으로 선발하였다. 선발된 5균주에 대하여 sidero-phore의 활성을 검정한 결과 GJ-1과 GJ-5 두 균주가 CAS 배지에서 orange halo zone을 크게 형성하여 siderophore를 많이 분비하는 균주로 확인되었다. 그리고 토양중의 난용성 인산염을 가용화시켜 식물의 생장촉진효과를 보이는 phosphate solubilization 활성을 검정한 결과 GJ-1, GJ-5, GJ-12 균주가 난용성 인산염에 대한 분해능력을 나타내었다. 따라서 P. capsici에 강한 항균활성을 나타내며 siderophore를 생산하고 인산가용화 능력이 뛰어난 유용미생물 GJ-1을 최종적으로 선발하였다. 최종 선발된 GJ-1균주를 동정하여 Bacillus sp.로 명명하였다. Bacillus sp. GJ-1의 길항작용은 Rhizoctonia solani, Pythium ultimum, Fusarium solani에 대한 식물병원성 진균에서도 좋은 효과를 나타내었다. 따라서 Bacillus sp. GJ-1은 생물학적 방제제로 고추역병균을 포함하여 다른 토양 식물병원성 진균 방제에 이용 가치가 있을 것으로 판단된다.
딸기 근권에서 분리한 내생균 중 고추역병균 방제 및 고추생육촉진 효과가 우수한 균주를 선발하였다. Pseudomonas fluorescen EP103으로 명명된 내생균주는 다른 내생균주와 비교하여 식물의 뿌리 길이와 생체 중이 크게 증가하였다. 고추역병에 대한 온실검정에서 EP103처리는 방제가 78.7%을 나타냈으며 항균력 실험결과 고추역병균을 직접 억제하지는 않았다. EP103이 처리된 고추에서는 PR1, PR10등의 병저항성 유전자가 발현되었으며 EP103의 PCR분석 결과 피올테오린, 파이로니트린, 하이드로젠 싸이아나이드, 오르화미드 등의 유용유전자를 함유하고 있음이 밝혀졌다. 따라서 본 균주는 고추역병의 생물 방제용으로 활용할 가치가 있는 것으로 판단된다.
고추역병균(Phytophthora capsici)의 성장을 in vitro에서 저해하는 길항균 Bl4를 한국토양으로부터 분리 동정하여 Enterobacter속임을 밝혔고 Pl::Tn5 lac에 의해 transposon돌연변이를 유기하여 길항력 강화주와 약화주들의 염색체내에 Tn5 lac이 각기 상이한 위치에 무작위로 삽입되었음을 southern hybridization에 의해 확인하였다.
Bacillus velezensis HKB-1가 표고버섯 수확후배지 퇴비로부터 분리되었으며 고추역병균(Phythopthora capsici), 인삼모잘록병균(Rhizoctonia solani), 고추탄저병균(Collectotrichum coccodes) 및 시들음병(Fusarium oxysporium)의 균사체 성장을 70% 이상 억제하는 항 진균 활성을 보였다. B. velezensis HKB-1은 표고버섯 수확후배지 퇴비 물 추출물과 당밀 1% 첨가배지에서 다른 상업용 세균배지보다 10~100배 더 높은 세균증식률을 보였으며 고추 역병균의 균사체 생장을 90% 억제하였으며 고추생육 촉진효과 및 고추역병에 대하여 70% 이상의 방제효과가 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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