Yimiti, W.;Yahaya, M.S.;Hiraoka, H.;Yamamoto, Y.;Inui, K.;Takeda, M.;Tsukahara, A.;Goto, M.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제17권5호
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pp.633-637
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2004
The experiment of silage for preservation of fresh Italian ryegrass (Lolium multiflorum) was carried out to examine whether the fermentation quality and microbial degradation in the rumen can be altered by the treatment of amino acids fermentation byproduct (AFB). The plant was ensiled for 40 days with 4 treatments of different ratios of AFB and sugarcane molasses (SCM) mixture. The treatment 2 (T2, AFB:SCM=100:0) and treatment 3 (T3, AFB:SCM=40:60) silages showed higher (p<0.05) concentrations of lactic acids, lower (p<0.05) pH and dry matter (DM) losses than the Control (T1, none additive) and treatment (T4, AFB:SCM=0:100) silages. The treatments 2 and 3 contained higher (p<0.05) DM and crude protein contents in silages compared to treatments 1 and 4 silages. The NDF, ADF and cellulose contents were also lower (p<0.05) in T2, T3 and T4 silages than T1 silage and fresh material before ensiled. The in situ rumen DM, NDF, ADF, hemicellulose and cellulose degradability was also higher (p<0.05) in T2, T3 and T4 silages than T1 silage, while the highest improvement was achieved with addition of AFB:SCM at level of 40:60 at ensiling. The result in this study indicates that the addition of AFB and SCM additives improved the silage fermentation and cell wall degradability of Italian ryegrass silage.
Aflatoxin $B_1(AFB_1)$ is a potent hepatotoxic and hepatocarcinogenic mycotoxin in human beings. It is accumulated in animal tissues and injured cell through variable metabolic pathway. This study was conducted to determine the effect of antioxidant vitamins on liver function enzymes and hepatic damage of $AFB_1$ treated mice. The 6 weeks old male ICR mice were randomly separated 6 groups, vehicle solvent or vitamin C(10 mg/kg/day) and vitamin E(63.8 mg/kg/day) were administered by intraperitoneal(i.p.) injection and 1 hr later, vehicle solution(DMSO) or $AFB_1$(0.4 mg/kg) were injected. The results obtained as follow ; The levels of liver function enzymes such as GOT, GPT, LDH, and alkaline phosphatase, in sera of mice were remarkably elevated by treatment with $AFB_1$ only. However, those enzymes were significantly alleviated by co-treatment with antioxidant vitamins(p<0.01). Especially the levels of LDH and ALK phosphatase were similar to those of control groups(p<0.01). The transmission electron microscopy(TEM) image of intracellular microrganelles on the liver cell of mice was also degenerated extremely by treatment with $AFB_1$, but vitamin C and vitamin E gave good effects on cellular deformation. The intracellular microrganelles such as mitochondria, endoplasmic reticulum, nucleus and nucleic membrane were nearly disappeared the cellular deformation by antioxidant vitamins co-administration. With above results, we could estimated that antioxidant vitamins blocked AFB1 induced hepatic cell damage.
Aflatoxins are produced mainly by Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus that grow in improperly stored cereals. Aflatoxin B1 ($AFB_1$) is a potent hepatocarcinogen in a variety of experimental animals including human beings. In spite of a high attention to the hepatocarcinogenecity of $AFB_1$, the relative toxicity of aflatoxins ($AFB_2$ and $AFG_1$) is not fully clarified. Sprague-Dawley male rats were orally administered with $AFB_1$, $AFB_2$, and $AFG_1$ at the dose of 250 ${\mu}g/kg$ (additionally including a dose of $1250{\mu}g/kg $ for $AFB_1$) body weight. Animals were then killed at 12, 24 or 48 hrs following aflatoxin exposure. Subsequently the immunohistochemical examination of p53, cytochrome p450 1A1 (CYP450 1A1), and glutathione-S-transferase placental form (GST-P) were performed. The level of the 8-OxodG in the liver was determined. Expressions of CYP450 1A1 and p53 were high in the liver of rats through 48 hrs after treatment of $AFB_1$ at the single dose of $250{\mu}g/kg $. This pattern was more clear as increasing doses. The treatment of $AFB_2$ and $AFG_1$ did not affect the expression of CYP450 1A1 but it caused weak expression of p53. The activity of GST were not found in the liver of rats treated with aflatoxins. The formation of 8-OxodG by $AFB_1$ increased in a dose-dependent manner up to 24 hrs after a single treatment of $AFB_1$ thereafter decreased to the level of control. The treatment of $AFB_2$ and $AFG_1$ did not affect the levels of 8-OxodG in the liver of rats with increasing time. These results in the present study indicate that $AFB_1$ among aflatoxins with low comparable levels is the most toxic as determined by early biomarkers such as CYP450 1A1, p53, GST-P, and 8-OxodG.
