두충 (Eucommia ulmoides Oliver)으로부터 항고혈압 활성을 가진 유효물질을 분리하였으며, 두충의 잎, 껍질 및 줄기를 건조한 것과, 건조한 후 붉은 것에 대하여 ACE (angiotensin converting enzyme) 저해활성을 실험하였다. 두충으로부터 분리 한 유효물질은 pinoresinol-4,4'-di-O-${\beta}$-D-glucoside (PG)와 dehydrodiconiferyl alcohol 4,${\gamma}$'-di-O-${\beta}$-D-glucoside (DAG)였으며, 이들은 각각 껍질과 잎에 많이 함유되 어 있었다. 즉 pinoresinol-4,4'-di-O-${\beta}$-D-glucoside (PG)는 자연 건조한 껍질에 135.12 mg%, 붉은 껍질에 163.94 mg%로 가장 많이 함유되어 있었으며, dehydrodiconiferyl alcohol 4,${\gamma}$'-di-O-${\beta}$-D-glucoside (DAG)는 자연 건조한 잎에 117.43 mg%, 붉은 잎에 133.93 mg%로 비교적 많이 함유되어 있었다. ACE 억제활성은 볶은 잎, 말린 껍질 및 볶은 껍질을 10 mg/ml씩 처리하였을 때, 각각 77.49, 75.52 및 75.36%의 억제효과를 나타내었으며, 두충으로부터 분리한 화합물인 pinoresinol-4,4'-di-O-${\beta}$ -D-glucoside (PG)와 dehydrodiconiferyl alcohol 4,${\gamma}$'-di-O-${\beta}$-D-glucoside (DAC)를 1${\sim}$10 mg/ml 처리하였을 때에 는 67.1${\sim}$85.25% 의 억제활성을 나타내었으며, $IC_{50}$값은 각각 0.6${\pm}$0.2, 0.5${\pm}$0.2 mg/ml 였다. 이것은 PG와 DAG가 두충에서 분리한 천연물임을 감안하면 매우 높은 활성을 가지고 있다고 할 수 있다.
We tried to introduce two forsythia genes related in lignan biosynthesis, dirigent protein and pinoresinol/lariciresinol (Ph) reductase, into potatoes for accumulation of lignans in transgenic potatoes. We made binary vectors overexpressing dirigent protein gene and P/L reductase gene driven by a CaMV35S promoter and transformed into potatoes via Agrobacterium mediated transformation. And in order to control the metabolic flux of lignan biosynthesis pathway, we tried to inhibit chalcone synthase genes of potatoes by antisense inhibition technique also. We tried to use PCR screening method for selection of transgenic plants of different vectors. We tried to determine and compare lignan contents from different transgenic potato lines.
The root of Actinidia arguta was extracted with methanol and the methanol extract was suspended in $H_2O$ and successively partitioned with n-hexane, $CH_2Cl_2$, EtOAc and n-BuOH. Repeated column chromatographic separation of the EtOAc extract resulted in the isolation of two flavonoids (compounds 2 and 3) and two triterpenes (compounds 1 and 4) and $CH_2Cl_2$, extract to afford three lignans (compounds 5-7). Their structures have been established by spectroscopic, means to be (+)-tormentoside(1), (-)-catechin(2), (-)-epicatechin(3), (+)-uscaphic $acid-28-O-[\beta}-D-glucopyranoside$(4), (+)-pinoresinol(5), (+)-medioresinol(6), and (-)-syringaresinol(7).
두충의 기능성 식품으로서 이용 가능성을 평가하기 위하여, 두충의 항고혈압 활성 물질을 분리 및 확인하였고, 각 부위별(잎, 껍질, 줄기) 추출물의 관련물질의 함량 및 ACE 저해활성을 조사하였다. 두충에서 분리한 항고혈압성 물질로 추정되는 8A는 순도 95.64%의 pinoresinol-4,4'-di-O-${\beta}$-D-glucoside(PDG)로서 자연건조 및 볶은 껍질에서 가장 높았으며, 각각 135.13 mg%와 163.67 mg%였다. 또한 두충 추출물의 ACE 저해활성은 10 mg/mL 농도로 처리하였을 때 볶은 잎, 자연건조 껍질 및 볶은 껍질에서 각각 77.56%, 75.73%, 75.73%로 높은 활성을 나타내었으며, 줄기는 상당히 낮게 나타났다. 두충에서 분리한 PDG를 1 mg/mL 처리할 때, ACE 저해활성은 91.87%로서 $Enalapril^{(R)}$의 97.06%보다는 조금 낮았지만, $Captopril^{(R)}$의 90.32% 보다는 약간 높은 항고혈압 활성을 나타내었다.