The objective of this study was to evaluate the quality of five commercial enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kits (A, B, C, D, and E) from different suppliers for detecting aflatoxin $B_1$ ($AFB_1$). $AFB_1$-free corn samples supplemented with different levels of $AFB_1$ (5, 10, and $20{\mu}g/kg$) were used as positive controls and 6 replicates of each control sample were tested to evaluate the accuracy and precision of these kits. In addition, we also evaluated the performance of these ELISA kits for $AFB_1$ in 30 feed samples, including corn, distillers dried grains with soluble, wheat samples, soybean meal, and poultry feed, which were verified by high performance liquid chromatography. Results showed that the coefficients of variation ranged from 1.18% to 16.22% in intra-plate and 2.85% to 18.04% in inter-plate for the determination of $AFB_1$. The half maximal inhibitory concentration for five kits ranged from 3.72 to $7.22{\mu}g/kg$. The quantitation limits of $AFB_1$ were all under the legal limit in China but somewhat inconsistent with kit instructions. Although the recovery rate of four of the five kits were either less than 90% or more than 110%, all these values were acceptable in practice. Two kits had high false positive rates (C and E). In conclusion, our results revealed that the qualities of five tested ELISA kits were significantly different.
Li, Y.;Ma, Q.G.;Zhao, L.H.;Guo, Y.Q.;Duan, G.X.;Zhang, J.Y.;Ji, C.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제27권6호
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pp.907-915
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2014
Alpha-lipoic acid (${\alpha}$-LA) is not only involved in energy metabolism, but is also a powerful antioxidant that can protect against hepatic oxidative stress induced by some drugs, toxins, or under various physiological and pathophysiological conditions. Here, we investigated the effect of ${\alpha}$-LA against liver oxidative damage in broilers exposed to aflatoxin $B_1$ ($AFB_1$). Birds were randomly divided into four groups and assigned different diets: basal diet, 300 mg/kg ${\alpha}$-LA supplementation in basal diet, diet containing 74 ${\mu}g/kg$$AFB_1$, and 300 mg/kg ${\alpha}$-LA supplementation in diet containing 74 ${\mu}g/kg$$AFB_1$, for 3 weeks. The results revealed that the addition of 300 mg/kg ${\alpha}$-LA protected against the liver function damage of broilers induced by chronic low dose of $AFB_1$ as estimated by a significant (p<0.05) change in levels of plasma total protein, albumin, alkaline phosphatase and the activities of liver glutamic-oxalacetic transaminase and glutamic-pyruvic transaminase. The histopathological analysis also showed that liver tissues were injured in the $AFB_1$ diet, but this effect was alleviated by the addition of 300 mg/kg ${\alpha}$-LA. Additionally, $AFB_1$ induced a profound elevation of oxidative stress in birds, as indicated by an increase in malondialdehyde level, a decrease in glutathione peroxidase activity and a depletion of the glutathione content in the liver. All of these negative effects were inhibited by treatment with ${\alpha}$-LA. Our results suggest that the inhibition of $AFB_1$-induced excess production of lipid peroxides and the maintenance of intracellular antioxidant status may play important roles in the protective effects of ${\alpha}$-LA against $AFB_1$-induced oxidative damage in the liver.