A high-performance liquid chromatography-diode array detector (HPLC-DAD) method was established for quantitative evaluation of nine constituents of Fraxinus rhynchophylla such as four coumarins, esculin (1), fraxin (2), esculetin (3), fraxetin (4), three lignans, syringaresinol 4,4'-O-${\beta}$-diglucoside (5), pinoresinol 4-O-${\beta}$-glucoside (6), pinoresinol (9), one secoiridoid, oleuropein (7), and one coumarinolignan, cleomiscosin C (8). The preferred chromatographic condition was obtained on Phenomenex Gemini-NX (3 ${\mu}m$, C18 110A, $150{\times}4.60$ mm) and the mobile phase was composed of water and acetonitrile using a gradient elution. The wavelength was set at 220 nm. Extraction condition of these constituents in F. rhynchophylla was also optimized through extraction time, extraction solvent and extraction method using established method. From this study, extraction at $70^{\circ}C$ with the mixture of ethanol and water for more than 12 h was suggested to be good extraction condition for these constituents. Quantitation of nine constituents in different F. rhynchophylla samples was also successfully accomplished with the newly established method.
The inhibitory effect of 10 lignan constituents isolated from the rhizomes of Coptis japonica var. dissects on tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ production in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated macrophage cell line (RAW264.7 cells) has been studied. Among them, pinoresinol, woorenoside-V and lariciresinol glycoside showed significant inhibitory activities in the range from 37% to 55% at the concentration of $25{\mu}g/ml.$ The results are first report that the lignans isolated from Coptis japonica inhibit TNF- ${\alpha}$${\alpha}$
We tried to introduce two forsythia genes related in lignan biosynthesis, dirigent protein and pinoresinol/lariciresinol (P/L) reductase, into potatoes for accumulation of lignans in transgenic potatoes. We made binary vectors overexpressing dirigent protein gene and P/L reductase gene driven by a CaMV35S promoter and transformed into potatoes via Agrobacterium mediated transformation. And in order to control the metabolic flux of lignan biosynthesis pathway, we tried to inhibit chalcone synthase genes of potatoes by antisense inhibition technique also. We tried to use PCR screening method for selection of transgenic plants of different vectors. We tried to determine and compare lignan contents from different transgenic potato lines.
Phomopsis sp. XP-8 (an endophytic fungus) was previously found to produce pinoresinol diglucoside (PDG), a major antihypertensive compound of Tu-Chung (the bark of Eucommia ulmoides Oliv.), which is widely used in Chinese traditional medicines. In the present study, two bioconversion systems were developed for the production of PDG in Tris-HCl buffer containing glucose and Phomopsis sp. XP-8 cells (both resting and freeze-dried). When other factors remained unchanged, the bioconversion time, glucose concentration, cell ages, cell dosage, pH, temperature, and stirring speed influenced PDG production in a similar and decreasing manner after an initial increase with increasing levels for each factor. Considering the simultaneous change of various factors, the optimal conditions for PDG production were established as 70 g/l cells (8-day-old), 14 g/l glucose, $28^{\circ}C$, pH 7.5, and 180 rpm for systems employing resting cells, and 3.87 g/l cells, 14.67 g/l glucose, $28^{\circ}C$, pH 7.5, and 180 rpm for systems employing freeze-dried cells. The systems employing freeze-dried cells showed lower peak PDG production ($110.28{\mu}g/l$), but at a much shorter time (12.65 h) compared with resting cells (23.62 mg/l, 91.5 h). The specific PDG production levels were 1.92 and $24{\mu}g$ per gram cells per gram glucose for freeze-dried cells and resting cells, respectively. Both systems indicated a new and potentially efficient way to produce PDG independent of microbial cell growth.
Nine compounds were isolated from the methanol extract of the aerial parts of Cirsium nipponicum. Their structures were identified to be phytene-1,2-diol (1), ${\beta}-sitosterol$ (2), pectolinarigenin (3), epilupeol acetate (4), 9,12-octadecadienoic acid (5), pinoresinol (6), apigenin (7), linaroside (8) and siparunoside (9) by spectroscopic means.
A lignan and four flavonoid derivatives were isolated from the aerial parts of Panicum dichotomiflorum Michaux (Gramineae) through repeated column chromatography. Their chemical structures were identified as (-)-pinoresinol (1), tricin (2), luteolin (3), luteolin-4'-O-${\beta}$-D-glucopyranosde (4) and luteolin-7-O-${\beta}$-D-glucopyranosde (5), respectively, by spectroscopic analysis. These compounds were isolated for the first time from this plant.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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