김치의 발효와 숙성 에 관여하는 2종의 유산균과 3종의 유제품으로부터 분리된 유산균을 Caco-2 세포 부착성과 $AFB_1$ 흡착능에 대해 비교 검토하여 보았다. 또한 유산균을 생균군, 열처리군, 강산처리군으로 나누어 유산균의 부착성 및 흡착력이 세포벽의 구조와 관련이 있다는 보고를 재확인하고자 하였다. L. plantarum KCTC 3099의 경우 Caco-2 세포 부착성이나 $AFB_1$ 흡착능이 높게 나타났으며 이것은 양성 대조군으로 사용된 L. rhamnosus GG와 유사한 수준을 나타내었다. 하지만 L. mesenteroides KCTC 3001은 Caco-2 부착성은 다소 높게 나타났으나 $AFB_1$ 흡착능은 낮게 나타났다. 이것은 Caco-2세포에 결합하는 부위와 $AFB_1$에 결합하는 부위가 일치하지는 않는다는 것을 암시하는 것으로 사료된다. 또한 유산균의 처리방법에 따라서도 다양한 차이를 보였는데 본 실험에서는 강산처리군의 경우 보다 효과적인 것으로 나타났으며 세포벽의 주된 구조인 peptidoglycan과 polysaccharides이 강산의 처리에 의해 결합이 파괴되면서 Caco2 세포 부착성이나 $AFB_1$ 흡착능의 상승에 영향을 미쳤으리라 여겨진다. 하지만 강산처리에 의한 세포벽의 변화는 비특이적으로 발생하기 때문에 동일한 형태로 모든 유산균에 적용 되기는 어려울 것이며 각 유산균종의 세포벽 구조와 특이 성분의 함량에 따라 다양하게 변화가 일어날 것으로 사료된다.
항돌연변이원성 물질을 탐색하기 위하여 $AFB_1$, B(a)P의 돌연변이원성에 대한 95종 생약재 열수 추출물의 효과를 SOS Chromotest를 이용하여 검색하였다. $AFB_1$의 변이원성을 26%이상 억제시킨 생약재는 익모초와 지실이었으며, B(a)P의 변이원성을 26%이상 억제시킨 생약재는 건부자 외 7종이었다. 두 종류의 변이원 모두에 대하여 억제활성을 나타낸 생약재는 시호, 현호색, 천마, 강활, 반하, 지실, 행인 및 숙지황이었다. $AFB_1$의 변이원성을 26%이상 상승시킨 생약재는 계피 외 45종이었으며, B(a)P의 변이원성을 26%이상 상승시킨 생약재는 연자육과 감국이었다. 생약재의 열수 추출물은 $AFB_1$으로 유도된 변이원성을 대부분 증가시켰으나 B(a)P의 변이원성은 증가시키지 않았다. 두 종류의 변이원성을 모두 뚜렷하게 증가시킨 생약재(감국, 계피, 향부자, 삼백피, 패장, 관동화, 적하수오, 측백옆)의 열수 추출물 그 자체는 변이원성을 나타내지 않았으므로 변이원성 유발을 도와주는 보돌연변이 활성을 나타냈다. Ames test에서도 강활, 정향, 황금을 제외한 생약제에서 SOS Chromotest와 유사한 결과가 얻어졌다.
PCR을 이용한 임상가검물 중에서 보편화된 객담 이외에 미량의 각종 체액과 임상에서 많이 실시하지 않는 파라핀 포매 조직에서의 결핵균 검출을 실험하여 그 활용 가능성을 규명하고자 하였다. 임상가검물인 체액 65예는 항산성 염색과 배양검사, PCR을 실시하였고, 파라핀 포매 조직 50예는 항산성 염색과 병리조직학적 진단, PCR을 실시하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 본 실험 검체 중 임상가검물인 체액에서 항산성 염색 음성인 검체 중 12.1%,배양검사에서 음성인 검체 중 3.7%에서 PCR 양성의 결과를 보였고, 파라핀 포매 조직에서는 항산성 염색 음성인 검체 중 20.0%에서 PCR양성의 결과를 얻어 PCR이 민감도와 특이도가 높음을 확인할 수 있었다.
본 실험은 알코올 발효사료 처리에 따른 in vitro 발효 pattern의 변화를 검토하기 위하여 반추위내 ammonia, pH, alcohol 및 volatile fatty acids 농도와 NDF 분해율에 미치는 영향을 구명하고자 실시하였다. 비지박 알코올 발효사료(AFS)는 비지박(DM 20%)과 시판중인 배합사료(DM 87%)를 각각 50:50의 비율로 혼합하고 당밀 5%, yeast 0.5%를 첨가한 후 $30^{\circ}C$에서 24시간 혐기적으로 배양하여 제조하였으며, 맥주박 알코올 발효사료(AFB)는 맥주박(DM 25%), 비지박(DM 20%), 옥분 및 시판중인 배합사료를 각각 25:25:25:25의 비율로 혼합하고 당밀 5%, yeast 0.5%를 첨가한 후 제조하였다. 시험구 처리는 배합사료를 급여하는 대조구(control), 비지박 및 맥주박 알코올 발효사료(AFS구 및 AFB구)를 첨가하는 처리구를 각각 AFS 및 AFB구로 나누어 실시하였다. 조사항목은 배양 0, 2, 4, 6, 8 및 12시간별로 배양액을 채취하여 배양액의 alcohol 농도, ammonia 농도, pH, VFA 농도 및 NDF 분해율의 변화를 조사하였다. 배양액의 ammonia 농도는 배양 2시간에 대조구 11.84 mg/dl 보다 AFS구 및 AFB구에서 각각 12.47 및 12.85 mg/dl로서 높은 결과를 보였다(p<0.05). 배양 6시간까지의 pH는 대조구보다 AFS 및 AFB구가 현저히 높게 나타났으며, 배양시간이 경과하면서 AFS 및 AFB구들이 대조구에 비해 낮아지는 것으로 나타났다(p<0.05). 배양액의 알코올 농도는 AFS 및 AFB구에서 배양 12시간에 대조구보다 각각 43.9 및 48.0%씩 증가하는 것으로 나타났다(p<0.05). Acetate 농도는 배양시간이 경과함에 따라 대조구는 빠른 속도로 감소하였으며 AFS 및 AFB구들은 다소 감소하는 결과로 나타났다. Propionate 및 Butyrate 농도는 배양 전기간동안 대조구보다 AFS 및 AFB구에서 현저하게 낮게 나타났다(p<0.05). 배양 4시간까지 NDF의 분해율은 대조구에 비해 AFS 및 AFB구가 높았으나, 배양 4시간 이후부터 대조구에 비해 AFS 및 AFB구가 낮은 결과로 나타났다(p<0.05). 이상의 결과로부터 알코올 발효사료는 반추위 내에서 반추미생물의 발효 pattern을 조절하여 주는 작용이 있는 것으로 판단된다.
In this study, the treatment of pistachio nuts by Bacillus subtilis UTBSP1, a promising isolate to degrade aflatoxin B1 (AFB1), caused to reduce the growth of Aspergillus flavus R5 and AFB1 content on pistachio nuts. Fluorescence probes revealed that the cell free supernatant fluid from UTBSP1 affects spore viability considerably. Using high-performance liquid chromatographic (HPLC) method, 10 fractions were separated and collected from methanol extract of cell free supernatant fluid. Two fractions showed inhibition zones against A. flavus. Mass spectrometric analysis of the both antifungal fractions revealed a high similarity between these anti-A. flavus compounds and cyclic-lipopeptides of surfactin, and fengycin families. Coproduction of surfactin and fengycin acted in a synergistic manner and consequently caused a strong antifungal activity against A. flavus R5. There was a positive significant correlation between the reduction of A. flavus growth and the reduction of AFB1 contamination on pistachio nut by UTBSP1. The results indicated that fengycin and surfactin-producing B. subtilis UTBSP1 can potentially reduce A. flavus growth and AFB1 content in pistachio nut.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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